关于某猪场HCV 和PRRSV 双重感染的诊治报告　
□ 代振江,刘 钊,曾智勇,等
　　代振江,刘 钊,曾智勇*,汤德元,梁海英,王伟丞
　　(贵州动物科学学院,贵州 贵阳 550025)
　　2014 年12 月,贵州安顺某猪场,现有存栏育肥猪300 余头,猪群已免疫猪瘟(HC)、口蹄疫和蓝耳病(PRPS)疫苗,其中蓝耳病疫苗已接种90 d。
　　12 月上旬,约140 日龄的育肥猪相继发病,临床症状主要表现为耳朵发绀,食欲不振、精神委顿、腹泻,高热1 周左右。对病死猪进行了剖检,其中1 头经产病死母猪解剖见肺脏严重出血及大量化脓性病灶,呈绿色,且散发腐尸臭味,单侧肾肿大,内有积水(形似囊肿);1头发病的育肥猪解剖可见肾脏存在大量点状出血(似雀斑肾),肺脏散见陈旧性出血斑,且间质性肺炎明显,淋巴结肿大出血呈黑色,脾脏大范围梗死。根据上述情况,初步判断猪群存在HCV和/ 或PRRSV 感染。为了进一步确诊,分别进行了组织病料的实验室核酸检测,其结果显示该猪场发病猪群存在HCV 和PRRSV 的双重感染,现将检测过程报道如下。
　　1 材料
　　1.1 病料
　　采自1 头病死母猪和1 头发病育肥猪的组织病料(肝、肾、肺、淋巴结和脾脏等脏器)。
　　1.2 主要试剂
　　TaKaRa MiniBEST Viral RNA/DNA E x t r a c t i o n K i t V e r . 4 . 0 、PrimeScript One Step PT-PCR KitVER.2.0、DL2000 皆购自大连宝生物公司;其他试剂均为国产分析纯。
　　2 方法
　　2.1 病料的处理及核酸的提取
　　分别取适量剖检病猪的肝、肾、肺脏、淋巴结和脾脏进行碾磨匀浆,反复冻融3 次后,12 000 r/min 离心10 min,取上清,用TaKaRa MiniBEST ViralRNA/DNA Extraction Kit Ver.4.0试剂盒进行核酸的提取。
　　2.2 病原核酸检测
　　分别用HCV 和PRRSV 的特异性引物,以提取的核酸为模板,参照一步法RT-PCR 试剂盒说明书, 对HCV、PRRSV 进行核酸检测, 其反应总体系为50μL :2×1 StepBuffer25μL, 模板7.0μL, 上下游引物各1.0μL,PrimeScript 1 Step EnzymeMix 2μL,RNase Free H2O 14μL ;反应程序为:95 ℃ 594 ℃ 30s,57 ℃ 30 s,72 ℃ 30 s,35 个循环;72 ℃ 10 min。扩增产物经1% 琼脂糖凝胶电泳检测。
　　3 结果
　　病原核酸检测结果表明该猪场送检的发病猪存在HCV、PRRSV 的双重感染(图1)。
　　4 结果分析讨论
　　通过实验室诊断可知,该猪场存在猪瘟和蓝耳病的双重感染,尽管该猪场已免疫猪瘟、蓝耳病和口蹄疫,但是猪群免疫后未及时地做抗体检测以确定免疫是否有效,从临床发病情况及病原检测结果可知,该猪场存在猪瘟、蓝耳病免疫失败现象。由于猪瘟、蓝耳病免疫失败,使猪群处于无保护状态,又加之入冬后昼夜温差变化较大,猪场饲养管理不当等应激因素,致使抵抗力下降,故而发病。PRRS 是一种公认的免疫抑制性疫病,机体感染病毒后可导致免疫力严重下降,从而继发其他病原体的多重或混合感染,进而导致临床症状复杂化和损失程度严重化[1]。