NORMATIVE ISPESL TUBI_图文_百度文库
两大类热门资源免费畅读
续费一年阅读会员，立省24元！
NORMATIVE ISPESL TUBI
阅读已结束，如果下载本文需要使用
想免费下载本文？
下载文档到电脑，查找使用更方便
还剩43页未读，继续阅读
你可能喜欢/>水稻插入突变库构建研究进展 ‘阎 １ 谭振波 ‘ 李 贵 　　　　　　　　　　　　　　　　　　 双勇， ２ ’ ’ 仕 ２（ 北京市农林科学院农业生物技术研究 中心 北京 １１０８ ００９ ２四川农 业大学水稻研 究所 温江 ６ １３） １０３摘要 水稻是单子叶植物基因组研究的一种模式植物 ， 其全基 因组测序 已经完成， 在此基础上开 展功能基因组的研究。水稻括入突变体库的建立是功能基 因组研 究的一个重要 内容， 在此基础 上也能进行正向遗传学及反向遗传学的研究。水稻擂入突变体库构建的方法有 ＴＤ Ａ擂入突 －Ｎ 变、 ｃ 。系统插入突变、ｏ１ 插入突变。分别介绍三种方法的原理及其在水稻突变体库构建 中 Ａ／ Ｄ Ｔｓ ７的应用和研 究进展 。 关健词 水稻 插入突变 突变体库水稻已成为单子叶植物研究的一个模式植物。 　　　　体确定基因的功能， 有正向遗传学和反向遗传学两种策略。正向遗传学是从突变的表型出发克隆到这是 因 为： １ 水 稻 基 因 组 较 小 （　Ｍ （） ４６ ｂ或 ６４ Ｍ ）＇；　 ２ ｂ［［　遗传学及基因组学方面的 ０ ＇ （） ２２ 研究取得 了 许多重要的 进展， 如高密度的遗传图 ８ 、 谱［１ Ｓ 物理 图 ５１ 谱［８全长。Ｎ （ｌｅ ｔｃＮ ） －、 ＤＡｆｌ ｎｈ　Ａ数据库［以 ｕ－ ｇ Ｄ ｌ ［ ９ ］ 及全基因组序列的获得「１　 有效的 １ ；　 ． （） ２ ３ 遗传转化技 术〔 ； ） ｍ （ 水稻基因组和其它禾本科植物如小麦、 １　 ４玉 米、 粱、甘 蔗 等 基 因 组 间 存 在 共 线 性 高发生了突变的基因， 确定该基因的功能。反向遗传 学则是从突变的基因序列出发， 鉴定该基因突变产生的突变体， 最终确定该基因的功能［ 。结构基 １ ２ １因组学的研究为反向遗传学研究提供了大量的待 鉴定的基因序列， 反向遗传学研究也成为功能基因 组研究的一个重要手段。物理、 化学诱变、 同源重 组、 基因沉默以及插人突变等方法都可以用来构建 突变体库 ， 但每种方法都有各 自的优缺点。物理、 化学诱变比较容易得到饱和突变体库， 但突变基因 的克隆要用较复杂的图位克隆法， 难以在获得全基 因组测序信息的基础上进行基因功能的研究。同 源重组是酵母和鼠类中用得比较成功的一种方法，（ ｌｅ ｔ关系。 ｃｉａ ｙ　 水稻是基因组最小的、 ｏｎ ｒ ） ｉ 进化程度 最低的禾本科植物【 。所以， ” 〕 对水稻基因组结构和功能的研究， 对其它禾本科植物的相关研究有很 大的借鉴作用。随着水稻全基因组测序工作的完成【１ ，， ． 发现新基因和认识基因的功能成为功能基 ２因组学研究的最为紧迫的任务。大规模突变体库 的构建是功能基因组研究的一个重要内容 ， 这是因 为突变体和相应的突变基因间有着直接的因果关系， 对基因功能的研究是最具有说服力的［ 。 ’ ２ 〕产生突变体的方法有物理和化学诱变、 　　　　 同源重但植物中同源重组率比 较低〔 。基因沉默在线虫 １ ２ １ 的突变体库构建中得到成功应用〔 ， ’ 但并不适合 习 于植物。可转移元件（ａ ｐ ａｅ　 ｅ ） Ｔ ｔｎ ｏｂ ｅｍｎ 或 － ｒｓｓ ｌ ｌ ｔ ｅ ＤＡ Ｎ 插人突变， 能方便地进行正向和反向遗传学的研究。从正向遗传学来看， 可以鉴定插人突变 体， 根据插人序列迅速克隆到突变基因， 确定该基 因的功能。从反向遗传学来看， 可以根据插人的已 知序列和 目的基因序列设计 Ｐ Ｒ反应引物 ， Ｃ 通过 ＰＲ Ｃ 技术从突变体库中筛选出目的基因的插人突组 （ｏｏｇ ｓ　ｏｂａ ｎ　 因沉 默 （　 ｈ ｌｏ ｒ ｍｉｔ ） 基 ｍ ｏ ｕ ｅ ｎｉ 、 ｃ ｏ ｇｅ ｅ ｎ ｓ ｎ ） 及插入突变（ ｓ ｉａｍｔｅ ｉ 等。突 ｉｃ 以 ｌｅ ｅ ｉｅ ｏ ｌ　 ｇ ｓ） ｎ ｒ ｎ ｕ ｎｓ ｔ ａ变体库就是由某种方法产生的、 包含各种不同基因 突变的群体。饱和突变体库是指理论上该基因组 的每个基因都发生 了突变 的突变体库 。通过突变收稿 日期 ： ０－ －１ 修回日期 ： ０－ － ２ ３１ ３ ０ ２ ２ ４３５ ０ ０２， 国家转基因植物专项基金资助项 目（Ｉ－－ ） ＺＹＡ０ 和国家 ８３计 ８ ６”变体〔 。 ｕ 另外， ｌ 还可以用反向 ＰＲ　 ｅｅ　 ） Ｃ （ ｖｓ ＰＲ ， ｉ ｎ Ｃ ＴＩ ＰＲ ｔｒ ｌ　 ｍｔ ｉｅａ ｄ　 ） ＡＬ Ｃ （ ｅ ａａ ｍ ｅ ｃ　ｒｃ ＰＲ等方法 －　 ｈ ｍ ｓ ｒ ｎ ｌｅ Ｃ ｙ ｉ ｔ 扩增出插人位点的侧翼序列「ｉ ｕｓ ，　 ｌ建立侧翼序列数据库， 结合结构基因组数据进行更多、 更全面的分划资助项目（ ０Ａ ２ ０２ 　　 ２ １Ａ２ １） ０ ５“ 通讯作者 ， 电子信箱 二 ｂ ｍ．ｐｂｃ．ｔ．ｅ 。 ｚ ａ ｔ ｕｈ３ｂ ｎｔ ｎ ａ析［ ‘。 ，９ ‘］ 一万方数据第 ６期阎双勇 等 ： 水稻插人突变库构建研究进展水稻插人突变库的构建主要采用 ＴＤ Ａ插人 　　　　 －Ｎ 突变、 ｃ ｓ系 统 插 人 突 变 及 逆 转 录 转 座 子 Ａ／ Ｄ（ｔｒｓｓ ）　 插人突变ｍ９。 ｅ ａｐｏ ｏ７ ｒ ｔｎｏｎＴ ｌ ｏ ｒ ｓ 〔 ０ 本文将综述 －　 １这些插入突变方法在水稻突变体库构建中的应用 及其研究进展。１　－Ｎ 　ＴＤ Ａ插入建立水稻突变库来自根癌农杆菌 Ｔ 质粒的 ＴＤ Ａ 是植物基 　　　　 ｉ －Ｎ ， 因工程和插人突变中广泛应用的一种工具川 。利对水稻成功地实现遗传转化以来， 该方法在水稻遗 传转化中得到广泛应用并不断完善， 这使建立水稻 ＴＤ Ａ插人突变体库成为可能。与拟南芥插人突 －Ｎ 变体库的构建相比． 水稻的一个困难是需要做大量 繁琐的组织培养工作。拟南芥是在开花时用农杆 菌菌液浸泡或喷洒等方法实现遗传转化的， 不经过组培过程而获得转化植株［ 。