个人总结 DH5α感受态的制备和转化
(2)倒入,灭菌冰上预冷的50ml离心管中,盖严;
(3)冰浴20-30分钟,使菌液冷却到0℃(要是有事,此步可暂停,冰浴久一点);
(10)分装(EP在预冷前先做好标记)100 μL或者200μL一管可以-70℃保存备用,也可以放置于冰上后在冰箱4℃保存一两天再用,转化效果不会有大的影响。
注意:加入CaCl2后细胞比较脆弱,操作一定要轻柔,不能弹不能摔整个操作都要在冰上,手不要直接接触管底。
可用新做的感受态进行转化,也可用-70℃保存的进行转化
(6)37℃倒置培养过夜,第二天查看板上菌落苼长情况
注意:要是转化质粒,转0.5μL或者1μL就行了,质粒的转化效率很高。涂板的时候不用离心,直接吸取50μL涂板转化连接产物的时候由于连接效率不一定高,所以要离心之后弃上清剩余100μL再悬浮后全部涂板。
3.阳性克隆的快速鉴定
(1)用灭菌的牙签挑取单克隆到有1ml的培养基(含有相对应忼生素)的2ml灭菌EP管中
个人总结 DH5α感受态的制备和转化
(2)倒入,灭菌冰上预冷的50ml离心管中,盖严;
(3)冰浴20-30分钟,使菌液冷却到0℃(要是有事,此步可暂停,冰浴久一点);
(10)分装(EP在预冷前先做好标记)100 μL或者200μL一管可以-70℃保存备用,也可以放置于冰上后在冰箱4℃保存一两天再用,转化效果不会有大的影响。
注意:加入CaCl2后细胞比较脆弱,操作一定要轻柔,不能弹不能摔整个操作都要在冰上,手不要直接接触管底。
可用新做的感受态进行转化,也可用-70℃保存的进行转化
(6)37℃倒置培养过夜,第二天查看板上菌落苼长情况
注意:要是转化质粒,转0.5μL或者1μL就行了,质粒的转化效率很高。涂板的时候不用离心,直接吸取50μL涂板转化连接产物的时候由于连接效率不一定高,所以要离心之后弃上清剩余100μL再悬浮后全部涂板。
3.阳性克隆的快速鉴定
(1)用灭菌的牙签挑取单克隆到有1ml的培养基(含有相对应忼生素)的2ml灭菌EP管中
版权声明:文章内容来源于网络,版权归原作者所有,如有侵权请点击这里与我们联系,我们将及时删除。