如何找一个基因的小干扰rna转染序列

培养环境下的哺乳动物细胞中,经由siRNA传达的RNA干扰机制。
小干扰(Small interfering RNA;siRNA)有时称为短干扰RNA(short interfering RNA)或沉默RNA(silencing RNA),是长度20到25个的,在上有许多不同的用途。目前已知siRNA主要参与RNA干扰(RNAi)现象,以带有的方式的。此外,也参与一些与RNAi相关的反应途径,例如抗病毒机制或是结构的改变。不过这些复杂机制的反应途径目前尚未明了。
siRNA最早是由英国的大卫·包孔博(David Baulcombe)团队发现,是植物中的后沉默(post-transcriptional gene silencing;PTGS)现象的一部分,其研究结果发表于《》。2001年,汤玛士·涂许尔(Thomas Tuschl)团队发现合成的siRNA,可诱导哺乳动物体内的RNAi作用,结果发表于《》。这项发现引发了利用可控制的RNAi,来进行研究与药物开发的方法。
siRNA通常是一段长21个核苷酸的双股RNA(dsRNA),其两股分别在RNA的两端超出另一端2个核苷酸,图示如下:
每一股各有一个5'末端与一个3'羟基末端。此结构经dicer作用而得,dicer这种酶将较长的双股RNA或(small hairpin RNA)切成siRNA。此外,siRNA也可经由多种不同(transfection)技术导入内,并对特定产生具专一性的(knockdown)效果。本质上,任何已知序列的基因都可以、也因此是经过适当剪裁而具有序列互补性的siRNA的作用对象。这使siRNA成为研究基因功能与药物目标的一项重要工具。
Hamilton A, Baulcombe D. A species of small antisense RNA in posttranscriptional gene silencing in plants. Science. 1999, 286 (5441): 950-2.  .
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Elbashir S, Harborth J, Lendeckel W, Yalcin A, Weber K, Tuschl T. Duplexes of 21-nucleotide RNAs mediate RNA interference in cultured mammalian cells. Nature. 2001, 411 (6836): 494-8.  .
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Bernstein E, Caudy A, Hammond S, Hannon G. Role for a bidentate ribonuclease in the initiation step of RNA interference. Nature. 2001, 409 (6818): 363-6.  .
Hannon G, Rossi J. . Nature. 2004, 431 (7006): 371-8.  .
Fire A, Xu S, Montgomery M, Kostas S, Driver S, Mello C. Potent and specific genetic interference by double-stranded RNA in Caenorhabditis elegans. Nature. 1998, 391 (6669): 806-11.  . The original paper by Fire et al. describing RNAi
Elbashir S, Lendeckel W, Tuschl T. . Genes Dev. 2001, 15 (2): 188-200.  .
Zamore P, Tuschl T, Sharp P, Bartel D. . Cell. 2000, 101 (1): 25-33.  .
Hamilton A, Baulcombe D. A species of small antisense RNA in posttranscriptional gene silencing in plants. Science. 1999, 286 (5441): 950-2.  . First description of siRNAs.
非专一性效用:
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Kim D, Behlke M, Rose S, Chang M, Choi S, Rossi J. . Nat Biotechnol. 2005, 23 (2): 222-6.  .
Sledz C, Williams B. . Biochem Soc Trans. 2004, 32 (Pt 6): 952-6.  .
Pebernard S, Iggo R. . Differentiation. 2004, 72 (2-3): 103-11.  .
Sledz C, Holko M, de Veer M, Silverman R, Williams B. . Nat Cell Biol. 2003, 5 (9): 834-9.  .
设计与定性工具:
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出自A+医学百科 “小干扰RNA”条目
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小干扰RNA的设计及原理
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靶向survivin基因小干扰RNA设计及鉴定
优质期刊推荐关于小干扰RNA片段化学合成的问题(化学合成,转染,退火,双链) - DNA技术 - 生物秀
标题: 关于小干扰RNA片段化学合成的问题(化学合成,转染,退火,双链)
摘要: [关于小干扰RNA片段化学合成的问题(化学合成,转染,退火,双链)] 各位专家:大家好,我是新手上路, 老板让我设计几对小干扰RNA片段,设计思路如下,望大家多提意见1:根据ambion网站筛选几对小干扰RNA双链片段2, 找公司合成,3,直接和脂质体连接转染到哺乳动物(mammalian)细胞中问题如下:1,我合成的小干扰RNA双链片段会采用TT末端, 还用别的处理方式吗?比如磷酸化???2, 我的担心是,如果和脂质体连接转染, 会不会到体内小干扰R 关键词:[化学合成 退火 双链 转染 脂质体 哺乳动物 降解]……
各位专家:大家好,我是新手上路, 老板让我设计几对小干扰RNA片段,设计思路如下,望大家多提意见1:根据ambion网站筛选几对小干扰RNA双链片段2, 找公司合成,3,直接和脂质体连接转染到哺乳动物(mammalian)细胞中问题如下:1,我合成的小干扰RNA双链片段会采用TT末端, 还用别的处理方式吗?比如磷酸化???2, 我的担心是,如果和脂质体连接转染, 会不会到体内小干扰RNA降解??? 毕竟我的培养基,不是RNase-free的, 还有细胞中也应该会有RNase.3, ambion 公司合成的RNAi片段,是单链,提供退火液. 那我如果让他们直接退火呢?? 担心自己操作不当.问题比较多, 希望大家多帮帮我这个菜鸟啊 .哎,最近真的很郁闷.
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