此外， ３ ３ １ 组织培养是一个容易发生基因突变的因素 ， 于是通过组织培养用 Ｔ Ｎ 插 人 突 变， 拟 南 芥 （　 ｂｏ ｉ －Ａ Ｄ 在 Ａ ｂｄ ｓ ｒ ｉｐｓ ａ ｔ ｌｎ） ｈ ｉ ａ 中已经建立了接近饱和的插人突变体库， ａａ该突变体库包含超过 ２５　 个独立的 ＴＤ Ａ插 ２ ０１ ０ ） －Ｎ 人株系， 在预测的２ ４４ ９　 个基因中有 ２ ７０ ５ １　 个基因 ０ 发生了插人突变。此外 ， 还发现 ＴＤ Ａ在其基因 －Ｎ 组中的插入位点有一定的偏向性， 偏向于发生在基 因密度较高的区域、 基因的非翻译区 （　ａｓｔ ｕｔｎ ａ ｄ ｎ ｌｅ ｒ ｅ ｏ Ｕ Ｒ 及启动子区。但是， Ｄ Ａ ｒ ｉ ，　） ｇｎ Ｔ Ｔ Ｎ 插人对特定 －建立的突变体库就可能会得到许多与 ＴＤ Ａ －Ｎ 插人 无关的突变体。逆转录转座子 Ｔｓ ｏ ７在组织培养 １ 条件下的 激活就是一个明显的例子［ 。不过这些 ｘ １在建库过程中产生的“ 副产品” 也可 以作为进一步 研究的材料 ， 例如鉴定 由 Ｔｓ７产生 的插 人突变 ｏ１体， 或者发现组织培养中其它的突变机制。 水稻中已建立了具有一定规模的突变体库（ 　　　　 表 １， ）但远没有达到饱和的程度。在建立突变体库的 基因 类别没有明显的 偏向 ［ 性［ ３ １ ； 自１ ４ 　　　　 ｉ 等［ 首次报道用农杆菌介导法 ９ 年Ｈ ｉ ‘ ９ ｅ 。 〕时 用了ｇ ｅ　 和激活标签（ ｔａ ｎ　 ｉ ） ｅ ｔｐ ｎｒ ａ ａｉｔ ｔｇｇ载 ｃ ｉ ａｎ ｖｏ ｇ 体〔 ｎ。 ３ ｉ 通过 Ｔｉ Ｃ ０ － ａ ＰＲ分析， ｌ － 得到了许多 Ｔ Ｎ －Ａ Ｄ插人株系的侧翼序列， 建立了侧翼序列数据库。裹 １ 构建的水稠擂入突变库 　　　　　　Ｔ ｂｅ　 Ｔ ｅ　ｔｂｓ ｏ ｒ 　 ｓｒ ｏ ａ ｔｇ ａ ｌ １　 ｈ ｄ ａ ａｅ　 ｉ ｉ ｅｔ ｎ ｌ　ｓ 　　 ａ ｆ　 ｎ ｉ ｅ ｃ ａ编号 报道年份 急株系数６　 　　 ９ ７ ４１ ３８ 　　 ５ ８　插 人序 列Ｔ ＤＮＡ －Ｔ ＤＮＡ －插 人 位 点侧 班 序 列数 据 库文献１　 　　　　　　　 ３ ２０ ０ ２　 　　　　　　　０ ２０ ０ ３　 　　　　　　　２ ２０ ０４　 　　　　　　　 ０ ２ ３ ０．ｐ ｔ 二 ｋ １ ／ｇ ｓ ｏ－ ｅ ｄＨ ｐ ／ ｄ ｅ ｆ６１ 　　５ ３４ ０＞ １１ Ｉ 目ｎＴ ＤＮＡ － Ｔ ＤＮ － ＡＡｅ 　　ｗ ｗ ｐ ｔ ．　 ｄｉ／ｆｄｄ ｗ ．　－ｈａ．　ｆｐ ／ｓ ‘ ｃｋ ｌ ｇ ｅ ｗ ｗ ｐｓ ．　 ｒｉ／ｆｎｄ ｗ ．　－ ａ．　ｆｐ ／ｓ ｏ ｔ ｃｋ／ ｅ ｇ ｌ ￣ ｐ．ｍ－　 ｅｕｃ／ｃｔ ａ ｏｉ ｚ ｄ ． ｒｅ ｎ ｐ． ｏｌ ｄＧ ｎ ａ ｋ Ａ ９ ３ ０ － Ｚ ２０ ３ ｅ Ｂ ｎ ： Ｚ ２ ０ ８Ａ ９ ３ ５２ １ ０ ９ ０ ９ ３ ９［０ ２１ ［１ ２１ ［２ ２１ ［３ ２１ ［６ ２１［０ ３１４ １６ ７　 ９Ｔ ．７ １ｈｐ ／ ｃ００ ａ，ａｒ． ． ／ ｉ ｏｐｂｔ １／ ｄｘｈｍ ．ｎ ｎ ： ｐ７８ ．ｂ．ｆｃｇ ｉ 一ｍｙ ／ｕ／ ｓ７ｉ ｃ ．ｔｌｅ ／ ｏｐ ａ ｏ ｎ１１　 － Ｎ ． ＴＤ Ａ插入 哭变库群体 大小及描入 哭变概 　 率估计 　　　　　　为估计饱和 －Ｎ 　　　　 ＴＤ Ａ插入突变库所需群体 大小， 这里介绍一个相关的 公式［３ ３１ ３ ， ７ｐ二１ １ ＬＣ ＂ 　　　　　　　　　　　　 一（ 一（ ｌ ） ｐ是发现任意一个基因插人突变的概率。Ｌ代表 基因的平均长度， Ｃ是单倍体基因组的大小， ｎ是ＴＤ Ａ －Ｎ 插人倾向于基因密度较高的基因组区域。 这样， 实际需要的插人突变株系数量会降低［３ ３６ ３１ ． 另外， 也可以根据这个公式估计在已经建成的突变 体库中可以多大的概率发现任意一个基因的插人突变 。１２　 －Ｎ ． 　ＴＤ Ａ擂入突变库的载体改进 最初的 Ｔ Ｎ 　　　　Ｄ Ａ插人突变载体， － 是左右边界内插人突变的株系数， 是每个株系平均插人位点 ｆ只 包含一个选择标记基因的载体［ 。在用这类载 ３ ５ １ 能得到部分基因功能缺失的 数 在 稻中 Ｃ ４ ｘ　ｐＬ ３ ，二 ． ］ 体建立的突变体库中， 。 水 ，＝ ． ｌ６，＝ｋｆ １［。 ３０ ８ ｂ ４ ７ ３突变体（ ｓｏｆ ｃｏ ｍ ｔ ｏ， ｌｓ ｆｕ ｔｎ　 ａ 但不能得到有功能 ｏ －－ｎｉ ｕ ｎ 冗余及致死效应的基因的突变体， 也很难研究具有理论上的饱和突变体库 尸值为 １实际建库中， ， 尸 可以取较大值， 来估计建库群体的大小。例如， 以 ９ ％的概率发 现任意一个基 因的 ＴＤ Ａ插人 突 ５ －Ｎ 变， 需要一个包含 ３６ ０ 个株系的突变体库。不 ０ ０（ ） 过， 这个公式是建立在 ＴＤ Ａ随机插人的基础上。 －Ｎ 但对拟南芥和水稻的 ＴＤ Ａ插人突变研 究表明。 －Ｎ高度多效性的基因州。为了弥补这方面的不足， ［ 构建出了 新的载体， ｅ ｔｐ 即ｇ ｅ　 载体和激活标签载 ｎｒ ａ体３ １　ｎｔ 载 ［３ｏ　ｅ　 体通过插人的 ７ Ｇ ｍ ． ｅ ｐ ８ 报告基因的 表达来研究被插人基因的表达模式， 而且对致死基因万方数据中国生物工程杂志第２ ４卷也可以在杂合状态下进行研究。激活标签载体， 可以产生获得功能性（ ｉｏｆ ｃｏ） ｇｎ ｆｕ ｔｎ的突变体， ａ －－ｎ ｉ 能够研究存在功能冗余或具有高度多效性以及致死效 应 的基 因的功能。Ｇｅ ｏ ｃ　ＮＡ ｎ ｍｉ ＤＥ ｈｎｅ 叩 ｎａｃ门丫几 ＥＩ ｎＴ ｈＡ ａＴ ｎＡ ｅ ｃ尸户 叫 ． ．Ｐ ｍ以改 １ ｏ ｒ 拍ＰＤ　Ａ ＳＳ　 　　　 Ｄ　ｅ Ｅｒ ｎＴ ｈＴ ｒ ａ Ａ　 ｅ ｎ 　　　　 ｃ ｅ ｐ ｏ ｔ ｒ ｒＧｎ ｔｐ包括三种形式， ｅ ａｃ ｔｐ 　　　　 ｅ ｒ ｅ　 ａ 即 ｎ ｎ ｒ　 ， ｈ ｅ ｒ ａ ｐ ｍｔ ｔｐ ｇ ｅ　 （ ）　ｅ　 是这三种 ｏ ｅｒ ｒ ｏｒ　 和 ｅ ｔｐ图１　ｎ ｔｐ ａ ｎｒ ａ ，　 ｒ ｇ ａ ｅ形式的统称。