水痘—带状疱疹病毒临床分离株基因型别分析与流行病学调查--《安徽医科大学》2009年硕士论文
水痘—带状疱疹病毒临床分离株基因型别分析与流行病学调查
【摘要】：
目的:首先,利用限制性片段长度多态性分析(RFLP)、聚合酶链反应(PCR)和DNA测序方法,对从水痘或带状疱疹病人皮肤疱疹液中分离、鉴定后获得的水痘-带状疱疹病毒(VZV)临床分离株的基因型进行分析,研究该病毒的分子流行病学特征,明确合肥地区VZV临床分离株的主要基因型及其与国外各地区基因型的区别,并进一步分析感染是由疫苗株(v-Oka)还是野毒株引起的,同时了解可能的疫苗反应和疫苗株在水痘敏感人群的传播状况及病毒的进化状态。
其次,应用膜抗原荧光抗体试验(FAMA)对从临床收集的血清标本进行分析,研究VZV的血清流行病学特点,根据正常人群中VZV的流行现状,为水痘预防措施的制定提供依据。
方法:从临床采集水痘或带状疱疹患者皮肤水疱液共36份,将其接种至人胚胎成纤维细胞(HF),进行病毒分离;对分离得到的病毒株应用间接免疫荧光法鉴定后,扩增病毒并提取VZV临床分离株与v-Oka株的基因组DNA。经过PCR扩增VZV开放读码框(ORF)1、21、22、38、54、62和R5可变区的部分片段,通过RFLP对ORF38、54和62的PstI、BglI和SmaI酶切位点的突变情况进行分析,通过比较PCR产物长度分析R5可变区重复单位的拷贝数,同时对ORF1、21、22和54的PCR产物进行测序,分析其中一些特定SNP位点的突变情况,从而确定其基因型别。
从医院检验科保存的3557份体检者血清中随机抽取592份血清,采用以VZV感染细胞作为抗原、异硫氰酸荧光素(FITC)标记的羊抗人IgG作为二抗的FAMA试验检测血清中特异性VZV抗体,进行VZV的流行病学调查。
结果:从临床采集的36份标本中分离鉴定后得到19例VZV临床分离株,病毒分离阳性率为52.8%。RFLP分析结果显示,19例临床分离株的酶切位点特征均为PstI+ BglI+ SmaI-,而v-Oka株为PstI- BglI+ SmaI+;R5可变区PCR结果出现359bp(R5A)和471bp(R5B)两种结果, R5A有9例(47.4%),R5B有10例(52.6%);对ORF1, 21, 22, 54的PCR产物进行测序分析发现19例临床分离株均归属为基因型J1,不同于v-Oka株所归属的基因型J2,进一步分析还发现19例临床分离株中有4例(21%)在ORF1中核苷酸780～781位点之间插入了3个核苷酸CGG,它们编码一个脯氨酸;另外,在其中的2株临床分离株中还发现了3个不同的突变位点分别为ORF21 (SNP 33608) CT、ORF54 (SNP 95150) TG、ORF22 (SNP 38055) CA。
血清学实验表明用FAMA试验检测VZV抗体,与其他的疱疹类病毒的相应抗体不产生交叉反应,具有高度特异性。应用此法检测592份血清标本中,VZV抗体总体阳性率为76.52%;1~3岁、4~6岁、7~13岁、14~19岁、20~29岁、30~39岁、40~49岁及50岁各年龄组的血清抗体阳性率分别是14.67%,51.56%,73.91%,91.26%,92.78%,95.65%,98.11%和100%。1~3岁年龄组血清抗体阳性率最低,血清抗体阳性率随年龄的增大而升高。不同性别间阳性率差异无统计学意义(P0.005),不同年龄组间阳性率差异有统计学意义(P0.001)。
