胃癌c－erbB－2癌基因检测对判断肿瘤转移的意义
胃癌ｃ－ｅｒｂＢ－２癌基因检测对判断肿瘤转移的意义朱孝成，沈士刚，林超鸿摘要本文应用免疫组化方法研究１０６例胃癌石蜡标本，ｃ－ｅｒｂＢ－２染色阳性２０例（１８．９％）。ｃ－ｅｒｂＢ－２染色阳性同腹膜种植、肝转移、组织类型相关。ｃ－ｅｒｂＢ－２阴性表达五年生存率高于阳性表达，但无显著差异。ｃ－ｅｒｂＢ－２对预后无显著性影响，ｃ－ｅｒｂＢ－２检测可帮助判断肿瘤转移。关键词胃癌，ｃ－ｅｒｂＢ－２癌基因，转移ＡＮＡＬＹＳＩＳＯＦＴＨＥＣＯＲＲＥＬＡＴＩＯＮＯＦＴＵＭＯＲＭＥＴＡＳＴＡＳＩＳＡＮＤＥＸＰＲＥＳＳＩＯＮＯＦｃ－ｅｒｂＢ－２ＯＮＧＡＳＴＲＩＣＣＡＲＣＩＮＯＭＡ￥ＺｈｕＸｉａｏｃｈｅｎｇ，ｅｔａｌ．（ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＧｅｎｅｒａｌＳｕｒｇｅｒｙ，ＡｆｆｉｌｉａｔｅｄＨｏｓｐｉｔａｌｏｆＸｕｚｈｏｕＭｅｄｉｃａｌＣｏｌｌｅｇｅ，Ｘｕｚｈｏｕ２２１００２．）Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｔｈｅｏｎｃｏｇｅｎ...&
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第一部分c-erbB-2癌基因蛋白和间隙连接蛋白43在胃癌组织中的表达及意义目的:探讨c-erbB-2癌基因蛋白和间隙连接蛋白43(connexin,Cx43)在腺型胃癌中的表达并分析其临床意义。方法:应用免疫组织化学SP法分别检测c-erbB-2癌基因蛋白、Cx43在48例腺型胃癌和26例胃炎组织中的表达,并分析其与临床病例参数的关系。结果:c-erbB-2癌基因蛋白、Cx43阳性呈棕黄色颗粒定位于细胞膜或细胞质; c-erbB-2癌基因蛋白在胃癌中的阳性表达率(50.0%)显著高于胃炎粘膜组织的阳性率(χ2=6.70,p0.05);Cx43在胃癌中阳性率(43.8%)显著低于胃炎粘膜组织的阳性率(χ2=23.03,p0.05);c-erbB-2癌基因蛋白的表达与胃癌的大小、分化程度及淋巴结转移呈显著相关(χ2=6.00、9.41、5.49,p值均0.05); Cx43蛋白表达降低或缺失同样与胃癌的分化程度及淋巴结转移呈显著相...&
(本文共44页)
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研究背景和目的乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤，其发病率在全球均呈上升趋势，每年以0.2％～8％的幅度上升，并有年轻化趋势。在欧美等国家，乳腺癌已成为女性的主要死因之一。在我国上海市，乳腺癌已位居女性恶性肿瘤的首位，而其转移和复发是患者常见的死亡原因，因此对乳腺癌患者的预后进行判断是乳腺癌综合治疗不可缺少的一部分。临床分期、淋巴结转移情况等因素是乳腺癌预后判断较为常用的指标，目前已有多种肿瘤癌基因和抑癌基因用来判断肿瘤的转移与预后。已经明确C-erbB-2基因蛋白的表达、p53基因突变是乳腺癌预后的危险因素，但它们在乳腺癌发生、发展的全过程中的作用存在不同的结论，与临床分期、淋巴结转移、病理组织学类型以及患者年龄等相关性结果报道不一。本实验对79例原发性乳腺癌C-erbB-2、p53基因的测定，并对它们在乳腺癌组织中表达作相关研究，目的在于阐明C-erbB-2、p53基因表达与乳腺癌患者临床分期、淋巴结转移及肿瘤大小等因素进行临床相...&
(本文共36页)
