对角线电泳的原理和过程到底是怎样的？ - 知乎2被浏览1404分享邀请回答21 条评论分享收藏感谢收起关注今日：75 | 主题：400048
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【求助】BSA进行电泳的奇怪现象，大家帮忙分析下
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这个帖子发布于8年零159天前，其中的信息可能已发生改变或有所发展。
请教一下大家：实验目的：是想看看1ul的2%蛋白酶K可以消化多少BSA。实验设计：取不同浓度的BSA（第五组分），加1ul 2%的蛋白酶K37度孵育4小时，进行SDS-PAGE电泳，用没有进行消化的相同浓度的BSA进行对照。下边是电泳的图片：从左往右依次是没有加蛋白酶K进行孵育的BSA（第五组分），然后是加了蛋白酶K孵育的，浓度是从小到大。就是一个泳道是没加的，一个是加的，依次下去。相同浓度的两个泳道的上样量是一样的。从图上看，各浓度的BSA都已消化完全了，但是问题是：为什么没加蛋白酶K消化的BSA跑的都呈多条带状呢，是本身不纯吗？还是加了还原型样品处理液造成的，但是为什么最左边的那个没有这样呢？这个实验做了两次，两次的图全都是这样的，请大家帮我分析下原因吧！多谢了#1、3、5、7、9、11分别为加了蛋白酶K进行消化的BSA，酶切体系中的BSA浓度由大到小。#2、4、6、8、10、12为没加蛋白酶K的BSA，是做为酶切的#1、3、5、7、9、11的对照。
不知道邀请谁？试试他们
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xiaoyezizi 编辑于
不好意思，你的图片我连加样孔都看不清楚，最好是在图片上注明一下，根本就不知道每个泳道代表的是什么，无法分析。但是如果是国产的BSA，一般是不纯的，用SDS-PAGE一般会出现相近的多个条带，如果条带分子量相差太大的话，我建议你检查一下实验过程，确保药品是否被污染或经其他处理。
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图片上下正确 有溴酚蓝 无浓缩胶部分 蛋白降解
又不是人白
不用走那么多质量标准 为我们的试剂供应犯愁
还是白蛋白啊
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不好意思，开始描述的不太清楚，我又编辑了一下，烦请各位大侠帮帮忙！我查了一下，BSA含有17组二硫键，我用的是还原型样品处理液，里边含有巯基乙醇，是不是二硫键打开的原因啊，但是为什么12泳道没有呈多条带呢？
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没有阴性对照蛋白酶K的泳道 不知道它的杂蛋白情况你确定12泳道加DTT了吗
还是电泳前补的
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ststony 没有阴性对照蛋白酶K的泳道 不知道它的杂蛋白情况你确定12泳道加DTT了吗
还是电泳前补的确定加了，12泳道和其他的泳道都是加的同一种样品处理液。还有请教ststony：你说的阴性对照是不是指只加缓冲液？你是不是怀疑加了蛋白酶K的泳道里可能是杂蛋白？
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正是我的实验习惯是
把所有涉及到的可能干扰情况全部考虑到我不太相信各厂家的质量控制
除了测序级的酶
其他都是主要考虑活性吧
杂质都是有的
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今天才醒悟过来
你的阴性对照应该都放在37度一起水浴的啊 以前做过一次酶切对照实验
当时认为是蛋白降解
蛋白酶K 缓冲液 50mM Tris-HCl (pH7.5),10mM CaCl2 没有酸碱水解
以及中性环境弱水解如果是水解 应该为弥散带 可是各条带明显位置有序 可以排除水解的主要因素DTT打破二硫键交联 如果是按蛋白量加入对应比例的DTT 条带位置应该一致 只是根据蛋白量的不同 造成条带的深浅差异 但是电泳图明显不是这样的 只有考虑在37度蛋白酶的消化