图 １ Ａ为一般情况下染色体上的基因Ｇ ｎ Ｔａ ｅｅ　 ｐ ｒ图１　ｎ ｎ ｒ　 ，　 ｏ ｒ　 及ｇｎ ｔ ｐ 　　　　ａｃ ｔ ｐｐ ｍ ｔ ｔ ｐ ｅｅ　 的示意圈 　　　　　　 ｒ ｅ ｒ Ｅｈ ｅ ｒ ｏ ａ ａ ｒ ａＦｇ１　 ｈ ｓ ｕｔｒ　 ｅｈｎ ｒ　 ｐ ｐ ｍｏｅ ｔ ｐ　ｄ　 ｅ　ｐ ｉ．　Ｔ ｅ　 ｃ ｅ ｏ ｎ ａｃ ｔ ，　 ｔｒ　 ａ ｇｎ ｔ ｒ ｔ ｕ ｆ　 ｅ ｒ ｒ ａ ｏ ｒ ａ ｎ ｅ ｒ ａ的附近引起该基因的过量表达。图 ２所示的拟南芥中 用的激活标签载体 ｐ １ ４当其插人位置和 Ｓ０， Ｋ７ 目 的基因间相距从 ３ ６ 到３ ｋ 时， ８ ｐ ． ６ 均能导致该 ０ ６表达示意图。Ｅｈ ｃ ｔｐ图１） 报告基因上 ｎａ ｅ ｒ （ Ｂ中的 ｎ ｒ　 ａ 游只有一部分启动子序列（ 如图 １ Ｂ中的 ＴＴ ＡＡ框）但单独靠它无法启动报告基因的表达， ， 或者表 达效率很低。只有当 ＴＤ Ａ插人到基因组的合适 －Ｎ 位置， 利用被插人基因的启动子， 或增强子才能使 报告基因表达。所以， 报告基因的表达与否， 一方基 的 量 达３ 因 过 表 １ ８ １Ｅｃ Ｒｌ ｏ人ｎ ｐＩＥｃ ＲＩ ．角 月ｄＩｌ ｌ面反映了 ＴＤ Ａ插人的位置， －Ｎ 另一方面反映了被 插人基因的表达特性。例如， 报告基因呈现时空特 异性表达 ， 则可以推断被插人的基因是时空特异性ｘｅ ｐｌ表达的。Ｐ ｍｔ ｔｐ 图 １　和 ｅ ａ ｅｔｐ ｏ ｅｒ ｒ ｏｒ　 （ Ｃ ａ ） ｎ ｎ ｒ　 类 ｈｃ ｒ ａ 似， 不同在于 ｐ ｍｔ ｔｐ中没有启动子部分。 ｏ ｅｒ ｒ ｏｒ　 ａ Ｇｎ ｔｐ图１ ） ｒ ｏｒ　 类似， ｅ ｒ （ Ｄ与ｐ ｍｔ ｔｌ ｅ　 ａ ｏ ｅ ｒ〕 ａ 不过在ｇ ｅ ｅ ｎ ｔｐ ｒ 中报告基因前多了个剪切接受位点（ ｌｅ ａ ｓｉ ｐｃ ａ ｅｏ ， ｃ ｐｒ 当其插人到一个基因的内 ｃ ｔ） 含子时， 能与被插人基因外显子同时转录， 被插入基因表达时， 报圈２ 拟南芥滋活标签载体ｐＫ０４ 　　　　　　　　 Ｓ １７Ｒ．２ １巴． 吐 口悯州魂 ， 幼ｒ Ａｕｉ叩 白州Ｋ ０４ ． 、 出明 助 伙 吐 ｒｂ ． ｄ １７Ｌ ：　 Ａ左边界；Ｂ ＴＤ Ａ右边界 ；ｘ　 ：个 申联的 　　－Ｎ ＢＴＤ Ｒ ：－Ｎ ４　５ ４ ３Ｓ ＣＭ ３Ｓ 　　　　　　　　　　　　　　　　　　 ． Ｖ５ 增强子序列。 Ｌ ：　Ｎ ｅ 　 ｄ ．　 ＴＤ Ａ　 ｔ　 ｅ．　 ３Ｓ 　　　　 ｌ ｂｒ ｒＲ ；－Ｎ ｒｈ ｂｒ ｒ ４　５ ： Ｂ ＴＤ Ａ　 ｏ ｅ Ｂ － ｔ ｆ ｉ ｏ ｇ ｄ ｘ　 ＣＭ ３Ｓ　 ａｃ，　 ａ 　　　　　　　　　　　　　　　　　　 ． Ｖ ５ ｅｈｎｅ ． ｍ ． ｎ ｌ ａ告 因 能 达３ 基 也 表 １ ７ １激活标签则是在靠近 ＴＤ Ａ边界处有四个串 　　　　 －Ｎ 联的 ＣＭ ３Ｓ ａ Ｖ ５ 增强子（ ２ ． 图 ）当其插人到一个基因万方数据第６ 期阎双 勇 等 ： 稻 插 人 突 变 库 构 建研 究 进 展 水２　 ｃ Ｓ 　Ａ ／ 系统插入建立水稻突变体库 Ｄ联的 ＣＭ ３Ｓ启动子的应用导致了 Ａ 发生早期 ａ Ｖ５ ｃ转座及拷贝数的扩增。在许多 Ａ 插人株系中，ｃ ｃ Ａ 　　　　 Ａ／ｓ ｃ 系统是玉米中的一个转座子（ａ ｐ ｏ） 的平均拷贝数为４ Ｄ （　 ｏ ｎ　 ｔｎ ｓ ｒｓ 。该群体有 １％到 ５％的插人 ５ ０ 家族。该家族的自主元件是 Ａ ， ｃ它包含和转座相 位点 ， 在后代中又会发生转座。插人的位点偏向于 关的酶， 能使 Ａ ，　 ｃＤ 元件发生转座。而 Ｄ 是一种 ｓ ｓ 预测的基 因区域 。用反 向 Ｐ Ｒ的方 法扩增 出了插 Ｃ 非自主元件， 它单独不能发生转座， 可以利用 Ａ 的 ｃ 人位点 的侧翼序列并提交到 了 Ｃｎａｋ Ｃ ｃ ｅＢｎｏ　 ｏ ｍ 转座酶发生转座。Ａ ／， ｃＤ 系统的转座是通过剪切／ 等［利用。 ａ ｅ ｒ 载体建立了Ａ Ｄ插人突 ． １ ｎ ｎ ｒ　 ｈ ｃ ｔｐ ａ ｃｓ ／ 变 粘贴的机制进行的。在后代中， 由于 Ａ／ｓ ｃ 元件的 Ｄ 体库， 该群体中６ ％的 Ｔ 代植株表现出了转座活 ２ Ｏ 重新转座， 、 Ｄ Ｉ Ｃ Ａ 元件在原插人位点发生切除， 原 性，２ ９ ％的 Ｔ 代有转座活性 ， ％的 Ｔ ，３ １ ７ ０ ２Ｔ 植株 Ｄ ｓ 插人失 活基 因恢 复原来 的功 能， 产生 回复突变。 失去了转座活性。大约 １％的 Ｄ 有拷贝数的扩 ０ ， Ａ／ｓ ｃ 还可以在一个遗传位点附近发生多次插人， 增。对 Ｔ 代植株插人位点侧翼序列进行分析， Ｄ １ 结 产生位点特异性突变。这样 ， 当插人发生在基因间 果表明 Ｄ 的插人倾 向于基因密度较高的区域。 ， 区域时， 可以得到原插人位点附近基因的插人突 ３　ｏ１ 建立水稻突变体库 　　　　　　　　　　　 Ｔｓ ７ 变， 还可以得到一个基因的多个突变的等位基因。 其它的植物中研究得如此清楚的转座子家族还很 逆转录转座子是真核生物中广泛存在的一种 　　　　 少。目 把 Ａ／ｓ 前， ｃ 系统已成功地转到拟南芥、 Ｄ 水 可转移元件。在植物中它们常以高拷贝数出现， 植 稻、 番茄 、 胡萝 卜 等其它植物中， 构建插人突变体库 物基因组的大部分由它们构成。不过， 在正常条件并 行 因 能 研 【 。 进 基 功 的 究” ， 州若将 Ａ 导人基因组中， 　　　　 ｃ 在构建载体时将 Ａ 置 ｃ 于启动子和报告基因间， 这样转座子的转座可以由下它们是失活的［ ｏ　 １ 是水稻中的一种逆转 ｓ Ｔ ７ ３ ｏ １　 ｓ 录转座子， 它属于长末端重复（ｎ ｔｍ ａｒｅ ） ｌｇ　 ｉｌ　ａ ｏ ｅ ｎｅ ｔ ｒ ｐ逆转录 转座子里的Ｔ１ｏ。 ［ 。 Ｙ－ｐ 类型． 在正常生长 ｃｉ １条件下是不转座的， 拷贝数很低， 在不同的水稻品 种中有 Ｉ ５ 一 个拷贝。在组织培养的条件下， 可以 发生转座， 但其后代在正常条件下种植时，ｏ１ Ｔｓ ７又Ｇ Ｓ（－ｕ ｒ ｉｓ ）或 ＧＰ（ｒｎ　ｏｓｎ Ｕ （ ｌｕ ｎ ａ ３ ｃ ｄｗ ｇ ｏ Ｆ ｇｅ ｆ ｒｃ ｔ ｅ　 ｕ ｅ ｌｅ ｐｔ ） ｏｎ ｒ ｉ 等报告基因的表达来发现［＜。