猪瘟的流行形式已从频发的大流行转变为多地区散发性流行,大多表现为非典型的温和性流行,其临床症状显著减轻,死亡率低或呈亚临床感染,母猪发生繁殖障碍等,导致其长期带毒、散毒,使得猪瘟病毒在猪场广泛存在,常因各类应激诱发猪瘟疫情,临床上多与PRRSV、PCV2、副猪嗜血杆菌以及附红细胞体等多重或混合感染[2-5]。鉴于此,猪场在进行免疫之后应进行相关抗体检测,这样才能掌握猪群疫苗免疫的效果,以确定疫苗免疫是否有效,对抗体水平不达标的要认真分析免疫失败的原因并及时补免。
　　此外,当前猪病多是由于几种病原体协同作用而造成的,混合感染已成为猪场发病的主要形式,根据病毒的生物学特性和猪病的流行特点,当前对于蓝耳病、猪瘟及圆环病毒感染等病毒性疫病的防控,免疫接种只是一个重要手段,更重要的是要落实综合性防控措施[6]。有资料表明,带毒仔猪无论是吃初乳,还是免疫接种疫苗,均不能阻止因HCV 感染而引起的死亡。所以对发病猪群立即进行彻底的清洁和消毒,对发病猪进行严格的隔离观察或治疗,无治疗价值的建议直接无害化处理。病症较轻的猪只可隔离后对症治疗。在猪病毒性疫病的综合防控中,养殖环境是基础,病原诊断和抗体监测是保障,疫苗免疫是手段,加强饲养管理是重点,隔离治疗仅是补充。
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摘自： 　　
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某养猪场CSFV、PRRSV、PCV2和PRV多重感染病例的报道(一)
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　　母猪繁殖障碍又称繁殖障碍综合征，其病因有非传染和传染性两类，猪瘟病毒(CSFV)、猪蓝耳病毒(PRRSV)、圆环病毒2型(PCV2)、猪伪狂犬病毒(PRV)等是引起母猪繁殖障碍疾病的主要病原微生物。猪瘟是由CSFV引起的猪的一种急性或慢性、热性和高度接触性传染病，其特征为发病急、高热稽留和细小血管变性，引起全身泛发性小点出血，脾脏梗死;猪繁殖与呼吸综合征是由PRRSV引起的猪的一种繁殖障碍和呼吸系统的传染病，其特征为厌食、发热、怀孕后期发生流产，产死胎和木乃伊胎，幼龄仔猪发生呼吸系统疾病和大量死亡;猪圆环病毒病是指以PCV2为主要病原、单独或继发或混合感染其他致病微生物的一系列疾病的总称，其临床症状特征主要为体质下降、消瘦、贫血、黄疽、生长发育不良、腹泻、呼吸困难、母猪繁殖障碍、内脏器官及皮肤的广泛病理变化;猪伪狂犬病是由PRV引起的一种急性传染病，临床特征为体温升高，新生仔猪表现神经症状，成年猪常为隐性高感染，妊娠母猪感染后可引起流产、死胎及呼吸系统症状。　　贵州省某种猪场一周内连续发生30余头母猪早产和(或)产死胎。据述，该猪场2016年8月份对CSFV、口蹄疫(FMDV)和PRV进行了普免。该猪场保育猪中出现体温升高、嗜睡、皮肤发红、食欲废绝、喘气、被毛粗乱、精神沉郁、喜卧等症状。病猪剖检可见皮下大量出血点;肾脏布满针尖状出血点;肺脏存在间质性肺炎、胸腔积液、心包积液。根据上述情况，怀疑该起病例与病毒感染相关。为了进一步确诊，对CSFV、PRRSV、PCV2和PRV等6种常见病原进行了实验室核酸检测，现将检测过程报道如下。　　1、材料　　1.1 病料　　贵州省某种猪场送检的母猪流产死胎。　　