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液相保留时间大幅提前！急急急！！！
安捷伦1200，柱子型号不清楚，紫外检测器。流动相是甲醇：水=20：80，用醋酸调pH至5.9。前几个月测标准品均在11min左右出峰，峰行较好，也极少有杂峰，应该没什么问题。但昨天做突然发现保留时间刚开始提前到1min多，峰高峰面积也变得很大，但重复性较好，进3针均是如此，用5%甲醇冲洗30min后再进针保留时间在4min多，杂峰较多，峰形不好，峰面积也很大，又冲洗5h还是4min多。新手，用的别人的仪器，折腾了两天了都没整好，不会把柱子搞坏了吧，郁闷啊！！！跪求大神指点！:cry:
柱温一直是室温，离上次做隔了一周，会不会是天气温度原因对柱温影响太大？或是隔得时间太长需要多冲会柱子。 : Originally posted by dearestff at
柱温一直是室温，离上次做隔了一周，会不会是天气温度原因对柱温影响太大？或是隔得时间太长需要多冲会柱子。 可能是，所以做色谱最好是连着做。你上次做完之后有没有洗啊？我觉得你洗的甲醇的量可以提高些，比如说50%，再者洗大约半小时之后还要拿纯甲醇把柱子冲下，不然柱子容易弄坏。 : Originally posted by lww at
可能是，所以做色谱最好是连着做。你上次做完之后有没有洗啊？我觉得你洗的甲醇的量可以提高些，比如说50%，再者洗大约半小时之后还要拿纯甲醇把柱子冲下，不然柱子容易弄坏。... 做完肯定洗的。一般是做之前先用纯甲醇洗30min，再用流动相让基线走平稳。每天做完后先用5%甲醇冲洗30min，再用纯甲醇洗30min。不知道这有没有问题。 : Originally posted by dearestff at
做完肯定洗的。一般是做之前先用纯甲醇洗30min，再用流动相让基线走平稳。每天做完后先用5%甲醇冲洗30min，再用纯甲醇洗30min。不知道这有没有问题。... 你的机子是单元进样还是多元进样的？如果是多元进样的话，如果甲醇的配比变化比较大的话就可以慢慢改变配比，不然的话会对柱效有影响 : Originally posted by lww at
你的机子是单元进样还是多元进样的？如果是多元进样的话，如果甲醇的配比变化比较大的话就可以慢慢改变配比，不然的话会对柱效有影响... 甲醇和水混合后进样，应该是单元的吧 检查是否进去气泡了。洗泵头的液体也要脱气，否则保留时间容易变化。检测池气泡多容易产生鬼峰。 : Originally posted by zhenhuixian at
检查是否进去气泡了。洗泵头的液体也要脱气，否则保留时间容易变化。检测池气泡多容易产生鬼峰。 谢谢！洗液和流动相都脱气了'原来一直用都没见这个问题'这次突然出这个毛病'而且出峰确定是样品峰'包括杂峰都有重复性'郁闷啊 你的是同一个流动相吗？会不会是因为甲醇 : Originally posted by gao1261987 at
你的是同一个流动相吗？会不会是因为甲醇 是同一个流动相'配了几十次了应该不会出错'还有突然发现柱压力挺大的'原来是120bar'现在是160bar'会不会是这个问题 要配置柱温箱才好保证保留时间的重复性。
看看泵送液是否稳定，有较大压力波动也会影响保留时间
确定流动相配制方法跟以前完全一样，现配现用，避免挥发将柱子平衡30-60分钟。 楼主你是不是把色谱柱接反了或者拿错色谱柱了 : Originally posted by dearestff at
是同一个流动相'配了几十次了应该不会出错'还有突然发现柱压力挺大的'原来是120bar'现在是160bar'会不会是这个问题
... 有可能你的柱子已经损坏 : Originally posted by fofo1985 at
楼主你是不是把色谱柱接反了或者拿错色谱柱了 谢谢！柱子一直都没动过~ : Originally posted by gao1261987 at
有可能你的柱子已经损坏... 用纯甲醇冲刚开始柱压150，冲一会就降到60了'跟以前的压力一样'冲30min后换流动相'压力也不上升'一直57'稳定几分钟后进一针纯甲醇'2min时出现一个很大的峰和一些小杂峰'绝对不是甲醇'同时压力突然升至160然后一直保持不变'20min后换成5%甲醇压力仍为160不变'再换成纯甲醇冲几分钟后压力较快降至60。是不是柱子堵了？为什么流动相进一针纯甲醇会出现很多杂峰？现在正用纯甲醇冲洗。 : Originally posted by cooljojomi at