也可以将 ｅ ．， ， １Ｄ 转到水稻基因组中， 、 不过这时得有 Ａ 的转座酶 。 共转化，。 Ｄ 才能发生转座， 同样可以利用报告基因 来监测 Ｄ 的转座； ｓ 如果没有转座酶共转化， 则将含 Ｄ 的转基因株系和含 Ａ 或其转座酶的株系杂交， ， ｃ 后代中会发生 Ｄ 的转座。Ａ 转到水稻基因组后， ｓ 。重新失活［ 。 ． 它的转座是通过复制／ １ 粘贴的机制进行， 使其 拷 贝数 增 加 ， 不会 发 生 回复 突 变。 会 但Ｔｓ７ ｏ１ 的拷贝数随着组培时间的增加而增大， 可以 通过对组培时间的调节来控制它的拷贝数。Ａｉ ｋ ｏ它在连续几个世代仍有转座活性Ｊ．， ．） ． 这样可以 得到更多的插人突变位点。但 Ｄ 的情况有些不同， ｓＭ ａ等（报道他们已经用梗稻品种日 ｉｏ ｗ ｙ １ 本晴建立了一个包含４ １ 个株系的 Ｔｓ 插人突变体库。 ７％ ｏ１ ７ 据估计平均每个株系大约有 １ 个插人位点， ０ 这样 该群体总共有约５０ ０ 个插人位点。获得了 ３６ ０ ０（ 〕 ４　 １ 个株系的４ ００ ２ ０ 个插人位点的侧翼序列， 建立了侧 翼序列数据库（ １。对侧翼序列分析发现 Ｔｓ 表 ） ｏ７ １ 的插人位点明显偏向于基因密度较高的区域， 有 Ｔｓ７ ｏ１ 插人的热点和冷点。此外 ，ｏ１ Ｔｓ７对特定的基 因类别有偏向性。比如， 蛋白激酶基因和抗病基因 中发现的插人突变明显偏高。４ 小 结经过一两个世代后它会发生转座失活〔ａ。不过， ａｑ ｅ ． 组织培养的方法可以 让它重新恢复活性１ 。但由 ． ３于转座失活可以得到稳定的插人突变体， 这是转座 失活的积极意义。转座可能发生在体细胞 中， 也可 能发生在胚胎细胞中， 而发生在体细胞中的转座大 都不能遗传到下一代， 为了得到更多的胚胎细胞发 生了转座的后代 ， 抑制体细胞的转座， 以用减数 可 分裂特异表达的启动子来启动转座酶基因表达ｖｌ 〔ｚ ｓ。 ， ａＥｏｌ －报道了他们用Ａ 的插人突变建立 　　　　１ ｎ ｉ等１ ｋ ｃ水稻突变体库的工作。在构建的载体中，ｃ Ａ 的上 游是两个串联的 ＣＭ ３Ｓ ａ Ｖ ５ 启动子， 方向和 Ａ ｃ内的 自主启动子方向一致，ｃ Ａ 的下游是报告基因 ‘Ｐ Ｆｏ Ａ 的转座可 以通过 ‘ Ｐ的表达来检测。两个串 ｃ Ｆ综上所述， 　　　　 水稻的插人突变库构建工作已经取 得了一定进展， 但还有许多工作要做。例如， 以 ９ ％的概 率发现任意一个基 因的 ＴＤ Ａ插 人 突 ５ －Ｎ 变， 则需要一个包含 ３６ ） 个株系的突变体库． ００ 】 但万方数据中国生物工程杂志第２ ４卷从目前的报道来看（ １还不到 ５ ０１ 表 ） ０　 株。Ａｉ ０ 〕 ｋ ｏ Ｍｙ 等的 Ｔｓ ｉｏ ａ ｏ ７插人建立突变体库， １ 可以大于 ％％的概率率发现任意一个基因的插人突变。但是每个株系的插人拷贝数太多， 为单个基因功能的 鉴定带来麻烦。此外 ， 利用该库对功能冗余基因、 有致死效应的基因及高度多效性的基因进行研究 比较困难。然而， 从拟南芥插人突变体库的构建及 其研究所取得的进展 ， 可以预见随着水稻饱和突变 体库的建立， 会有更多的水稻基因被克隆鉴定， 特 别是控制重要农艺性状的基因， 这将会对农业生产 产生巨大影响。同时， 可以在突变体库的基础上进ａ ｒｅｉ ．ｍ ｔ ｅ ｉ ａｉ ｐｉ Ｐ ｎ Ｃｌ ９９ １： ３　 　　　　　　ａ ｇ．　ｍ ｂ ．． ．　ｔ　ｌ１９ ，１２８ － ｎ　 ｒ． Ｉ　ａ ｓ　 ｄ ． ｌ ａ ，　 ｎ ｔ． ｓ ａ ２２９ 　　　　　　 ２０［３ Ｘ．　 ．　 ｕｏ ｏ ｄｐｃ ｅ　 ｅ ｖｓ ｇ ｅｃ　ｕ ｅ １１　 Ｇ Ｅｏｔｎ　 ｕｌａ ｇ ．　 ｕ ｅ ｔ ｍ ａ ｍ ． ． ｖ ｉ ｆ　 ｉｔ ｅ ｅ ｓ　 ｉ ｂ ｍ ｌ ｎ ｒ ｎ ａ ｉｔ　 ｕｔｎ． ｅｄ Ｉ Ｇｎ ｓ ０３１ ７ ： 一 ５ 　　　　 ｍｔｉｓＴ ｎｓ　 ｅｅｃ， ０， （）３４ ３６ ｇ ｎ ｎｌ ａｏ ｒ ａｓ ｕ ｌ　 ｎ　 ｄ ２ ９ ５［　Ｏｈｓ Ｈ Ｇｒｒ　ｈ ］　Ｇｎｉａ ｌａ ｎｏａ ｉａｓ １１　ｍｎ　 ｅ ｅＡ ，　 Ｄ ．　ｔ ｐ ｉｔ ｓ　ｎ　ｍ ４ ｃ ，　 Ｓ ａ Ｌ ｅｅ ｐｃｉ ｆ　ｍ ｂ ｔ ｒ ｃ　 ｏｐｌ ｅ ｓ ｃａ ｍ ｔｎＧ ｎｔａ１８，２ ６ 一 ２ 　　　　　　ｎ　ｃｏ．　ｅｃ，９８ １ ： １ ６３ ｏｍ ｍｅ　 ｉ ｅ ｉ ｅ ｉ ｙ ｈ ０ ２［　 Ｙｏ ｕ ｇ　，　ｈ Ｍｔｋ ａＯｓ ｉ　ｅ ａ Ｅｉｅ １］　 － ａ Ｗ Ｎｒｉ ｉ ａ ，　 ｍ Ｔ ｔ　 ｆｉｔ ５ ｅ Ｇ ｎ ｕ ｏ ｍ　 ａ ｗ ｏ ｉ ｕ ｕ ，　ｌ ｆ ｎ ．　 ｃｉｌｉ ａｄ　ａｐ ｇ　 ｍ ｉｐｉ ｈ ｉ ｒ　 Ｎ ｉ ｎ 　　　　 ｎ ｍ ｐｉ ｏ Ａ ｂ ｏｒ ｔ ｌｍ ＴＤ Ａ　 ｍ ｓａｏ ｏ ｔｎ　 ｎ ｆ　 ｄ ｓ　 ａ ａ － ｎ ｊ ｃｏｓ　 ｔ ｒ ｌ　 ｍ ｔｃ　 ｒｃｄ　 ．　 ｔ　 ：， 　　　　　　ｅ ａ ａ ｍ ｅｉ ｉｅａｅ Ｐ Ｒ Ｐ ｎ Ｊ ｎ ｌ ｕ ｔｎ ｂ ｈ ｍ ｓ ｎ ｉ ｙ　 ｙ ｒ ｎｌ ｔ Ｃ ｌ ｏ ａ ａ ｕ １９ ，（）４７ ４３ 　　　　　　 一 ６ ９５８３ ： ５ ［　 Ｐａ Ｒ　 Ａ ｎ Ｌａ Ｃｉｏ ，　ｍ Ｍ ｎ ，　ｌＡ　 ｏｒ １ １　 ｌ　 ． ｅ ，　 ｌｅ ｄＡ ｒ ｍ　 ， ｅ ａ．　 ｓ ｃ ６ ｅ Ｍ ｅｈ　ａ ｌ ｄ ｉ ａ － ｒ　 ｒ ｕ ｅ ｅ ｏ ｍ ａ ｄ ｏ ａｏ ａ ｃ ｐ ．　ｒ　ｒ ｅ ｎ ｒｏ ］ 　　　　　　 ｅ ｉｉ ｌ ｎｈ　 ｄ ｆ ｔｇｔ ｉｅｉ ． ｆ　 ｄ　ｓ ｃｌｎ　ｕ 叩ｐ ｉ ａ ｏ ａ ｅ ｄ　ｓ ｎ ｔ ｍ ｗ ｅｅｉ Ｐ ｔ　ｅｌ ｙ２０ ， ： 一 １ 　　　　　　 ｎＰｙｏ ｇ，０３１２５６ ５６ ｕ ｇｎａ ．