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病毒的分离与纯化(二)
【来源/作者】北纳创联 【更新日期】
(二)化学方法(沉淀法)
1．中性盐沉淀法：病毒一般在45％以上饱和度的硫酸铵溶液中沉淀，且保持其感染性。通常在含有病毒的组织培养液中加入等体积的饱和硫酸铵．可以很容易地沉淀某些病毒如禽流感病毒、鸡新城疫病毒等。
2．聚乙二醇沉淀法：聚乙二醇(PEG)为水溶性非离子型聚合物。具有各种不同的相对分子质量，主要用于病毒沉淀的相对分子质量的PEG为。将PEG配成50%左右的溶液．或直接将固体PEG加于病毒悬液中，使其达到所需浓度．通常在4℃搅拌过夜．然后离心即可使病毒沉淀。
3．有机溶剂沉淀法：甲醇、三氯甲烷、正丁醇、氟碳化合物等都可用于提纯病毒，量乙醚、三氯甲烷等脂溶剂对于具有脂质囊膜的病毒具有破坏和灭活作用，故不适于这类病毒的浓缩提纯，但其可以提纯没有囊膜的病毒粒子。
4．等电点沉淀法：病毒粒子在等电点时，所携带的正电荷与负电荷可以相互中和，最终失去相互排斥的作用而发生沉淀。多数病毒的等电点在pH4．5～5．5之间，因此在pH3～6范围内均可沉淀，从感染的组织培养液中浓缩病毒，可以获得较好结果。仅一部分细胞成份在等电点时亦发生沉淀，不宜用此法。应用酸性范围的等电点沉淀或分级沉淀病毒时，必须注意pH对病毒活性的影响及病毒粒子电荷与组织蛋白电荷的差异。
5．皂土法：部分病毒在酸性条件下(pH4～4．5)可以用皂土吸附，在碱性条件下pH8．5)又可被洗脱下来，从而达到纯化目的。
6．鱼精蛋白沉淀法：鱼精蛋白为碱性蛋白，其能和直径大于50 nm的病毒共同沉淀面不影响病毒的感染力，具有携带其他蛋白质共沉淀的作用。当向这种沉淀物加入1mol /LNaCl时，病毒又重新释放到悬液中，可以进行下游各种试验，而鱼精蛋白仍然沉淀。直径小于50 nm的小型病毒则不与鱼精蛋白共同沉淀。因此，可利用鱼精蛋白去除病毒材料中直径大于50 nm的异种蛋白质。
(三)物理方法
病毒粒子可以通过超速离心法进一步纯化，它是分离提纯不同大小的病毒的有效方法之一。方法有三种：a)差速离心法；b)速度区带离心法；c)平衡密度梯度离心法(或等密度梯度离心法)。
1．差速离心法：利用不同的粒子在离心力场中沉降的差别，在同一离心条件下，沉降速度不同，通过不断增加相对离心力，使一个非均匀混合液内的大小、形状不同的粒子分步沉淀。这个方法是建立在不同大小和比重的粒子在沉降速度上存在差别的基础上比较简单的浓缩纯化病毒的方法，适用于从组织培养液、鸡胚尿囊液或经过红细胞吸附后释放的病毒悬液中提纯病毒。在由感染细胞或组织匀浆中提取病毒时，由于与病毒大小相近的细胞亚单位及碎片的存在，提纯效果不理想。差速离心法可用于病毒样品的浓缩和粗提。具体方法是将被分离的样品交替进行低速离心与高速(或超速)离心。
2．速度区带离心法：取决于分离物质的颗粒质量，即样品物质的沉降系数．而不是样品的密度。当样品铺在密度梯度介质的页面上，通过离心力的作用，在一定时间后即可形成不同物质的区带而达到纯化的目的，常用的介质有蔗糖、甘油、聚蔗糖等．应用该法可以获得相当纯净的病毒样品。病毒纯化时，要求病毒样品溶液浓度为顶端浓度梯度的1/10．样品体积为离心管体积的5％，借助病毒粒子或其亚单位成分本身的浮密度差别，在离心力作用下降到密度相等的介质层内，最后排列成带状停留不动。密度较小的粒子或成分处于上面的几层，密度较大的粒子或成分位于下面几层。
3．平衡密度梯度离心法：根据粒子的浮密度不同而加以分离。病毒离心时．病毒粒子密度比介质密度大时病毒沉淀．病毒粒子密度比介质密度小时则上浮，该法广泛应用于病毒和核酸的提纯上。纯化病毒常用的方法是蔗糖密度梯度离心法和CsCl密度梯度离心法．能得到比较纯的病毒。
(四)分子筛方法
1．凝胶色谱法：根据粒子的分子大小进行分离纯化。常用方法是柱层析法。
2．超滤法：利用超滤膜将水、盐及小分子滤过，将一定大小的大分子或病毒等颗粒截住．从而使后者得到浓缩的一种方法．是浓缩纯化大容量的病毒样品的非常简单有效的方法之一-其具有防止外来污染、对被浓缩的产物损害很小、回收率高的特点。
3.电泳法：使用5％以下浓度的凝胶．也能够分级分离细胞颗粒、病毒等。
来源：北京标准物质网
【关键词】病毒粒子 聚乙二醇 &
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【2017年整理】PEG沉淀法-病毒提纯方法
