细菌的革兰氏染色和特殊形态观察 - 细菌 - 实验频道 - 生物在线
& 细菌的革兰氏染色和特殊形态观察
细菌的革兰氏染色和特殊形态观察
染色方法：革兰染色法是细菌学中最广泛使用的一种鉴别染色法。1884 年 由丹麦医师 Gram 创立。方法是先将细菌用结晶紫染色，加媒染剂（增加染料和 细胞的亲和力）后，用脱色剂（酒精或丙酮）脱色，再用复染剂染色。如果细菌 不被脱色而保存原染液颜色者为革兰阳性菌(G＋)；如被脱色，而染上复染液的颜 色者为革兰阴性菌(G-)。此染色法可将所有具有细胞壁的细菌分为两大类：革兰 阳性菌和革兰阴性菌。单染色法：只能观察微生物的大小、形状、和细胞排列状况，但不能鉴别微生物以及它的特殊构造等。
复染色法：用两种或两种以上染色液进行染色，有协助鉴别微生物的作用，故也称鉴别染色法。常用的有：革兰氏染色法、抗酸染色法、芽孢染色法、鞭毛染色法等。染色原理： 现在认为细菌对革兰染色的不同反应主要是革兰阳性菌和阴性菌 的细胞壁结构与化学组成不同。革兰阳性菌的细胞壁较厚，肽聚糖含量多，且交 联度大，脂类含量少，经 95％乙醇脱色时，肽聚糖层的孔径变小，通透性降低， 与细胞结合的结晶紫与碘的复合物不易被脱掉，因此细胞仍保留初染时的颜色。 而革兰阴性菌的细胞壁较薄，含有较多的类脂质，而肽聚糖的含量较少，乙醇脱 色时溶解外层类脂质，增加了细胞壁的通透性，使初染的结晶紫和碘的复合物易 于渗出，结果细胞被脱色，经复染后，又染上复染的颜色。
革兰氏染色液一套
结晶紫 碘液 95%乙醇 番红花红 孔雀绿
显微镜 盖玻片 载玻片
菌种：大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌
1. 革兰氏染色&&&（1）涂片
& （2）初染：在做好的涂面上滴加草酸铵结晶紫染液，染1分钟，倾去染液，流水冲洗至无紫色。
& （3）媒染：先用新配的路哥氏碘液冲去残水，而后用其覆盖涂面1分钟，后水洗。
& （4）脱色：除去残水后，滴加95%酒精进行脱色约15－20秒，后立即用流水冲洗。
& （5）复染：滴加番红染色液，染3－5分钟，水洗后用吸水纸吸干。&
& （6）镜检：观察染色结果并绘图。2. 染色过程：涂片（大肠杆菌和金黄色葡萄球菌）&干燥&固定&初染（结晶 染色过程： 紫染色 1min）&媒染（碘 1min）&水洗&95%乙醇脱色（1min）&复染（番红花 红染色 1min）&干燥&镜检（油镜）3. 油镜的使用与保养& （1）在需观察部位的玻片上滴加一滴香柏油，然后慢慢转动油镜，在转 换油镜时，从侧面水平注视镜头与玻片的距离，使镜头浸入油中而 又不以压破载玻片为宜。 & （2）用双眼观察目镜，并慢慢转动粗调节器至出现模糊物象，然后用细 调节器至物象清晰为止。 & （3）如果不出现物象或者目标不理想要重找。 & （4）油镜使用完毕，先用擦镜纸沾少许乙醇将镜头上和标本上的香柏油 擦去，然后再用干擦镜纸擦干净。
1. 菌种应选用对数期的菌种； 2. 涂片不易过厚，涂片薄而均匀为好； 3. 脱色不足或脱色过度均会造成革兰染色的假阳性或假阴性，脱色时间 取决于涂片厚度、室温等；4. 实验结束请确保油镜头擦拭干净。
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