结论:水痘或带状疱疹患者皮肤水疱液中VZV病毒颗粒含量较多,标本接种在人胚成纤维细胞上3~7d可产生明显的细胞病变效应(CPE),病毒分离阳性率为52.8%。RFLP分析结果显示19例临床分离株均为PstI+ BglI+ SmaI-,国外已有研究表明具有这种酶切特征的毒株多出现在欧洲和北美,亚洲较为少见,该酶切特征与v-Oka株的酶切特征PstI- BglI+SmaI+不同,说明本实验中所分离到的VZV临床分离株并不是v-Oka株。DNA测序分析结果显示所有19例毒株均属于J1型,与欧洲、美国、日本的VZV毒株基因型不相同,与v-Oka株的基因型(J2型)也不同,说明本实验中获得的VZV临床分离株并不是v-Oka株,疾病不是由v-Oka株引起的。
血清学研究表明,FAMA法检测人群中VZV抗体与其他的疱疹类病毒的相应抗体不产生交叉反应,是VZV抗体检测的可靠方法。VZV感染主要发生在儿童时期,因此预防水痘感染和流行,应以1～3岁儿童为VZV疫苗免疫的首选对象,3岁以上者宜选择没有水痘史的儿童作为免疫对象。
【学位授予单位】：安徽医科大学【学位级别】：硕士【学位授予年份】：2009【分类号】：R752.12;R181.3
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得宝松局部封闭治疗带状疱疹疗效观察
作者：孔宇虹，张丰川
【关键词】& 得宝松
　　 得宝松（通用名：复方倍他米松注射液，上海先灵葆雅有限公司）是一种可溶性倍他米松酯与难溶性倍他米松酯的复方制剂，可在治疗对皮质激素奏效的疾病中发挥强力的抗炎、抗风湿和抗过敏作用。临床上用于治疗荨麻疹、神经性皮炎、带状疱疹及斑秃等皮肤病，疗效好，不良反应少。本科于2004年1月～12月住院病人采用得宝松局部封闭方法治疗带状疱疹30例，取得较为满意的疗效，现报告如下。
　　1& 资料与方法
　　1.1& 一般资料&
　　入选标准：带状疱疹患者，年龄38～70岁，男女不限，皮疹出现1周内，疼痛较剧烈。排除标准：皮损合并细菌及真菌感染者；就诊前使用过糖皮质激素类药物者；有严重内脏疾患者；免疫功能低下者。共入选病人60例，其中治疗组30例，男10例，女20例，平均年龄67.12岁（41～70岁）；对照组30例，男17例，女13例，平均年龄66.86岁（38～68岁）。两组患者性别、年龄、初诊时发疹天数，侵犯部位和疼痛程度等方面差异无显著性，具有可比性。
　　1.2& 临床表现&
　　所有患者主诉均为单侧起皮疹，疼痛剧烈，部分病人有低热、恶心、全身不适。
　　1.3& 治疗方法
　　对照组予阿昔洛韦0.5g加入5%葡萄糖注射液中静脉点滴，每日1次，奥贝（双氯酚酸钠）100mg睡前口服，局部予炉甘石薄荷脑洗剂外用（水疱未破裂时），治疗至疼痛消失、皮疹完全结痂。治疗组在上述治疗基础上另予得宝松1ml（含二丙酸倍他米松按倍他米松计为5mg和倍他米松磷酸钠按倍他米松计为2mg）与2%利多卡因1ml充分混匀，选取病人皮损最严重、疼痛感最强烈的1～2处，在靠近皮损周围正常皮肤消毒后皮内注射，使皮肤明显膨隆呈苍白色，表面似核桃皮样外观，用药1次，记录止疱时间、疼痛减轻时间和止痛时间。如发疹后疼痛持续时间超过1个月，确定为遗留疱疹后神经痛（PHN）。
　　1.4& 观察指标及疗效判定标准［１］&
　　观察项目包括疼痛减轻、消失时间，止疱时间，遗留疱疹后神经痛例数。疗效观察指标：(1)止疱：以无新起水疱为准；(2)止痛：以疼痛缓解或较前明显减轻为准；(3)临床治愈：以止疱、疼痛消失或显著减轻为准；(4)后遗神经痛：以水疱消失后1个月仍有疼痛为准。
　　1.5& 统计学方法&
　　病情评分资料采用χ2检验，P＜0.05为差异有显著性。
　　2& 结果