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1. Viruses such as baculovirus can be concentrated by polyethylene glycol precipitation.2. Adjust the pH of the virus-containing supernatant to 7.2-7.5. Polyethylene glycol (PEG, MW 6,000) is added to a final concentration of 8% (w/v).3. Stir at 4℃for 2 hours.4. Centrifuge at 10,000 x g for 2 hours.5. Resuspend the pellet in a small volume of appropriate buffer ( e.g., RNase-free ddH2 for virus RNA prep).沉淀法-病毒提纯方法主要是从稀的悬浮液中浓缩病毒，有中性盐沉淀法、聚乙二醇(PEG)沉淀法、有机溶剂沉淀法、等电点沉淀法、皂土法和鱼精蛋白沉淀法等。　1.中性盐沉淀法：病毒一般在45%以上饱和度的硫酸铵溶液中沉淀，且保持其感染性。在含有病毒的组织培养液中加入等体积的饱和硫酸铵，可以很容易地沉淀某些病毒如狂犬病毒、鸡新城疫病毒等。　　2.聚乙二醇沉淀法：聚乙二醇(PEG)为水溶性非离子型聚合物，具有各种不同的分子量，用于病毒沉淀的主要是分子量为2 000～6000的PEG。将PEG配成50%左右的溶液，或直接将固体PEG加于病毒悬液中，使其达到所需浓度，通常在4℃搅拌过夜，然后离心使病毒沉淀。Tanncock(1985年) 成功地用PEG浓缩了禽脑脊髓炎病毒。3.有机溶剂沉淀法：甲醇、氯仿、正丁醇、氟碳化合物等都可用于提纯病毒，但乙醚、氯仿等脂溶剂对于具有脂质囊膜的病毒具有破坏和灭活作用，故不适于这类病毒的浓缩提纯。　4.等电点沉淀法：病毒粒子在等电点时，所携带的正电荷与负电荷相互中和，因而失去相互排斥的作用而发生沉淀。多数病毒的等电点在pH4.5～5.5之间，因此在pH3～6范围内均可沉淀，由于一部分细胞成份在等电点时亦发生沉淀，此法效果不太理想，但从感染的组织培养液中浓缩病毒，可以获得较好结果。应用酸性范围的等电点沉淀或分级沉淀病毒时，必须注意pH对病毒活性的影响及病毒粒子电荷与组织蛋白电荷的差异。　5.皂土法：Girin(1989年)应用皂土在酸性条件下(pH4～4.5)吸附轮状病毒SA-11，再在碱性条件下（pH8.5），又使其洗脱下来，从而达到纯化目的。??6.鱼精蛋白沉淀法：鱼精蛋白为碱性蛋白，具有携带其它蛋白质共沉淀的作用，能和直径大于50nm的病毒共同沉淀而不影响病毒的感染力。当向这种沉淀物加入1mol/LNaCl时，病毒又重新释放到悬液中，而鱼精蛋白仍然沉淀。直径小于50nm的小型病毒则不与鱼精蛋白共同沉淀。因此，可利用鱼精蛋白去除病毒材料中直径大于50nm的异种蛋白质。聚乙二醇HOCH2(CH2OCH2)nCH2OH(n＞4)( Polyethylene Glycol 简写为 PEG)，它的亲水性强，溶于水和许多有机溶剂，对热稳定，有广泛围的分子量，在生物大分子制备中，用的较多的是分子量为的 PEG。PEG 的沉淀效果主要与其本身的浓度和分子量有关，同时还受离子强度、溶液pH 和温度等因素的影响。在一定的pH 值下，盐浓度越高，所需PEG 的浓度越低，溶液的pH 越接近目的物的等电点，沉淀所需PEG 的浓度越低。在一定范围内，高分子量和高浓度的PEG 沉淀的效率高。以上这些现象的理论解释还都仅仅是假设，未得到充分的证实，其解释主要有：①认为沉淀作用是聚合物与生物大分子发生共沉淀作用。②由于聚合物有较强的亲水性，使生物大分子脱水而发生沉淀。③聚合物与生物大分子之间以氢键相互作用形成复合物，在重力作用下形成沉淀析出。④通过空间位置排斥，使液体中生物大分子被迫挤聚在一起而发生沉淀。有机聚合物沉淀的优点是：①操作条件温和，不易引起生物大分子变性；②沉淀效能高，使用很少量的PEG 即可以沉淀相当多的生物大分子；③沉淀后有机聚合物容易去除。水溶性非离子型聚合物沉淀法常用的聚合物为聚乙二醇（PEG）及硫酸葡聚糖。水溶性聚合物沉淀蛋白质的机制尚不清楚，大致有如下解释：①聚合物与蛋白质形成共沉物；①聚合物与蛋白质之间发生水的重分配；①聚合物与蛋白质形成复合物。此法受许多因素影响，主要是pH、离子强度、蛋白质浓度和PEG的分子量等。分子量为 的PEG皆适宜于做蛋白沉淀用。如若使用得当，效果甚为满意。一般认为，PEG浓度在3％～4％时沉淀免疫复合物，6％～7％可沉淀IgM，8％～12％可沉淀I