1.2 试剂　　根据GenBank中关于CSFV、PRRSV、PCV2、PRV、PPV和JEV序列设计并合成6对特异性引物引物(预扩增条带大小分别为CSFV 508 bp、PRRSV 434 bp、PCV2 353 bp、PRV 305 bp、PPV 271 bp和JEV 1 015 bp)，核酸提取试剂盒，PrimeScript One Step RT-PCR Kit Ver.2.0等。　　2、方法　　通过该养殖场送检人员了解饲养情况、免疫接种、发病死亡情况、药物治疗和临床症状之后将送检流产死胎进行解剖观察并记录。将采集的组织混合样品研磨匀浆，液氮反复冻融3次后12 000 r/min离心10 min，取上清，用TakaRa Mini BEST Viral RNA/DNA Extraction Kit Ver 4.0试剂盒提取核酸。　　按照一步法PrimeScript One Step RT-PCR Kit Ver.2.0试剂盒说明书对CSFV、PRRSV、PCV2、PRV、PPV和JEV进行检测。反应总体系为50 &L：2&1 Step Buffer 25 &L，模板7.0 &L，上下游引物各1.0 &L，Prime Script 1 Step Enzyme Mix 2 &L，Release Free H2O 14 &L;反应条件均为：95 ℃ 594 ℃ 30 s，57 ℃ 30 s，72 ℃ 30 s，35个循环;72 ℃ 10 min。扩增产物经1.5%琼脂糖凝胶电泳检测。
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保健养猪饲养方案十
猪场呼吸道疾病解决方案
一、猪呼吸道疾病综合征
猪场呼吸道疾病中，首先要解决猪呼吸道疾病综合征。在控制猪呼吸道疾病综合征方面，要避免滥用药物，因为简单的疫苗注射、抗生素防治，甚至结合中草药提取物和抗菌肽等特殊方式都难达到目的。绿叶科研团队通过多年的研究和实践，采取清除猪体内的PRRSV、PCV2和支原体，保护猪呼吸道屏障（气管和支气管粘膜）和肺免疫功能（肺泡-单核巨噬细胞），控制好猪舍内的空气质量之&三清除、二保护、一控制&方案，能很好的控制猪场呼吸道疾病的发生。
1.猪呼吸道疾病综合征的发病原因及影响
猪呼吸道疾病综合征（PRDC）是由病毒(蓝耳病病毒、猪流感病毒、伪狂犬病毒、猪圆环病毒、猪呼吸道冠状病毒)、细菌(副猪嗜血杆菌 、猪巴氏杆菌、放线杆菌)、寄生虫（蛔虫）和支原体等多种致病微生物为主要感染源，在各种不良因素（如各种应激、饲养管理不当&&如饲料霉菌、环境恶劣等）的影响下和机体抵抗力下降时等多因素作用下，破坏猪呼吸道粘膜的保护屏障和肺的免疫功能，使患猪表现为呼吸困难、生长减缓、饲料报酬降低，甚至导致死亡的猪场常见多发疾病。猪呼吸道疾病综合征特别是在昼夜温差大的春秋季和寒冷需保温的冬季是该病的高发期。饲养管理不到位（如饲喂发霉变质的饲料、饲养密度大、强烈的应激、保健缺失和免疫不当等）与卫生条件差（如猪圈脏、潮湿、粉尘多、通风换气不良等）的猪场，在猪群抵抗力下降时就易发生本病，严重影响猪群的生长发育和饲料报酬。猪呼吸道综合征（PRDC）给我国养猪业带来巨大的经济损失。特别是近年来，发病率和死亡率越来越高，成为了影响我国养猪业发展的三大重要疫病之一，成为影响我国养猪业发展的重要&杀手&。