ｌ ｈ ｉｏ ｓ ｅ ３ ０行 转 录 组 学 （ ａ ｃｐｍ ｓ　蛋 白 质 组 学 ｔｎ ｒｔ ｉ ） ｒ ｓｉｏ ｃ 、 （ ｔｍ ｓ、 ｐ ｅ ｉ ）代谢组学（ｅｂｏｉ） ｏ ｒｏｃ ｍｔｏｍ ｓ等方面的研 ａｌ ｃ究， 在更复杂的背景下研究基因的功能。参考文献 ［ ］ｕ Ｙ， ｎ ｉ Ｈ ，　 ｓ ， ａ Ａ　ｔ　ｅ ｅ　 ｅ　 １ Ｊ ． ｏ ｎ ． ． Ｗｎ ｅ １ ｄｆｅ ｎ ｏｔ ｒ ｎ　Ｓ ｇ－　 Ｊ ．　ｇ ｔ　 ｒ ｓｕ ｃ ｆ　 ｃ ．　 ｑ ａ ｈｉ ｅｇ ｏｅ　ｙ ｓｉ Ｌｓ ．　ａ ．　 ｅ２０ ２ 刃 － ２ 　　　　ｒａ　ｍ　．　ｉ ｉ ）　ｅｃ，　 ， ６ ９ ９ ｅ ｍ （　 ｗ ｎ Ｏｚ ｓ ｎ ａ Ｓｉ ｐ ｄ ｃｎ ０２ ９ ［ 〕 ． Ｓ ，　 ｅ　 ｆｎｍ ，　ｌＡ　 ４　 ｕｎ ｏ ｔ ｒｅ ２ Ｇｆ　 Ｒｅ Ｄ ａ Ａ ｉ ｋ ，　 ｅ ａ．　ｔ ｓ ｅ ｅ　 ｈ ｉ ｔ　 ｄ ｅ ｃ ｆ　 ｃ ｓ ｑ ｅ　［　Ｏｔａ　Ｒｙ ｌ　Ｌａ Ｍ ｅａ Ｆｎｉ ｓ ｕ ｃ ｔｓ　 １１　 ｇ Ｄ ａ ａＭ ｍ ｌ ，　 ．　ｋｇ　 ｅ ｅ　 ｉ ７ ｒ ｅ ，　 ｎ ，　 ｉ ｅ　 ｔ　 ｌ ｎ ｅ ｎ ａ ｎ ｌ ａ ｑ ｇＡａｉｐｕ　 ｌｎ Ｔ Ｎ ｉｅｉ ｌ ｓ ｅ　ｏ ａ ｙ Ｃ　 　　　　　　ｔ ａ　Ｄ Ａ　ｓｒ ｎ　ｅ：　ｉｔ　ｄ．　 ｒｂ ｏｒ ｄ ａ ｄ ａ － ｎｔ ｉ ｏ ｎ ｐ ｌ ｍ ＲＢｕ，０２３５７ ：７ ７０ 　　　　　　（ ）７３一 ８ ｉ ２０ ，２ １［ ］　ｍ Ｇ Ｐ ａ ｇ Ｍｐ ｎ ｍｌ ｌ ｃ ｓ ｕ ｃ Ｔ Ｎ １ Ｇ ｍ　．　 ｔ ，　 ｐ ｇ　 ｔ ｅ　 ｅ ｅ ｅ － Ａ ８ ｅ ｃ ｎ ａ ｉ ｕｉ ｏ ｑ ｎ ｄ　Ｄ ｒｉ ｐ －ｉｅｒｉ ｓｅ ｉｉ ｔ ｒ ｄ ｒ ｇ ｏ ｅ Ｂ ｔ ｍｍｉ ， 　　　　　　 ｗｔｎ　 Ａａｉｐａ　ｎｍ ．　ｉｏ ｔｓ ｎ ｇ ｔｎ　 ｓ　ｈ ｈ ｔ ａｏ ｉ ｔ ｅ　 ｂ ｏ ｉ ｅ ｗｄ ｃ ２０ ，９５ ： 一 ８ 　　　　　　９ ５６ ０３ １（）５ ７仁 ］　ｋ ａ　 ｅ ．　Ｋｗ ｈ ｅ　ｅａ Ｓ ｕ ｃ ｄａ ｓ １ Ｉｉｗ ＴＮｋ ９ ｃ ａ ，　 ｈ －ｗ Ｍ ．． ｉ Ｍ １　 ｅ ｅ ｅ　 ｂ ｅ ，　 ｍ ，　 ．　 ｎ ａ ａ ｌ ｑ ｔｏ １７ ＴＤ Ａ　ｓ ｏ ｉｅ　 ｍ ｉｐ ｃｖｔｎｔｇ 　　　　　　 ｉｅｉ ｓｅ ｉ Ａ ｂ ｏｒ ａｔａｏ－ｇ 明 ｆ　 ２　 Ｎ ｎ ｒ ｎ　 １ － ｔ ｔ ｎ　 ｄ ｕ　 ｉ ｉ ａ ｌｅ １ １　ｗ ｐ ｎｔ ｅ ｉ １　 ｅ ｔｎ Ｐ ｎ Ｊ２０，　 　　　　　　 ｄ　ｅｏ ｐｓ　Ｔ ｇｎｒｉ ．　 ｔ　 ０３ ３ ｉ ｓ　 ｓｏｅ ｈ ｙ ｎ　 ｅ ａｏ ｌ ，　 ６ ｎ １ ｈ ． ａ （）４１ ４９ 　　　　　　 ３ ：２ － ２ｇ ｏｅ　 ｓ ｍ　 ｐｊｏｃ ．　 ｃ，　 ，　９ 　　　　 ｍ　ｉ Ｌｗ ．　 ｉ ）　ｅ ｅ２ ２２ ： － ｅ ｍ （　 ｗ ｎ Ｏ ｙ ｒ ．　 ａ ｎａ Ｓ ｎ ０ ９ ２　 ｐ ｃ ｉ ０ ６１ 　　　　　　 ｏ［ １　ｕ Ａ，ｎ Ｐｋ ｏ－ｏ Ｊｎ， ａ Ｇ ｅｔ ａ ２ Ｓ ｏ ｇ　Ｓ ｈ ｅ ， ｎＮｏ ｅｇｅ １ ｅｍｏ ｎ ０ ｕ ｎ ． ｕ＋　 Ｄ ｇ ｎ　 ｔ　 ｎ ｉ ｄ ｙ ｒ ｏ ． ｎ　ｅａｏ ｏｅｄ　 ｅｃ ｄｔ ｘ　 －Ｎ ｔ ｉ ｌｅ ｉｒｅ 　　　　　　ｓ ｕｎｅ　ｏａ ｆ ＴＤ Ａ　ｇ ｇ　 ｎ　ｉ ｎｌｉ ｆ　 ｅ ｙ ｏ　 ｎ ｑ ｅｂ ｏ ｒ　 ａ ｎ ｉ ｎ　 ｇ ｎ ｃ〔 〕Ｈ ｕ ｉｅ　 Ｙｎ Ｍ Ｓ ｍｒ　 ｅ ａ Ａ　ｈ ｅ ｉ 　ｅ ３ ｍｅｍ Ｙ ｓ ，　 ｕ Ａ ｔ　 ｈ － ｎｔ ｒ ｈ ，　 ｏ　 ｈ ｅ ，　ｌ ｉ ｄ ｓ ｉ ｏ ．　 ｇ ｙ ｃｇｎｔ ｌｋｇ ； ｗｔ ２５　ｍ ， ｕｉ ａ　 ｌ 　　　　　　 ｎｐ　ｉ ２７ ｍ ｋｍ　ｓ ｇ　 ｓ ｇ 砚 ｅｅｃ　 ａｅ　ａ ｉ ｉ ｎ ｈ　 ｎ ｉｅ ｎ ｐｐｌｉ ．　ｅ－ ９８１ ：７ 一 ９ 　　　　　　 ｔ １９ ， ８４９ ４４ ｏｕ ｔｎＧｎ ｉ ａｏ ｅ ４Ｐ ｎ Ｐｙｏ ２ ３１ （）２ ０ ２ 　　　　　　０， ３４ ： ４ 一 １７ ｌ ｔ　ｓ１ ０ ３ ａ ｈ ｉ， ０ ４［１ Ｊ ｇ ｅ ｇ　ｎＳｈ ＩｅＫ Ｈｎ，　１Ｔ Ｎ ｉ Ｋ ． ２１　 － ｏ Ｊ ，　ｕ ． ．　 ｏ ｅｏ － Ａ　 ｉ． ｏ Ｓ ｎ ｅ ｉ ｌ　 ｉ ｇ ｔ　 Ｄ ｎ ． Ｉ ｎ ｏ ｃ ｅ － ．　 ．ｔ ｔ ｅｅｉｆ ｕ ｔｎｌ　ｏ ｉ 　　　　　　ｆ ｃｏｏｇｎｍｃ 访 ｒｅＰ ｎ Ｊ ｎｌ２０ ，２ ｎ ｅ ｎｓ ｏ ｎｉ ｕ ｇ ｅ　 ｒ　 ｅ ｅ ｉ ．　 ｔ　 ａ，００２ ｃ ｌ ｏ ａ ｕ （）　１ ５０ 　　　　　　 ６： 一 ７ ５ ６［ ＭＣｕｈ　，ｅｅ ｅ ＬＸ Ｙ ｅａ Ｄｖｏｍｍ　ｄ　 ｐ ｇ ４］ ｃｏｃ Ｓ Ｔｙｌ ｎ　 ｕ　 ｔ　 ｅ ｌ ｅ ｅ ｍｐｉ Ｒ ｔｍ ， ，　 ．　 ｐ ｌ ｅ ｎ ａ ｎ ｏ ２４ ｎ Ｓ ｔ ｍ ｆ ｉ 　　　　 ｗ　Ｒ　 ｋｓ　 ｒｅ（ 　 ｓｉ Ｌ）Ｄ Ａ ｆ　０　 Ｓ ｎ ２ ｅ ｗ ｏ ｃ ０ ｒ　 ． ＜ ｙ ｗｍ　 ＮＲ ｓａ ｈ ２０ ， ：９ ２ ７ 　　　　　　２ ９ １９一 ０ ｅｅｒ ，０ ｏ［ １　ｇ ｏ Ｊｎ，　ｕ Ａ ，　 － ｕ　 ｇｅ ｅ Ｔ Ｎ ２ ＤｎＨｏ ｅ ｇＳ ｏ ｇ　 ＨｎＧ Ｋｎ，　ｌ － Ａ ２ ｏ － ｎ　 ｏ ｕ ｎ ｎ ｏ ｙ ｏ ｔ　 Ｄ ｙ ｇ ．　ｒｅ ｏａ ｕ ｇｎａ ｆ ａ ｉ ｔｎ　ｇｉ ｍ　 ｃ Ｐ ｔ 　　　　　　ｅｅｅｓ　ｒ　ｔａｏ ｔ ｇ ｇ　　 ｉ ．　ｎ ｎ ｒ ｒｌ　 ｔ ｅ ｔ ：　ｍ ｉ ｉ ｏ ｃｖ ｉ ｏ ｎ ｅ ｌ ａ Ｐｙｏ ｇ，　 １ ： ６ ６４ 　　　　　　 ， ０ １３ 一１４ ｈｓｌ ２０ ３ ６ ｉｏ ０２ ｙ［ 〕Ｗ ＩＭｃ ｒ Ｔ Ｓｍｋ Ｔ ｅ ｅ ５ ｕ　 ａ ａ ，　ｏ ，　 ｓ　 ｈ ｝　 ，　１＾ｃ ｐｈ ａｅ　 ｈ ｉ ｔ　 ｏ ｒｅ ｗ ｎ ｍ ｅｎ ｃ ｅｔｎｃｐ ｒ ｐ　 ｔｎ ｇ　 １　 ｒｓ ｅ ｅｃ 　　　　 ｓ ｃｎ ｉｎ ６９ ｅｐｅ ｅ ｓ ｕｎｅ叱 ｓｅ．　 