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pMBP-T vector，MBP标签表达T载体
MBP标签可以在一定程度上增加蛋白可溶性，该载体可以用来构建含N端MBP标签的表达载体，一步克隆到位，无需两步克隆，省去一半时间，还不需要考虑酶切位点，还节约人力物力，实在是克隆表达的好帮手。
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pSecTag2A-HBV-L真核分泌表达载体的构建及表达
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&&目​的​探​索​乙​型​肝​炎​病​毒​大​蛋​白​(​L​蛋​白​)​的​分​泌​表​达​。​方​法​用​P​C​R​方​法​克​隆​得​到​H​B​V​-​L​基​因​,​通​过​酶​切​、​连​接​、​转​化​构​建​p​S​e​c​T​a​gA​―​H​B​V​―​L​分​泌​型​真​核​表​达​载​体​：​通​过​脂​质​体​介​导​的​方​法​瞬​时​转​染9T​细​胞​,​用​R​T​-​P​C​R​和​W​e​s​t​b​l​o​t​鉴​定​融​合​蛋​白​的​表​达​。​结​果​成​功​构​建​真​核​分​泌​表​达​载​体​p​S​e​c​T​a​gA​―​H​B​V​―​L​.​H​B​V​―​L​在​m​R​N​A​和​蛋​白​水​平​表​达​成​功​。​结​论​融​合​I​g​K​V​_​T_​C​区​域​的​外​源​性​分​泌​信​号​能​有​效​的​引​导​L​蛋​白​的
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更直观一点，给出的positive值就可以看出同源度了。用vector NTI等软件可以对两个序列进行序列比对，就可以得到进化树。 若同时拿家族中3个序列进行比对不太明白你想问什么
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出门在外也不愁请问关于抗体信号肽的问题(信号肽,抗体,分泌表达) - DNA技术 - 生物秀
标题: 请问关于抗体信号肽的问题(信号肽,抗体,分泌表达)
摘要: [请问关于抗体信号肽的问题(信号肽,抗体,分泌表达)] 我从库里筛到人源性抗体片段，想做CHO分泌表达，但没有信号肽，如何设计，谢谢！！1 关键词:[信号肽 抗体 分泌表达]……
我从库里筛到人源性抗体片段，想做CHO分泌表达，但没有信号肽，如何设计，谢谢！！1
回复真核表达可溶性的分泌蛋白通常在N端有信号肽，指导它们定位到内质网上的转运机器。在从内质网通过高尔基体运输到细胞表面的囊泡运输之后，高尔基体发生的分泌小泡与质膜融合，泡内的蛋白被释放到胞外空间想CHO分泌表达，又没有信号肽，个人认为可尝试两种解决途径：1.可以用PCR的方法在该序列的5‘添加信号肽编码序列，因为一般的信号肽为15-25个氨基酸，加什么样的信号肽可参照genebank其相应cDNA的5‘端序列；2 利用构建有信号肽真核表达载体如pFLAG-CMV-3，pSecTag等，缺点很贵，并可能在表达产物切除信号肽时多或少几个氨基酸 。里讨论的较多的是原核表达的信号肽问题，现将有关真核信号肽的相关讨论略一小结，希望对你有用。真核信号肽相关讨论：信号肽分析网站
www.cbs.dtu.dk/services/SignalP/
www.stepc.gr/~synaptic/sigfind.html
bioinformatics.leeds.ac.uk/prot_analysis/Signal.html 信号肽分析软件包：蛋白序列分析软件包ANTHEPROT 5.0（可从bio-soft下）回复蓝天,非常谢谢您！有空请你吃个饭！呵呵！！！
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人生存素survivin的克隆与原核分泌表达
人生存素survivin的克隆与原核分泌表达
Cloning and secretory expression of recombinant human survivin in E.coli
发布时间：　　浏览量：347　　收藏数：0　　评论数：
代晓华<sup style='vertical-align:font-size:12 color:#B9，，
姜琳琳1，，
熊冬生1，，
1、中国医学科学院北京协和医学院，血液病医院（血液学研究所）实验血液学国家重点实验室；&&&&&&
2、天津市口腔医院暨南开大学附属口腔医院实验研究中心；
用RT-PCR方法从人乳腺癌细胞MCF-7中克隆survivin基因，将其重组到pAYZ表达载体中，构建带有六聚组氨酸纯化标记的人survivin基因原核表达载体pAYZ-survivin。将该载体转化大肠杆菌16C9，获得稳定高效的蛋白表达，融合蛋白主要以可溶性状态分泌到周质腔内存在。分离提取蛋白，Hitrap金属螯合柱进行亲和层析纯化，并经western blot验证了高纯度survivin融合蛋白的表达。此研究为靶向survivin蛋白的研究尤其是小分子抑制剂的筛选模型建立奠定了基础。
生物医学工程；生存素；分泌表达；大肠杆菌；凋亡
DAI Xiaohua1,，
JIANG Linlin2,，
XIONG Dongsheng2,，
ZHOU Yuan2,*
1、State Key Laboratory of Experimental Hematology, Institute of Hematology and Blood Diseases Hospital, Chinese Academy of Medical Sciences and Peking Union Medical College；Experimental Research Center, Tianjin Stomatological Hospital, Affiliated Dental College of Nankai University；&&&&&&
2、State Key Laboratory of Experimental Hematology, Institute of Hematology and Blood Diseases Hospital, Chinese Academy of Medical Sciences and Peking Union Medical College；
Abstract：
The full-length human survivin gene was amplified from breast cancer cell line MCF-7 by RT-PCR, followed by cloned into pAYZ expression vector to construct the recombinat pAYZ-survivin with 6×His-tag. E.coli 16C9 was transformed with the recombinant vector, and the recombinant survivin protein was secreted into the periplasm of E.coli in a soluble form. After isolation and purification by HiTrap Chelating column, western blot analysis was performed to confirm the soluble expression of the recombinant protein. In conclusion, the soluble recombinant survivin expressed in E.coli provide a useful tool for screening of small molecule inhibitors targeting survivin.
Keywords：
E. apoptosis
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&&&&（150）
作者简介：
戴晓华（1975-），女，硕士研究生，主要研究方向为肿瘤分子生物学
通信联系人：
周圆（1977-），女，副研究员，主要研究方向为抗肿瘤药物药理
【收录情况】
中国科技论文在线：代晓华，姜琳琳，熊冬生等.&人生存素survivin的克隆与原核分泌表达[EB/OL].北京：中国科技论文在线&
[].http://www./releasepaper/content/.
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