　　治疗组和对照组的疗效比较见表1。治疗组30例病人的止痛时间、疼痛减轻时间、疼痛消失时间均比对照组短，尤其是PHN的发生率大大地低于对照组，在统计学上差异均有显著性。表1& 治疗组和对照组的疗效比较& （略）
　　3& 讨论
　　带状疱疹多发生于春秋季，本病因由水痘-带状疱疹病毒（HZV）引起，该病毒持久地潜伏于脊髓后根神经节的神经元内，当机体免疫功能低下时或在各种诱发刺激的作用下，可使之再活动并生长繁殖，使受侵犯的神经节发炎及坏死，产生神经痛。同时，再活动的病毒可沿着周围神经纤维而移动到皮肤发生疱疹［１］。
　　疼痛及PHN的发生与脊髓后根神经纤维受损有关，与患者血中的抗HZV抗体有密切关系，皮质类固醇能减少或避免PHN的发生机制是它可抑制HZV抗体的产生，减轻神经组织的炎症损伤， PHN持续时间可达数月，甚至20年之久，常常给病人带来很大的痛苦，而系统用皮质类固醇可减少发疹后 6～12周的PHN发生率。皮质类固醇有较强的抗炎、抗过敏作用，早期使用可以减轻炎症，阻止对神经节和神经纤维的毒性和破坏作用，减少带状疱疹后遗的神经痛［２］。
　　笔者用小剂量短疗程激素在带状疱疹早期局封，直接作用于受损的神经，使神经的炎症和水肿很快减轻与消退，对于急性期皮疹的控制、疼痛的减轻，以及预防PHN的发生均具有很好的效果，两组差异有显著性，且不良反应少而轻，说明带状疱疹除用抗病毒药和止痛剂治疗外，若无禁忌证时，应在疾病的早期给予小剂量的激素局部封闭，可控制皮疹、减轻疼痛、减少或避免PHN的发生。得宝松维持疗效时间长，注射1次效用可达3～4周，只要严格掌握用药剂量、方法等，副作用可被控制在最低限度。得宝松不失为一种疗效高，作用持久，副作用少，使用方便的强效激素制剂，有较高的临床应用价值［３］。
　　【参考文献】
　　1& 赵辨. 临床皮肤病学. 南京：江苏科学技术出版社，2001，4.
　　2& 林子刚，孙乐栋，凌伟军.鱼腥草减轻老年人带状疱疹后遗神经痛的疗效初探.临床皮肤科杂志，）：707.
　　3& 姚红娜，黄丽妹，蒙秉新. 皮损内注射得宝松治疗瘢痕疙瘩120例疗效观察.中国热带医学，）：486-487.
　　作者单位：100036 北京，北京中医药大学东方医院皮肤科
　　(编辑：若& 木)
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治疗生殖器疱疹最好的医院讲述治疗生殖器疱疹的常见方法：
一、手术疗法：对于单发、面积小的湿疣，在正规医院可手术切除;对巨大生殖器疱疹，可用Mohs氏手术切除，手术时用冷冻切片检查损害是否切除干净，单一手术复发几率很高。
二、激光治疗：医院通常用CO2激光，采用烧灼法治疗生殖器疱疹，医院的本疗法最适用女阴、阴茎或肛周的湿疣。对单发或少量多发湿疣可行一次性治疗，对多发或面积大的湿疣可2-3次治疗，一般在复发周期20天-3个月。
三、电灼治疗：采用高频电针或电刀切除湿疣。医疗方法：局部麻醉，然后电灼，本疗法适应数量少，面积小的湿疣，这种方法只是清除疣体。
四、微波治疗：采用微波手术治疗机，利多卡因局麻，将杆状辐射探头尖端插入尖锐湿直达疣体基底，当看到疣体变小、颜色变暗、由软变硬时，则热辐射凝固完成，即可抽出探头。凝固的病灶可以用镊子挟除。
五、冷冻疗法：利用-196℃低温的液体氮，采用压冻法治疗生殖器疱疹，促进疣组织坏死脱落，本法适用于数量少，面积小的湿疣，可行1-2次治疗，间隔时间为一周，这种方法一般可以清除疣体，容易复发。
通过治疗生殖器疱疹最好的医院在上文中为大家的详细介绍，大家应该了解很多了，所以患上生殖器疱疹不要害怕，一定要找正规的医疗结构检查，然后一定最适合自己的治疗方案。
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