ｔ ｒ ｅｉ ａ ｏ ａ ｉ ５ ｘ ｓ ｄ　 ｅ ｒｔ　 ｑ ｉｓｐ ｎ ｔ ｌ ａＣ１ ２０ ， ５５ ３ 　　　　　　 ；２ 一５５ ｅ ，０ ２ １ １ ４［ １　ｎ　ｉｗ，ａ Ｍ ｅ．Ｄｔ ｕ ｎ　 ｃ ｒｔｉ ｉ ｏ ２ Ｃ Ｓ ｎ Ｗ ｎ ，　．　ｉｔ ｅ ｈａｅｚｏ ｆ ３ ｈ ， ｅ Ｊ ｇ　 ｔ　 ｉ ｂｉ ｎ ａｃｒａ ｎ　 １ ｓ ｏ ｄ　 ｒ ｔｏ ｒ　０　 Ｎ ｅ ｉｒｅ　 ｍ ．ｌｔ　ｎ ， ０， １ 　　　　　　 ｌｓ　ｉ ｇ ｏｅＰ ｏＪ ｒ ｌ ０ ３（） ｖ １ ＴＤ Ａ　 ｎ　 ｅ ｅ ０ － ０ ｇ ｃ ｎ ｏ ｏ ａ２ ｕ ６１ ５－　 ３ 　　　　　　　　 ０ １ １［ ］ｅ ＳＵ ｅ ｍ　ＡｔｉＢ ，　 ．　 ｙｃ ｍｐ　 ｙ ｓ ６ Ｓｉ　ｍｈ Ｙ ｎｎ Ａ ｍ　 Ａ　 ｓａ ａ ｗｈ　 ｔ ｊ ，　 ａ ，　 ｏ　 ａ ｐ ｉｌ　 ｉ ｅ ｏ ｌ ｈ ｔ ａ ｅｉｉ ｃ ｗｏ （Ａ ）　 ｅ ｏ ｒｇ　 ｆ　 ２　 　　　　 ｎｅ ｅ　 Ｇ ｃｎ ｃ ｅｎ ６＇ ｏｔ １ ｒｅ ｅｉ ｌ　 ｆｓ ｈ ｃ ｒ ｍ Ｙ ｏ ｌ ｓ　 ｉ ３ ｏ ｖ ％　 ｈ ｅ　 ｉ ｃｃｒ ｏ ｍ ｓ － 　　　　　　 Ｃ ｈ ｍ ｓ ｅ ．　 ｏ ｏ ．０ １　 ：２　 ７ ２０ ．４ ３ －　 ４ ３［４ Ｓ ｖ ｕ　Ｐｉ　ｔ　 － ２１　 ，　，ｅｚｅａ Ｇ ｂ ａ　 Ｓ ，　．　 ｌ（）３６ ３４ 　　　　　　 ２； 一 １ ０ｉ ａ ｆｎｉ ｏ ｕｎ ａａｓ ｏ ｎ ｌ ｋ ｇ　 ｅｃ ｎｙｓ ｎ　 ａ ｎ ｅ ｅ　ｌｉ ｄ　 ｑ［ 〕 ｈ ＱＺａ Ｙ Ｃｅｇ　ｅａ．　ｎ ｐｙｉｌ　 ｏ ｔ ｒｅ ７ Ｚｓ ， ｏ ．ｈｎ Ｚ ｔ　Ａ　ｅ　 ｓａ ｍ ｐ　 ｈ ｉ ｏ　 ｈ ｇ ，　ｌ ｆ ｈ ｃ ａ ｆ　 ｃ ｉ ｅ　ｃ ｒｍｏｏ 　　　　　　 ４ 只 ｌ ｌ ｈ ｏ ｓｍｅ　 ｅ ｌ 侧 ｏｏａ　 ＴＤ Ａ　 ｅ ｏｕｔｎＴｅ Ａｐ Ｇｎ ，　 １ 　　　　　　 ｔｇ ｐｐｌｉ ．　 ，　 ｌ　 ｅ ２０，　 ｆ　ｃ －Ｎ ｏ ｄ　 ａｏ ｈ ｐ ｅ ｔ ０４ ０ ｉ ｒｅ　 ｇ ｏ ８ ［５ 阎双勇 智庆文， ２１ 谭振波， 水稻ＴＤ Ａ插人突变体库的构 等 －Ｎ建及突变类型的分析 ． 　　　　　　 遗传学报 ， ０ 出版 中） ２ ４（ ０ ［６ Ｅｏｉ，ｅｅ ｉ． ａ ， ｉ ｋ Ｋｗｈｒ ，ｔ　Ａ ． ｅ　ｌ　 ２ １　 ｋｌＴｋｅ Ｉ ｗｌＭｈ ｏ　 ｏｏ ｌｅ １ ｃ ｎ ｈ ｏ ｅ ｏ Ｌ　 ｔ ｆ ｏ ｏ ｏ ｒ［ ８］ Ｍｎｓｅｇ　 ｅ ｉ ｈｎ Ｃ ｎ ｇ ｈＧｔ ｒａ ｅ ｅ ．　 ｍ Ｒ ｅ ｏ２０ ， （）８７ ８ ０２ １ ５ ：１ 一 ２ ２ ３Ｐｅｔｇ Ｂ ｂ ｋ　 ，　 ｒ ｉ ．　 －． ＷＢ ｅ ｓｎ ａ ｚ ｔ目． ｎ Ａｉｅｒｅ ｐｙｉ ｌｎ ｇｎｔ ｍ ｐ　ｈ ｒｅ　．ｅＰ ｎ Ｃｌ ｎ ｇ ｔ ｈｓａａｄ　ｅｃ　 ｏｔ ｉ Ｗ ｍ ，　ｔ　 ， ｔ ａ ｄ　 ｃ ｅ ｉ ａ ｆ　 ｃ ｒ ｅ　 ｌ ｅ ａ ｌ２０２ １ ５ ７一５ ５ （ ，４：３ ４［ Ｋｋ ｈ ５ Ｓｗ Ｋ Ｎｇ Ｔ ｅ ａ Ｃｌｃｏ，　ｐ ｇ ａ ９１ ｉ ｉ　 ａｈ　 ａ ｗ　，　 ｔ ｏｅ ｉ ｍｐｉ ，　 ｍ ，　 ，　ａ ｔ　 ．　 ｔｎ ａ ｎ ｎ ｄｔ ｆ ｃｏ ｌ　 ｎ ｓ　 ｃ．　ｔ　ｎ ，　 ， ５ ： ５　 　　　　　　 ｏ ｃ ｏｒｅＰ ｎＪ ｒ ｌ１ ９１（）　 － ｈ ａ ｔｎ ｇ ｕ ｆ　 ｌ ｏ ａ ９ ９ ６ ｅ　 ｉ ｅ ｅ ｎ ｎ ｉ ａ ｕ ９ ０６３ 　　　　　　　　 １ａｎｔｉ ｏｏｅ２０ ｃ Ｎ ｃ ｎｓ　 ｊ ｏｉ ｒｅＳｉ ｃ， ｎｏｔｎ　 ｖｒ　（ Ｄ Ａ　 ｅ ｆｍ　 ｎａ　 ．　ｎｅ ａｏ ｆ　 ８ ０　 ｌ ｏ ｒ ａ ｃｉ ｃ ｏ ｐ ｃ ｅ２０ ，０ ：７ 　　　　　　 一３９ ０ ３ ３ １３６ ７［ １　－ Ｉｗ， ｈｔ　ｉｉ ｏ ｉ ｇ Ｎｋ ， ．Ｔ ｎ ｏｎ ２ Ｔ Ｍ　 ｏＴ ｎＯｎｈ Ｔｓｔ ｕ　－ ｅ １ ｒ ． ｓ ７ ａ ｋ ｒ ｏ ｈｓ， ｈ ｕ ａ ｅ ｓ ｔ　 ａ ｐ ｏ ．ｔｇ ｇ　 ｃ．ｏ Ｍ ｌｕ ，　ｏ ，　 ， ２９ ２９ 　　　　　　ｌｔ　ｅ ｌ Ｂ ｌ ｙ１ ７３：１一 ２ ａ ｉ ｉｒｅＰ ｎ ｏｃ ｅ ｉ ｇ ９ ５ ｇ ｎ ｎ　 ｉ ｏ ９［　 Ｈｅ Ｙ Ｏ ．　 Ｋｍ ｌ　ｅ ．．　ｃ ｍ　 ｒｏ ， ｏ ｏ ｄ １１　 ｉ　 ｈ Ｓ ｏｍ Ｔ ｔ　 Ｅ ｉｅ ｔ ： ｍｅ ｎ　 － ０ ｉ ，　 ，　 ，　 １ ｅ ｉ ｍ ｅ ｔ ｆ　 ｆ ｉ ０ （ ｒａ　 ｎ 　　　　 ｉ Ｌ ）ｍｄ ｔ ｂ Ａｍ ａｒ ｕ ａｄ　ｑｅ－ Ｏｙ － ａ　 ｚ ｅｉｅ ｙ　 ｂｃｒｍ　ｎ ｓ ．ｎ ａ ｄ　 ｇ ｅ ｉ ｅ ａａ ｓ ｏ ｈ ｏｎａｅ ｏ ｔ －Ｎ ．　ｔ　９４６２ ：７ 　　　　 ｔ ｂｕｄｒｓ　ｈ ＴＤ Ａ Ｐ ｎ Ｊ１９ ，（ ）２１ ｎｌ ｉ ｆ　 ｙｓ　 ｅ　 ｉ ｆ　 ｅ　 ｌ ， ａ２２ 　　　　　　　　　　 ８［８ Ｇｅ Ｒ Ｏｗｒｒ Ｐ ，　 Ｋｍ　 ，　 １Ｔ ｎ ｏｔｎ ２１　 ｃ ，　 ｅｅ Ｂ Ｄ ａ Ｒ ｅ ｅ ｒａ ｓｏ ｌ ｒｏ　 ｕ ｋｋ　 ｅ　 Ｊ ｔ　 ｏ ｐ ｉ ｅ ．　 ｉｈｈｖ ｕ ｏ ｅ ｃ ｓ ｅ ｏ ｅ ｒ ｇｎｔ．　 ｉ ．　ｏ 　　　　　　 Ａ１ａ　ｔ ｆ ｒ ｅ ｅ　 ｅｃ ｉ ｒｅ Ｔｅｒ ｅａｉ ｒ　 ｎ　 Ｄ ｙ ｍ　 ｖｓ ｅ ｉ ｎ　 ｈ ｏ ｆ　 ｓ ｒ　 ｃ Ａ ｐＧ ｎｔ ０ ， （）１ ２ 　　　　　　 ３１８ １； 一 ｐｌ　 ｅ， ０ ０ ｅ ２ ０ ４仁ｌ Ｇｌ Ｍ ，　 Ｋ Ｐ ｎ ｃ ｐｒｉ ｇ ｅｃ ａｅ １ ｙ ｒ ｌ１　ｅ　 Ｄ－　 Ｍ．　