2.猪呼吸道疾病综合征的保健防控措施
主要措施包括加强管理，控制和净化原发病原，减少继发细菌的数量和种类，改善环境和减少应激，且控制好饲料中的霉菌毒素。防控原则：&三清除、二保护、一控制&&&清除猪体内蓝耳病病毒、圆环病毒和支原体，保护呼吸道屏障（气管和支气管粘膜）和肺免疫功能（肺泡-单核巨噬细胞），控制好猪舍内的空气质量，从根本上解决猪场的呼吸道综合征。 &
猪呼吸道疾病综合征的具体保健措施：
①做好免疫保健计划，控制PRRSV、PCV2和支原体等原发病。根据猪场的具体情况制定疫病的免疫保健计划，主要应针对猪场的原发病原制订免疫接种方案；其它原发病原的免疫，可根据具体情况实行。为减少疫苗免疫应激，提高疫苗接种效果，建议使用&奥得曼&免疫调节剂。
②联合用药保健预防方案：仔猪断奶时，建议使用2%的康喘1号+替米考星100-200克/吨添加（净含量），拌料连续使用10-22天。
③联合用药治疗控制方案：对于已发病的猪群，建议使用2%的&康喘1号&+替米考星+氟苯尼考，连续使用7天后，2%的&康喘1号&继续拌料添加使用15-20天，以防复发。
总之，当猪群发生呼吸道疾病综合征后，疗效不佳，病程较长，损失较大。最好提前保健预防，控制工作应尽早预防，并查找确定原发病原，控制好继发感染，从而最低限度的降低呼吸道综合征所带来的损失。
二、猪气喘病
1.猪气喘病的发病原因及研究进展：
猪气喘病是猪场呼吸道疾病的其中一种，它是由猪肺炎支原体引起的一种接触性传染病，以咳嗽、气喘为临床特征，全世界38%以上猪场都存在此病，已成为呼吸道疾病综合征的元凶和核心病原体。气喘病因多呈慢性病理过程，采用常规治疗措施不仅费用高，工作量大，容易复发，而且不能解决病猪生长停滞、饲料报酬低等难题。湖南农业大学和绿叶公司的研究人员按照&扶正祛邪&保健原则，制定了气喘病的保健康复综合措施，并应用天然植物提取物，研制出气喘病保健康复产品&康喘1号&，攻克了这一世界养猪难题。
2.猪气喘病的的保健防控措施（康喘1号的使用方法）
&康喘1号&的使用方法：1、老疫区慢性气喘病的营养护理措施：慢性气喘病，以长期咳嗽和气喘为主，尤以清晨、夜晚、运动和进食后加重，体温不高为特征。措施：康喘1号按2%比例拌料，饲喂10-15天。2、急性气喘病康复期的营养护理措施：配合药物治疗，待症状有所缓解，在饲料中添加2%康喘1号保健护理10-15天，促进康复。
绿叶公司产品订货电话：1
猪场呼吸道疾病是一个非常复杂问题，具体问题还需具体分析，欢迎咨询具有丰富临床经验养猪专家、湖南农业大学动物医学院临床兽医学刘进辉教授，电话：；文利新教授，电话。由于刘教授、文教授等还担任着繁重的教学及科研任务，建议您咨询前先发短信预约，咨询免费，谢谢！
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打了蓝耳疫苗还发病，因为有抗体依赖性增强现象
作者：黎先伟来源：永顺人生时间： 15:30点击:次
　　笔者几年前在广东地区做技术服务时遇到这样一个猪场，当时猪场存栏约300头母猪，之前一直未使用过蓝耳苗。母猪始终保持一定比例的发情障碍、奶水质量差，比较多的死黑胎，甚至间歇性流产（5％左右），而保育猪成活率长期低于90%，且存在较大比例的呼吸道症状，经诊断该场属于蓝耳病不稳定场。猪场场长为了稳定猪场的生产，且出于安全性考虑，全场母猪和仔猪普免蓝耳灭活苗。然而，猪场的状况并没有好转反而变得更加严重。为什么打了蓝耳苗还发病？当时笔者也疑惑不解。不过现在有答案了，因为蓝耳病存在抗体依赖性增强作用（ADE）。