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目的：检测基因c-erbB-2、c-met、nm-23的蛋白表达及mRNA表达，分析其与胃癌的临床病理因素之间的关系，以及胃癌中c-erbB-2、c-met、nm-23的蛋白表达与mRNA表达的相关性。评估基因c-erbB-2、c-met、nm-23在胃癌的诊断及病情判断方面的作用。方法：1)2005年6月至2005年12月期间在汕头大学医学院第一附属医院外科及胃镜室收集胃癌组织52例，非肿瘤组织42例，进行相应实验检测及分析。2)应用免疫组织化学(IHC)二步法检测胃癌组织及非肿瘤组织中c-erbB-2、c-met、nm-23的蛋白表达。3)剪取胃癌手术切除后的新鲜胃癌组织块，经TRIZOL法提取组织总RNA，逆转录为cDNA后进行半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)，扩增产物经2％琼脂糖凝胶电泳分离，紫外灯下观察并拍照、记录、分析结果并送测序分析扩增产物特异性。4)应用SPSS13.0统计软件对数据进行统计学分析。结果：...&
(本文共51页)
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在术前判断胃癌临床分期有效方法的同时探索胃癌基因表达产物一临床病理特征及预后之间的关系,加深对胃癌细胞生物学行为的理解。本文对手术切除胃癌组织p53、c-erbB-2、p21、nm23多基因产物表达进行了检测,旨在探讨胃癌组织p53、c-erbB-2、p21、nm23多基因产物表达产物与胃癌的分化程度,肿瘤浸润程度,肿瘤转移程度及临床分期的关系,找到指示胃癌临床病理特征和预后的可靠分子指标,建立一种能被临床普遍应用的非手术判定胃癌临床分期与预后的方法,用以指导胃癌尤其是不能手术切除的中、晚期胃癌的治疗。1材料与方法1.1标本来源收集1995年1月~2004年8月期间经胃镜活检诊断并手术切除的胃癌配对标本74例,均为进展期胃癌,其中男48例,女26例,平均年龄55·8岁。按世界卫生组织制定的标准进行组织分型[1],并根据肿瘤细胞分化程度分为高分化组(管状腺癌40例,乳头状腺癌4例)和低分化组(低分化腺癌27例,粘液腺癌3例);慢性...&
(本文共4页)
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目的:宫颈癌(cervical cancer)是最常见的妇科恶性肿瘤之一。在全球女性恶性肿瘤中其发病率仅次于乳腺癌,在发展中国家则居首位,全世界范围内每年新增病例数45万-50万,其中发展中国家占80%,我国为13万多,占总人数的1/3.宫颈癌的发生是一个涉及多基因改变和多阶段致癌的复杂过程。其中原癌基因活化或抑癌基因失活以及抗凋亡基因活性增强或促凋亡基因活性减弱的综合结果在宫颈癌的发生发展中起非常重要的作用。结直肠癌缺失基因( deleted colorectal carcinoma DCC),是一个重要的肿瘤抑制基因。它通过影响细胞凋亡参与肿瘤的发生。C-erbB-2基因是表皮生长因子受体家族的成员,基因过度扩增在肿瘤发生、抑制凋亡、细胞迁移、肿瘤转移、血管生存中起重要作用。已有研究证明,在人乳腺、卵巢、子宫内膜及输卵管肿瘤中发现有C-erbB-2基因的扩增。但迄今未见DCC、C-erbB-2基因表达与宫颈癌关系的研究,因此...&
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nginx/1.4.1毛细管电泳法检测基因突变及其在胃癌早期诊断中的应用研究--《兰州大学》2012年硕士论文
毛细管电泳法检测基因突变及其在胃癌早期诊断中的应用研究
【摘要】：肿瘤通常是指机体在各种致癌因素作用下,由于某些特定染色体上的DNA损伤引起体细胞发生突变而导致其克隆性异常增生形成的新生物。胃癌在我国作为消化道高发的恶性肿瘤之一,其发病率和病死率居各种恶性肿瘤前列。然而传统的胃癌诊断方法无法打破早期诊断的瓶颈-预警,往往错过了最佳治疗时间,降低了术后生存率。近年来,伴随着分子遗传学和分子生物学的不断发展以及基因工程技术的不断进步,胃癌的基因研究也取得了较大的进展。