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全部答案（共1个回答）
PEG是聚乙二醇英文名polyethylene glycol的简称，高聚合度的也称为聚环氧乙烷（PEO），后面的数字是指聚合度，即平均分子量在...
在和讯网输入个股代码，在价值评估一栏里就有详细的数据。
PEG：市盈率与收入增长率之比，PEG低的股票相对价值较高，以PEG为评分依据，给予0到100之间的一个...
PEG指标(市盈率相对盈利增长比率)
PEG就是用公司的市盈率除以公司的盈利增长速度，是股票的一种估值办法，主要针对成长股估值用。选股时就是选那些市盈率较低，同...
PEG20、WAX泛指标准的聚乙二醇柱子。
FFAP柱是一类用对苯二甲酸改性的聚乙二醇作为固定相的(DB-FFAP)。这种色谱柱常用于分析分离酸性化合物。
答: 避孕环的原理是怎样的呢？有点好奇，避孕环是放在哪个位置的呢，为啥能避孕。
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　　一、人体...
答: 　2011年二级建造师考试时间(部分省市时间不统一)
6月26日　 上午9:00-12:00
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【求助】PEG6000在缓释片中如何应用
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这个帖子发布于6年零25天前，其中的信息可能已发生改变或有所发展。
一普通的缓释片中含有PEG6000和硬脂酸镁，请问PEG6000该如何应用啊？、
不知道邀请谁？试试他们
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cayinggu 编辑于
你用做什么 助溶还是致孔，增塑。
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API应该是难溶性成分吧？PEG6000很可能是拿来做固体分散体改变API溶解性质的。
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API完全是水溶性的，要把它做成缓释制剂，有HPMC
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我觉得是包衣材料，哈哈，方便的话可以晒处方看看。
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PEG6000的量有多大？根据用量差不多推算得出是干吗用的，ps这个是包衣片不？膜控、骨架、渗透泵还是小丸/片压片？
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jdin PEG6000的量有多大？根据用量差不多推算得出是干吗用的，ps这个是包衣片不？膜控、骨架、渗透泵还是小丸/片压片？是普通素片，原研辅料中含有，用量未知，什么类型的也未知啊
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一楼说是缓释片啊？如果是普通素片你看下处方里有没有其他粘合剂成分，要是没有的话PEG可能被用作粘合剂，另外如果是用直压工艺的缓释片也可能用PEG作为粘合剂的组成成分。
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说明：分离分析含氧化合物(如醇、醛)、维生素、脂肪酸酯、水和农药
Merck &PEG6000 & 聚乙二醇 &CAS＃：，聚乙二醇 &说明：分离分析含氧化合物(如醇、醛)、维生素、脂肪酸酯、水和农药聚乙二醇6000分子量：CAS＃：外观：白色或浅黄色蜡状固体或片状、颗粒状特性：熔点：56-63℃溶解性：溶于水和乙醇储存条件：室温阴凉干燥保存聚乙二醇6000，现有规格P & & & 250g&P & & & 500g&P & & &1kg
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