要配置柱温箱才好保证保留时间的重复性。
看看泵送液是否稳定，有较大压力波动也会影响保留时间
确定流动相配制方法跟以前完全一样，现配现用，避免挥发将柱子平衡30-60分钟。 谢谢！我也不知道是不是温度影响压力或保留时间'纯甲醇冲压力是60bar'和以前差不多'但是流动相压力160bar'比以前高30-40bar'不过挺稳定'进一针纯甲醇杂峰很多'2min还有一很大的峰。 我也做过类似的试验，碰到过相似的问题，而且我的柱子保留时间每天都有0.5min~1min的差别，主要是甲醇-水用醋酸调节PH时，PH容易波动，醋酸容易挥发，调好后最好要多测几次确认不在波动；此外甲醇和水的用称量要准确，最好每次使用前都进3针系统适用性样品，即使波动，只要波动的情况均符合规定，再进行检测也是没有问题的。 : Originally posted by 风信子1340 at
我也做过类似的试验，碰到过相似的问题，而且我的柱子保留时间每天都有0.5min~1min的差别，主要是甲醇-水用醋酸调节PH时，PH容易波动，醋酸容易挥发，调好后最好要多测几次确认不在波动；此外甲醇和水的用称量要准确 ... 谢谢！不过我的保留时间从11min提前到2min多，而且柱前压力就挺大，猜测应该是过滤白头堵了，换个新的试试，不知道能不能清理。 室温变化大不大？环境温度高了，出峰也会提前的！ : Originally posted by dyjjl at
室温变化大不大？环境温度高了，出峰也会提前的！ 谢谢！前后两次做隔了一周，而且6月份天气一直是30℃，室温应该变化也不大，而且保留时间提前了至少7min这应该不是温度引起的吧，温度影响应该不会这么大。应该是过滤白头脏了，柱前压力挺大，不接柱子只走流动相都60bar了，过了周末换个过滤白头试试。扫扫二维码，随身浏览文档
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高效液相色谱思考题与练习题
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实验一高效液相色谱仪的基本操作和柱效测定.pdf39页
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实验一 高效液相色谱仪的基本操作和柱效测定
一、 实验目的
1、 了解高效液相色谱仪的基本原理和基本结构。
2、 掌握高效液相色谱仪的基本操作。
3、 了解高效液相色谱柱评价的意义和操作。
二、 仪器及试剂
1、 Waters 515 高压泵(双泵)
2、 RHEODYNE 7725i 六通进样阀
3、 Waters 2996 二极管阵列检测器
4、 Waters Millennium32 色谱工作站
5、 甲醇(色谱纯);水(亚沸蒸馏水)
6、 萘(A.R.)
7、 烧杯、试管等
三、 基本原理
1、高效液相色谱仪是一类高效分离分析仪器,是由色谱输液系统、进样系统、柱分
离系统、检测系统及色谱工作站等部分构成。其基本工作原理是:被分析样品通过进样
阀由流动相携带进入色谱柱;在色谱柱内,每个组分存在和固定相、流动相的相互作用,
有一系列的动态平衡;由于每个组分的平衡参数各不相同,造成不同组分在色谱柱内的
差速迁移,导致各个组分的分离;由色谱柱分离的各个组分通过检测器后,经检测得到
对应的相应值;色谱工作站收集这些数据并处理形成色谱图及处理结果。
2、色谱柱是色谱实现组分分离的关键,柱效是衡量整个色谱体系性能的重要参数。
有几类参数评定色谱柱的柱效,其中最常用的是半峰宽法:2
式中 n 为柱效(理论塔板数),t为被测试样品一个组分的保留时间,W 为该组分对
应色谱峰的半峰宽。
四、 实验步骤
1、 流动相和样品溶液(萘溶液)的配制:甲醇和水分别以 0.45微米的微孔滤膜过滤
后,超声脱气 20分钟,放到色谱储液槽中。取一定量的萘以流动相溶解,并稀释
至合适的浓度(约 1毫克/毫升),以 0.45微米的微孔滤膜过滤后备用。
2、 检查高效液相色谱仪电路连接和液路连接,正确以后,打开稳压电源。待工作电压
稳定在 220伏后,依次打开柱温控
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