本文第一章阐述了引发胃癌的各种因素,以及与胃癌发生相关的基因；另外对目前基因突变检测技术及影响毛细管电泳(CE)分离的各种因素及参数进行了总结。本研究采用CE结合单链构象多态性分析(SSCP)及限制性片段长度多态性分析(RFLP)方法首先通过检测胃癌组织样本中胃癌相关基因突变,筛选出高突变频率基因。然后选取具有易于获取且携带大量遗传信息的胃癌患者外周静脉血液作为检测对象,通过检测高突变频率基因的基因突变实现胃癌早期预测诊断,辅助胃癌临床早期诊断及指导临床分子药物治疗。
第二章以传统的PCR技术扩增胃癌患者癌变及正常组织样品中原癌基因C-myc和抑癌基因APC、p16目的基因片段,扩增样品分别采用CE-SSCP、 CE-RFLP、聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)-SSCP、直接测序分析检测上述基因突变,并将检测结果进行简单比较,筛选出高突变频率基因。结合前期实验数据,统计结果显示,总突变率由高到低依次为：p53(33.3%)APC(30.0%)C-myc (20.0%)k-ras (13.3%)p16(5.0%)。CE-SSCP检测方法可作为大规模临床样品中基因突变的检测方法。P53基因与APC基因突变与胃癌的发生发展密切相关。
第三章,第四章通过优化毛细管电泳参数建立血液中快速检测肿瘤基因突变的方法,以此方法为基础检测胃癌患者外周静脉血液样品中基因突变,并以健康受试者外周静脉血液作为对照。首先,以血液中提取的基因组DNA为模板,PCR扩增经胃癌组织部分实验筛选出的四种高突变频率基因。然后,扩增样品、变性样品和酶切样品分别经直接测序分析、CE-SSCP和CE-RFLP检测基因突变,统计总突变率。检测结果显示总突变率为p53(30.1%)APC (24.6%)C-myc(19.2%)k-ras(11.0%),四种基因同时检测累积检出率可达84.9%。同时联合检测这四种基因,可提高检出率。结合临床病历资料分析基因突变与病例特性之间的关系。统计结果显示,p53和APC基因突变与胃癌分化程度相关,C-myc和K-ras基因在有淋巴结转移组基因突变率高于无淋巴结转移组。四种基因参与胃癌的发生、发展全过程,可作为胃癌早期预测诊断的检测指标。
CE在DNA分离分析应用方面具有高效、高灵敏度、快速、准确等优点。胃癌的发生发展与基因突变密切相关,通过毛细管电泳法检测基因突变,建立胃癌临床早期预测诊断的方法有据可依。本研究最终结果显示通过检测胃癌患者外周静脉血液样品中四种基因的基因突变可以对早期胃癌的发生进行预测。
【关键词】：
【学位授予单位】：兰州大学【学位级别】：硕士【学位授予年份】：2012【分类号】：R735.2【目录】：
英文縮略词表3-5中文摘要5-7Abstract7-14第一章 前言14-24 1 胃癌及胃癌发生相关基因突变分析方法概述14-19
1.1 胃癌概述14-15
1.2 胃癌发生相关突变基因介绍15-17
1.2.1 ras基因15
1.2.2 C-myc基因15-16
1.2.3 p53基因16
1.2.4 APC基因16
1.2.5 p16基因16-17
1.3 基因突变分析方法17-18
1.4 毛细管电泳技术在基因突变检测中的应用18-19 2 论文立题依据和技术路线19-20
2.1 立题依据19
2.2 技术路线19-20 3 研究内容20-22
3.1 胃癌组织中基因突变检测及高突变频率基因筛选研究20
3.2 胃癌患者外周静脉血液样品中基因突变检测方法建立及样品分析20-21
3.3 临床胃癌早期预测诊断方法建立及应用21-22 参考文献22-24第二章 胃癌组织中胃癌相关特异性基因突变检测及高突变频率基因筛选研究24-47 第一节 胃癌组织中抑癌基因APC和p16基因突变检测26-37
2 实验部分26-29
2.1 仪器与试剂26-27
2.2 实验材料27
2.3 实验方法27-29
2.3.1 组织DNA提取,引物设计及PCR扩增27
2.3.2 PCR产物纯化及电泳检测27-28