　　什么是抗体依赖性增强作用？
　　抗体依赖性增强作用（ADE），是指病毒特异性母源抗体或抗体能使病毒更易于侵入机体的靶细胞，从而导致感染增强。换句话说，在某些情况下，疫苗免疫产生的抗体不但不能提供保护作用，反而有助于病毒的复制，协助病毒进入靶细胞，提高感染率，使病毒的数量大大增加。
　　ADE的作用机理：
　　研究人员推断，病毒感染的ADE作用至少存在5种机制。简单来说，这5种机制的共同特征是低水平的抗体可促使病毒与靶细胞结合，增强病毒的复制。ADE作用主要涉及以巨噬细胞为宿主的病毒（如蓝耳病病毒），这些巨噬细胞的表面受体可以与针对病毒蛋白的抗体的Fc区络合，而抗体又能与病毒结合，这样就增大了病毒感染宿主靶细胞的机会。值得注意的是，这里说的抗体（例如ELISA检测中常测的N抗体等）是指非中和性抗体（因为中和抗体可清除病毒，而不会出现ADE现象）。不过，最新的研究发现，亚中和剂量的抗体能通过与靶细胞表面的FC受体结合而增强病毒的感染作用，蓝耳病病毒（PRRSv）感染过程中，抗原抗体复合物与PRRSv同时存在时，抗原抗体复合物可促进PRRSv侵入肺泡巨噬细胞，从而增大PRRSv的复制和感染作用。
　　研究实例：
　　体内外的研究结果证实，在肺泡巨噬细胞培养物中加入一定滴度的PRRSv抗体，可使PRRSv增殖的滴度提高10倍，甚至100倍；而在病毒中加入PRRSv抗体，再注入妊娠中期的胎儿，结果病毒在胎儿内的增殖水平比单独接种PRRSv的显著增强，致病性也显著提高，同时在临床上常见到的刚断奶仔猪的呼吸道症状要比育成猪的严重更多。此外，研究发现，同一种PRRSv毒株攻毒后，具有低水平中和抗体的猪要比没有抗体的猪的病毒血症持续时间更长且更严重。这就是为什么很多猪场频繁出现注射了蓝耳疫苗后10～20天仍然表现出与蓝耳病相关的呼吸道和繁殖障碍等症状的原因。由此可见，ADE对PRRSv的增殖和致病性具有重要的影响，也说明不同水平的PRRSv抗体在蓝耳病的防控中起到完全不同的作用。简单来说，低水平的抗体会促进病毒的复制，而足够高水平的（中和）抗体才能有效地抑制病毒的增殖且达到控制病毒扩散的目的。
　　临床意义：
　　（1）为了防止PRRSv出现抗体依赖性增强作用（ADE），对于蓝耳阳性猪场，建议不要使用灭活疫苗，因为注射灭活疫苗只能产生体液免疫，且达到产生高水平的中和抗体需要较长的时间，而在低水平的抗体时，有可能会促进猪场内PRRSv的增殖，加上一些应激等不良因素，从而可能会导致猪群爆发蓝耳病。
　　（2）针对ADE现象，我们必须正确认识猪场猪群的健康状态，客观对待猪群是否存在PRRSv的（潜伏）感染，真正掌握猪群的生长状态。此外，疫苗的选择和免疫的时机也十分关键。值得注意的是，正在发病的猪群一般不建议紧急接种蓝耳疫苗，这主要也是因为ADE现象，接种疫苗后低滴度的抗体反而会标示巨噬细胞，更容易引来PRRSv与巨噬细胞结合，促发PRRSv的增殖。因此，疫苗免疫只有在感染前免疫（保证足够的产生中和抗体时间），才能对PRRSv具有良好的免疫保护效果。
责任编辑：王妍琪&&
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