ｔ　 ａｔｅ　 ｔｓ　ｒ　 ｅ ． ａ Ｄ ｅ ｌ ｏ ａｖ ｅ ｉ ｆ ０　 ｓ ａ ｍ ｎ ｔ ａＳｉ ｃ ．９ ８ ２ ２ ６６一 ５ 　　　　　　，８ ：５ ６９ ｃ ｎｅ １９ ｅ【９ 陈兆贵． Ｄ 插人纯合体的筛选和鉴定 植物生理与分 ２〕 水稻 ｅ 子生物学学报， ３２ ４ ： 一 ４ 　　　　　　 ２０， （）３７ ３１ ０ ９ ３［　Ｐ ｉ １　 ｎ ｅ Ｃ　ｕ ，　ａ Ｒ　 ｍｎＴ Ｎ １］　ｅ Ｋ ｍ ，　 ２ ａ ｋ　ｒ Ｊ ，　 Ｙ ｔ Ｍ ｈ ｌ　ｕ ｏ．　 Ａ． ｒ ｙ ｆ ａｇ ｉ ｅ Ｓ ｃ ｍ － Ｄ［ １　 ｏ　 ｏ ６　 Ｍｒ Ｋｅ １ ａｅｓ ｅｃｃ ｏｔ ３ Ｍ ａＡＴ ａ Ｋ ｏｌ ，　．　ｔ　 ｐ Ｊｉ 　ｈ ０ ｉ ，　 ｙ ｏ ，　 ｅ　 ｔ　 ｒ ｉ ｅ ｔ ｆ　 ａ Ｔｇ ｔ ｅ　 ｙ ｅ万方数据第 ６期阎双勇 等 ： 水稻插 人突变库 构建研究进展ｇｎｍ－ Ｐ ｎ ｅ ， ０ １： ７ １２ 　　　　　　 Ｃ１２０ ，２１０ 一 ００ ｅｏ ｌ ｌ ｔ　 ０ ａ １ ０５ ３Ｔｅ ｒｒｒ ｅｏ ｎ　ｗ ａ　ｆ ｎｅ　 ｉｅｉ ｗｔｎ　ｅ ｏ１ ｅ ｏａ ｐｅ ｓ ，　ｒｅ ｃ ｆ ｎ ｒｏ ｉｉ ｇｎｓ ７　 ｔｎ ｏ ｈ ｔ ｏ ｐ ｒ ｅｅ ｏ ｓ ｔｎ　ｈ ｅ ｒ　 ａｄ　ｉｔ　 ｒｏ ｉｒｒｒ ｅｏ ｎ ｉ ｒ ｉ ，　ｈ Ｇｎｍ ｎ ａａ ｓｉｅｉ ｎ　 ｔｎ ｓ －ｃ ｅ ｏ ｏｔ ａｏｅ ｇ ｎ ｎ ｔ ｎ　 ｅ ａ ｐ ｏ ｒｈ　 ｎ ｆ　 ｓ ｔ ｏ ｇ ｅ　Ｐａ ｔ　ｌ ２０３ １ ：７ １ ｌｎ Ｃ ｌ （ ．５ １７ ｅ．［８ Ｄｔｆ　叫， Ｈｏ ＡｎＭｇ ｌ　ｔ　 ｃｖ ｏ ｔｇｇ　 ３］　ｅＷ ｉ １ ａ ｈ，　ｅＡ ｅａ Ａｔａ ｎ　 ｉ ｉ ｅ ｅ ｉ　ｎ　 ｉ ｌ ｕ ，　 ．　 ｔ ａ ｎ ｎ ｌ ｉｉ ｇＡａｉｐｕ　ａｔ　ｓｌ ｙ２０ １ ：０３　０ 　　　　　　ｎＰｙｏ ｇ，　 ， ２ １０ －　 ３ ｒ ｄ ｒ ．　 ｈ ｉｏ ００ ２ ｂｏ Ｐ ｌ １１［１ Ｂ ｅｄ　Ｂｌ ｇｅ　 ｕ ３ 丁 ｍｎｕ Ｖ　 ｍｒ ＳＤ ，　 ｕ ，　 ａｂ １ ｅ ｒ ７ ８ ｕ ０ ｃ ｑＢｅａ．－Ｎ ｉｅｒｉ ｉｏ ，ｔ　 Ｄ Ａ　 ｇ ｔｎ　 ｌＴ ｎ ａｏ ｎ ｔ ｔ［９ Ｖｇ ｉＷ １ｔ ｔｔｉ ｆ ｍｔｅ ｓ ａ ｇ ｅ　 ｉ ｕｎ ３）　 ｉａ　６ ．ｒｅｅ ｏ ｕｇ ｅｓ　 ｅ ｃｎ ｇ　 ｇ ｉ ｎ ａｏＳａｇｓ　 ａ ｎ ｉ ｎ ｎ ｌ ｎ ｓ ｒ ｒ　 ｄ　 ｏ ｉｔｎ ｏ ａ　 ｉ ａ －Ｎ ｉ ｒ ｎ ｕ ｇ ｅ，　 Ｒｖ 　　　　ｔ ｇ ｇ　 ＴＤ Ａ　ｅｉｓ ｍｔｅ ａ Ａ－　ｅ ｒｅ ａ ａ ｎ ｎ ａｐｏ ｇ ｄ　 ｎ ｔ Ｉ　ａ ｎ ｉ ｎ ｓ ｏＰ ｎ Ｐｙ． ｌ ｔ　 Ｂｄ １９ ， ４ ８ 　　　　ｉ Ｐ ｎ Ｍ ｌ　 ，９２４ ； 一 ２ ｌ ｔ　ａｌ　 ａ ｈ ａ ａ ｏ ３９ｔ Ａａｉｐｉ ｇｎｍ ｄｐｎｓ　 ｓ ｕｎｅ ｏ ｐ －ｓ ｉ ｈ ｒ ｄ ，　 ｏ ｅ　 ｅｄ ｏ ｅ ｅｃｓ　 ｒ ｉｅ ｏ ｅ　 ｂ ｏ ｅ ｅ ｎ　ｑ ｆ　 ｎ ｒ ｎ ｅ ｔ ．．．　 ０　 ａａ２０ ， ：１２ １７ ｉ Ｅ ８ ｒ ｒ ， ２１ １５ 一１５ ｎ Ｍ ｅ ｔ ０ ２ ｐ仁２ Ａｏｅ Ｍ，　ａ　 Ｓ　 ３ ） ｌ ．　 Ａ ｎ Ｎ，　 ｎ ｎ ， ｏ － ｐ ｅ ｔＩｅ ａ．　ｏ ｅ ｉ ｉｅｉ ａ ，　 ｌＧｎｍ－ ｄ ｎ ｒｏ ｌ ｔ　 ｅ ｗ ｅ　 ｔｎ ａ［０ Ｒｂｒ ＾ Ｍｒ ： ｎ Ｆｎｔｎｌ　ｏ ｉ ：　 ｉ ｐｎ ｇ ｅ ４ ）　 ｅ ｏｔ ａ ｗｅ ．　ｃｏａ ｇｎ ｃ Ｐ ｂ ｇ　 ｔ　 ｉ ｅ ｔ ｅ ｕ ｉ ｅｍ ｓ ｒ ｎ ｌ ｅ ｏ ａ ｎｆ ｃｏ ａｄ　 ｅ ｆ ｗｔｔｎｐｓ ，Ｐ ｃ　］　ｄ　 Ｕ Ａ 　　　　　　 ｒ ａｎ　ｈ　 ｓｏ ｎ．ｒ ＮｔＡ ｅ Ｓｉ Ｓ ， ｕ ｔｎ　 ｕ ａｏ ｉ ｒ ｎｉ ｎ ｐ ａ ｏ ｏ ａ ｃ ｕ ｔ　１９ ，５ ２２ ２ ６ 　　　　　　 －　２ ９ ８９ ：０ １ ０ｍ ｔｅｅｅ　 ｒ ｉ ｐ ｔ ｌｎ ．ｃ ｎｅ２０ ，０ ： ３ ６７ ｕ ｇｎａ ｏ Ａｎ ｄ ｉ　 ｉ ａ Ｓｉ ｃ． ３３１６ 一 ５ ａ ｉ ｆ　ｂ ｏ ， ｈ ｏ ａ ｅ ０ ５ ［３ Ａｄ ｗ　．　 ｔ　ａｉｐｏ　 Ｐ ｎ Ｔ ｎｏ ｔｎ ｕｅ， ３ ） ｎｒ Ｆ Ｂｎ Ａ ｂ ｏ ｅ ｅ ｒ ｄ ｍ　ｌ ｔ ｍ ｅｒｉ ．　ｓ ａ ，　 ｆｍ ａ ｓ ， ｍ ａ ｈ －　 ａｄ　 ａｅ ａ　 ｔｎｏ ａｏ ｏ ｏ ｅ ｓｅ ｉ ｎ ｐ ｐｃ ｆ ｒ ｓｒ ｔｎ　 ｔ ｒ　ａ ｅ ｍ ｔ ｏ ａ ｆｍ ｉ ｆ　 ｒ　 ｈ ｐ ｃａ Ｐ ｎ Ｐｙ ｏｇ，　 ，２ ： ４ 一１４ ｌ ｔ　ｓｌ ｙ２０ １ １ ０ ５１ ａ ｈ ｉｏ ００ ４ ５［４ Ｈｍ ｉ Ｈｒ ｈ ａ Ｋ ｕｉ Ｓｇ ｏ ．　 ｕｉ　 ｅ ａ ３ ） ｉｈ ｏ　ｉｃｉ ，　 ｈ ｏ　 ｉ ｔ Ｏａ Ｙ，　 ｌ ｋ ｏ ｋ ｍ ｋ ｕ ｍ ｏ ｔｋ ｔ　．［１ Ｙｋ ｈ ｒｗ，　ｈ Ｏｎｈ Ｔ ｈａ ｕ　ｋ ｏ ｅ ， ４］　 ｅ ｉ　 ａ Ｔａ ａｅ ｍ ｈ ｍ　ｈｓ ，　 ｉ ｇ Ｎ ａ ，　 １ ｉｉ ｏ ｔ ａ ｕ ａ ｎ ｔ　 ．Ｔａａｏ ｎ　 ｇ　 ｉ ．　ｔ　 ｅ ｌ Ｂ ｏ ，　 ３ ：　 　　　　 ｔ ｎ ｉ ｒｅＰ ｎ Ｍ ｌ ｕ ｒ　ｌ ｙ１９，　２９ ｒ ｐｅ ａ ｎ ｏ ｎ　 ｌ ｃ ａ ｏ ｃ ａ ｉ ｇ ９７ ５ １ ｏ２９ 　　　　　　　　　　 ２Ｒｔｔｎｐｅ ｓ　ｒｅ　ｏ ｅ ｉ ｍ ｔｉ ｓ　 ｕｅ ｂ ｔａ ｅｏａａｏ ａ ｏ ｉ ｉ ｌｄ　 ｕ ｔｎ ｉ ｃｄ　 ｉ ｕ ｒｒ ｏ ｆ　 ｎ ｖ ｎ　 ａｏ ｎ ｃ ｖ ｄ ｙ　 ｅ ｅ ｃｌｒ．　 Ｎｄ　ａ Ｓｉ　 ，９６９ ：７３ ７８ ｕｕ Ｐ ｏ　 Ａ ｄ　 Ｕ Ａ １９ ，３７８ － ７８ ｔｅ ｒ ｏ ｒ ｃ Ｓ ｏ ［５ Ｒｃｄ ，　 ｒ － ｅａ Ｋｎｅ ，　 ｍ ｎ Ａ．　