2.3.3 PAGE-SSCP检测28
2.3.4 CE-SSCP检测28
2.3.5 CE-RFLP检测28
2.3.6 DNA测序分析28-29
3 实验结果29-35
3.1 pUC19 DNA/Msp Ⅰ(HpaⅡ)DNA Marker最佳分离条件29
3.2 PCR纯化产物电泳检测结果29-30
3.3 PAGE-SSCP检测组织样品结果30-31
3.4 CE-SSCP检测组织样品结果31-33
3.5 CE-RFLP检测组织样品结果33-34
3.6 DNA序列分析结果34-35
4 讨论35-37 第二节 毛细管电泳检测胃癌组织中原癌基因C-myc基因突变37-45
2 实验部分37-38
2.1 仪器与试剂37
2.2 实验材料37-38
2.3 实验方法38
2.3.1 组织DNA提取,引物设计及PCR扩增38
2.3.2 琼脂糖凝胶电泳检测PCR产物38
2.3.3 PAGE-SSCP检测38
2.3.4 DNA测序分析38
2.3.5 PCR产物酶切38
2.3.6 CE-SSCP和CE-RFLP检测38
3 实验结果38-44
3.1 琼脂糖凝胶电泳检测C-myc扩增产物39
3.2 PAGE-SSCP检测C-myc基因结果39-40
3.3 CE-SSCP检测C-myc基因结果40-41
3.4 DNA序列分析结果41-42
3.5 CE-RFLP检测C-myc基因结果42-43
3.6 C-myc基因突变与临床病例特性关系43-44
4 讨论44-45 参考文献45-47第三章 血液中肿瘤基因突变检测方法的建立及在p53和k-ras基因突变热点检测中的应用47-66 1 引言48 2 实验部分48-51
2.1 仪器与试剂48-49
2.2 实验材料49
2.3 实验方法49-51
2.3.1 血液DNA提取49-50
2.3.2 引物设计及PCR扩增50
2.3.3 毛细管电泳检测条件优化50
2.3.4 琼脂糖凝胶电泳检测PCR产物50-51
2.3.5 临床样品检测前处理51
2.3.6 CE-SSCP和CE-RFLP检测51 3 实验结果51-62
3.1 DNA提取及含量测定结果51-52
3.2 琼脂糖凝胶电泳结果52
3.3 毛细管电泳检测条件优化结果52-58
3.3.1 毛细管电泳参数DNA Maker考察结果52-56
3.3.2 毛细管电泳检测临床样品参数考察结果56-58
3.4 CE-SSCP检测临床血液样品结果58-60
3.5 CE-RFLP检测临床血液样品结果60-62
3.6 p53基因及k-ras基因突变与临床病例特性关系62 4 讨论62-65 参考文献65-66第四章 毛细管电泳法结合基因测序研究胃癌血液中APC和C-myc基因突变与临床病例因素之间的关系66-77 1 引言67 2 实验部分67-68
2.1 仪器与试剂67
2.2 实验材料67
2.3 实验方法67-68
2.3.1 血液DNA提取68
2.3.2 PCR扩增APC及C-myc基因68
2.3.3 临床样品检测前处理68
2.3.4 CE-SSCP和CE-RFLP检测68
2.3.5 APC和C-myc基因扩增样品直接测序分析68 3 实验结果68-74
3.1 PCR扩增产物检测结果69
3.2 APC和C-myc基因CE-SSCP检测结果69
3.3 APC和C-myc基因CE-RFLP检测结果69-71
3.4 直接测序结果71-73
3.5 APC和C-myc基因突变与临床病例特性关系73-74 4 讨论74-76 参考文献76-77第五章 研究结论77-79 1 胃癌组织中相关基因突变检测及高突变频率基因筛选77 2 胃癌患者外周静脉血液样品中高突变频率基因检测及临床病例特性之间的关系77 3 胃癌早期诊断方法预建立77-79硕士期间发表的论文及参与的科研工作79-80致谢80
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