Ｎ ｉｅｉ ３ ） ｉ ｏ Ａ ｏ Ｌ ｈｎ　 ｎｔ Ｆｌ ａｎ　 ＴＤ Ａ　 ｒｏ ｒ ａ 即ｉｅ ｅ ｅ ｈ ｅ ｄ － ｎｔｎ ｓ ｍ ｔ ｅｅｓ　 Ａａｉ ｐ ＋ ，ｏ ｇ　ｃ ａｄ　ｒ ．　ｎ，　 ｕ ｇｎｓ ｉ ｒｂ ｏ ｉ：　ｉ ｂ ｋ　 ｆｔ Ｔ ｄ ｉ ａ ｉ ｎ　 ｄ ｇ ｎ ｅ ｎ ｏｈ ｒ ｅ ｎＧ ｎｔｓ１９ ，１ ：５ ５ ｅｅｃ ，　 １３ １２一１６ ｉ ９７［６ Ｊ ｇ ｅ ｇ　 ｎ Ｇｒ ｏｇ　 ．　 ｅ　 ｇ ｇ　 ｎ　 ｅ　 ｈ ３ ） ｏ － ｏ Ｊ ，　ｄ ｎ Ａ Ｇｎ ｔ ｉ ｉ ｉ ｎＳ ｎ ｅ ａ ｙｍ ｎ ｅ ａ ｎ ｎ　 ｇ ， ｅ ｃ ｈ ｉ ｇ［ １　Ｃ ， Ｂ，　 Ｈ ， ａ Ｒｐｇ－ｒｇ　 ｅ　ｖ ｏｔ ４ Ｋ Ｍ Ｊ ｌ ｉ Ｌｅ ｌ ｒ ｍ ｉ ｏｔ ａｉｔ　ｈ ２ ｉ　 ｅ　Ｐ ｍ　 ｔ　 ｍ ．　 ｎ ｆ　 ｃ ｉ ｆ　 ｈ ｔｙ ｅｍｔａ ｄ ｉｏｉ ｔ ｅｏ ｎ　 卜ｄｒ ｇ　 ｔ　 ｎｒｉ ｉ 　　　　　　ｍｍ　 ｎｐｍ ｆ ｍ ｕｎ ｐ ｎ ｒ ｅｅ ｔｎ　 ｉｔ ｄ ｅ ｖｏ ａ ｃ ｒ ａ ａ ｒ ｉ ｌ ｅ ａｏ ｎ ａ ｇ网 网ｎｅＭ ｔ　ｌ ２０ ， （）　１ ３ ｃ．　 Ｃｌ，　 １ ２ ： －２ ７ ｏ ｅ， ０２ ４ ２ ３ Ａ ａ Ｋ ｍｒＪ ｒ Ｌ　ｒｅｅ Ｐａｔ　ｏ ａｅｍ ｎ．　 Ｒ， ｍ ｒ　 ａ， ｆ ｙ　 ｅ ｔｎ ｌ ｒｃｒｎｐ ｏｅＡ ｕ ｅｅ Ｂ ｍ ｅ ｎｅ ｔ ｔ ｍ，　 ｅＧ ｎ ｔ １９ ，３ ４ ９一５ ２ ｅｅ ，　 ９ ３ ：７ ９ ３Ｈｉ ｉ ｎ　 － ｈｋ ｍｈ ｋ Ｈｉ ｉａｏ ｒｅｔ ｉ ｒ ｕ ｔｎ　 ｆ　 ：　ｒ　 ｌｉ ａｄ ｉ ｈ ｅ ａｏ ｎ ｃ ｅ ｇｔ ｕｈｕ ｓｔ ｆ ｆ ｃｏ ｌ　ｏ ｉ ．　ｔ　ｅ ｅ２０， ｈ ｇｐｔ　ｅ ｏ ｕ ｔｎ ｇｎｍ ａＰ ｎ Ｓｉｃ，　１ ｏ ｒ ｙ ｍ　 ｎ ｉａ ｅ ｃ ｌ ｃ ｎ ０ ｓ ｒ　 ａ１ １ ２ １－　 ９ ６ －１ ２ １ｎｅ　 ｇ ｏ ｅ　 ｓ ．　ｔ　ｅｕ ｒ　ｌ ，　 ，　２１ ｅ ｆ ｅ ｍ ａ ｉ Ｐ ｎ Ｍ ｌ ｌ Ｂｏ ｇ １９ ３ ：３ － ｏ ｎ ｒ　 ｒ ， ｌ ｏ ｃ ａ ｉｏ ９７ ５ Ｗｙ ａ ｙ２ ４０［ １　ｉａ　 ｐｎ Ｇｎ ｔｐ：　 ｆ ｐ ｔ　ｅｐｅ ａ ３ ＰｒｉＳ　ｉｍ．　 ｒ，ｔｌ ｏ ｌ ｄ ｌｍｎｎ ７ ａ ｃ Ｓｒｇ ｅ ａ ｏｓ　 ａ ｅ ｏ ｔ　 ｔ ｅ　 ｏ ｒ　 ｎ ｖ ｄＰ ｏｒｓ ｉ Ｒｃ Ｉｓｒ ｏ ａ ｒｇｅｓ　 ｉ ｎｅｔ ｎ ｌ ｎ　 ｅ　 ｉｎｅ 闷 ｃＹ Ｎ　 ａ －ｎ＇ Ａ Ｚｅ Ｒｔ Ｉ　ｇ 　　　　　　　　　　　　　　 ＬＳｉｕ Ａ Ｓ ｎ ｙ ｇ２　 Ｎ　 ｎ ｏ．　 ｈ ｉ ｈ ｇｏ ， ｕ 　Ｔ ｈ － ＇ 　　　 －（ Ｂｉ ｇ　ｏ ｉｅ ｎｏ 　ａｍ Ｃ ｔ， ｉ ｇ　ｄ ｙ　 ｇｃｔａａ ＦｅｒＳｅ ｅ Ｂｉ ｇ　 ０８，　ａ １　ｉ ＡｒＢ ｔｈ ｌ Ｒ ｒ ｈ　 ｍ Ｂ ｊ Ａａ ｍ ｏＡｒ ｕｌ　 ｏｓ ｃｎ ｅ ｅｉ　１ ０ Ｃｉ ｅ ｎ ｇ ｏｃ ｏｇ ｅｅ ｍ ｊ － ｙ ｅｉ ｃ ｅ ｆ　 ｕ ｎ ｉ ｌ ｎ ｒｔ ｉｃ ，　ｎ ０ ９ ｈ ｄ　 ｙ　 ｊ ｎ２　 ｅ　 ｅｒ Ｉ ｉｔ，ｉ ｕ Ａｒｕｕ ｌ　ｖ ｉ Ｗａ ｉ 　６１３ ，ｈ 　　　　　　　　　　　　　　　　ｔ ａＵ ｉ ｍｔ， ｎｊｇ　１０３Ｃｉ Ｒｃ Ｒｓ ｃ ｎ ｗｅＳ ｈｍ　 ｉ ｒ ｎ ｅ ｙ ｉ ｅ ａ ｈ　 ｍ ｃ ｇｃ ｌ ｎ ｍ）Ａｂ ｔ ａ ｔ ｓｒ ｃＲ ｅ Ｏ ｚ ｓｉ ）　 ｍｄ ｐｎｉｇ ｏｉ ｒｅ ｃ．　 ｎ ｉａｇ ｏｅ　ａｈ　ｅ ｍ ｇ ｉ （ ｒａ　ｖ ｉａ　 ｅ ｌ ｔ　ｅ ｍ ｓ　ａｈＩ ｆ ｃｏ ｌ　 ｍ ｒｅｃ ｉｂ ｏｉ ｃ ｙ ａ ａ ｓ　ｏ ｌ　 ｎ　 ｃ ｅ ｒ ｔ ｕ ｔｎ ｅ ｅ ｒ ｓ　 ｎ ｌ ａ ｎ ｓ ｓ　 ｎ ｓ ｃｔｃｖ ｈ ｎ　ａ ｅ ａ　 ｉ ａｄ ａｒ ｔｅ　ｅ ｅ　 ｐ ｎ ｇｎｍ ｐ ｇ ｍ，　ｅ ｏ ｉ ｃｍ ｌｅ ｇｎｍｃ　ｑｅｃ ｇ Ｉｓｒｏａ ｔ ｃ　 ｏ ｐ ｎ ｔａ ｉ ｔ ｍ ｉ ｌ ｔ　 ｏ ｅ ｒ ｒ ｂｓｄ　 ｔ ｏ ｐｅ ｄ　 ｏ ｉ ｓ ｕｎｉ ．　 ｔ ｎｌ ｏａ ａ ｎ　 ｓ　 ｔ ｅ ｅ ｎ ｎｅ ｉ ｍ ｔ ｅｅｉｈｓ　 ａｖｎ ｇ ｔ ｔ　 ｉｓ ｅ ｅ ｍ ｎ ａｔ ａ ａ　 ｆ ｇｎ ｉ ｎｉ ａｏ ，　 ｉｉ ｃｎｅｉ ｃ ｆ ｕ ｇｎｓ ａ ｔ ｄａｔ ｅ　 ｔ ｎｅ ｄ　 ｅｔ　ｓ ｓ　ａ ｏ ｅｅ　 ｔｉ ｔｎ ａｄ　 ｓ　 ｖｎ ｎｅ　 ａ ｓ ｈ ｅ　 ａ ｈ ｈ ａ ｅ　 ｒ ｌ ｔ ｅ ｃ ｔ ｒ　 ｄ ｆ ｉ ｎ ｔ　 ｏ ｇ　 ｅ ｃ ｅ ｏ ｒｂ ｔ ｆｒ ａｄ ａｄ　 ｅ ｅ　 ｅｃ ｒ ｅｒ ． ｓ ｉ ａ ｍ ｔ ｅ ｓ ｕ ｎ ＴＤ Ａ Ａ／ｓ　 Ｔｓ ａ ｏｈ　 ｗ ｒ ｎ ｒ ｒ ｇｎｔｓ　 ａ ｈ Ｉ ｅ ｏ ｌ　ａ ｎ ｉ ｓ ｇ　 Ｎ ，　 ｏ ｅｖｓ ｅ ｉ ｅ ｃ ｎ ｒ ｎ ｕ ｇ ｅｓ　 ｓ ｔ ｉ － ｃ ａｄ　 １ ｒ Ｄ ｎ ｏ ７　 ｅｃｍ ｏｌ ｏ ｍｎ ｙｍ ｔ ｄ ｔｃ ａｎ ａ　ｔ ｔ　ａ ｅ ｏｓ　 ｒ ｔｇ　 ｕ ｎ ｌｒ ｈ ｏ　 ｉ ｍ ａ ｉ ｒ ｅ ｂｙｉ ｃ ｇ ｎ ｍｌｓｏ ｒ ｅ ｅ ｏ ｃ ｆ　ｍｎ ｅｅＨ ｒ　 ｓｍ ａｚ ｔ ｓ ｓａ ｇ ｓ　 ｅ ａ ｔ ｐ ｇ ｓｉ ｔ ｆｎ ｔｏ ａ ｅ ｗ ｕ ｍ ｒｅ　 ｅ　 ｔ ｉ ａ ｗｌ ｓ　 ｒ ｒ ｓ　ｈ ｕ ｃｉｎ ｌ ｅ ｅ　 ｉ ｈ ｔ ｅ ｅ ｓ　ｌ　ｈ ｏ ｅ ｎ　 ｅ ｒ ｅ　 ｅＫ ｙｗ ｒｓ　ｉ 　Ｉ ｅｉ ａ ｍ ｔ ｅｅ ｓ　ｅｅ　ｓ 　　　　ｄ ｅ ｏ 　Ｒ ｅ　 ｓｔｎｌ　ａ ｎｓ　Ｇｎ ｔ ｃ ｎ ｒｏ ｕｇ ｉ ａ ｇ万方数据
突变体库构建方法―是一个在线免费学习平台、通过收集整理大量专业知识，职业资料、考试资料,考试复习指导,试题资料等给大家分享;同时提供学习互动交流;更好的帮助大家学习。}