阴性对照中加蛋白酶抑制剂
是实验设计需要考虑的因素 但是不清楚 外源的是何种蛋白酶的起作用最后一个泳道没有降解 是没有一起水浴
直接加buffer 水煮上样 不知道你的实验是否这样操作的
这个不是真正的阴性对照 应该是参照物质 外标真想重复一下你的实验
可以现在没有实验室条件 每天都是办公事务 想当然会害死人啊
又犯错误了
酶连条带都看不到
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ststony 编辑于
多谢ststony，非常感动您一直把这个当回事，仔细的进行考虑。。我的阴性对照（即各浓度的没加蛋白酶K）没有进行水浴，是放在4度冰箱里的，也就是说在进行电泳前，它在4度冰箱里待了4个小时。文献中说“BSA是小分子蛋白具有17组二硫键，但是是BSA中的二硫键可能不易接近DTT。”所以我对造成这种现象的理解是：是DTT将二硫键打开了，所以才导致出现多条带。但是DTT对BSA的作用是与BSA的浓度有关的。浓度小的（#12）BSA与DTT进行反应的几率小，所以没有降解。而随着浓度的增大，BSA与DTT反应的几率越大，所以条带会逐渐增多，但是浓度较小的（像#10，#8）条带出现的要少些，而能够出现的条带位置都是一样的。不过我对其中的一组（#5 #6）又进行了一次重复，结果#6条带又正常了，不是形成这样的多条带的情况了，我同时又做了一个加非还原型处理液的，条带和#6是相同的，这又一定程度上否定了我上边的推论。。烦请ststony百忙之中再帮我分析下！多谢啦
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这样做下去没有任何意义
如果测酶活的话
不如选择一种简单一点的 没有这么多亚基的蛋白做为底物
我们的目的是什么
还有很多的问题要解决
很多的事情要求 不好意思
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关于丁香园电泳 三亿文库
一、SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳 (SDS-PAGE) 基本原理 SDS是阴离子表面活性剂，与蛋白质结合形成SDS-蛋白复合物，蛋白质分子即带大量的负电荷，并远远超过原来所带的电荷，使天然蛋白质分子之间的电荷差别降低，甚至可以忽略 同时蛋白质在SDS作用下结构变得松散，形状趋向一致
因此，排除了蛋白质的电荷和结构差异，SDS-蛋白质复合物在电泳时的泳动差异就由蛋白质的分子量所决定。 在强还原剂（如巯基乙醇）存在下，可以打开蛋白质分子内或肽链之间的二硫键，这样分离出的谱带即为蛋白质亚基 SDS-PAGE主要用途：分离蛋白质；蛋白亚基分子质量的测定 操作过程 凝胶的制备：用0.1% SDS-0.1mol/L磷酸钠缓冲液配置 样品制备：样品溶于1% SDS- 0.1%巯基乙醇-0.01mol/L磷酸钠缓冲液 电泳条件：电极液（0.1% SDS-0.1mol/L磷酸钠缓冲液，pH7.2） 固定与染色：考马斯亮蓝 二、尿素-聚丙烯酰胺凝胶电泳
用于DNA探针和酶解核酸产物的分离，核酸序列分析等。 三、SDS-尿素-聚丙烯酰胺凝胶电泳
鉴定分子量10kDa的多肽 第五节 聚丙烯酰胺凝胶等电聚焦 等电聚焦（IEF）是上世纪60年代中期问世的一种利用有pH梯度的介质分离等电点不同的蛋白质的电泳技术。由于其分辨率可达0.01pH单位，因此特别适合于分离分子量相近而等电点不同的蛋白质组分。
IEF-PAGE 利用各种蛋白质pI不同，以聚丙烯酰胺凝胶为电泳支持物，并在其中加入两性电解质载体，两性电解质载体在电场作用下，按各自pI形成从阳极到阴极逐渐增加的连续pH梯度。 蛋白质是两性电解质，其pI有差异，电泳时分别聚焦于支持物上pH等于各自pI的区域。 IEF-PAGE基本原理 （一）pH梯度的形成（二）电聚焦分离蛋白质 （一）pH梯度的形成 将pK和pI各自相异又相近的两性电解质溶液倾入电泳支持物中，电泳开始前两性电解质的混合物pH为一均值，即各段介质中的pH相等，用pH0表示。 电泳开始后，混合物中pH最低的分子，带负电荷最多，pI1为其等电点，向正极移动速度最快，当移动到正极附近的酸液界面时，pH突然下降，甚至接近或稍低于pI1，这一分子不再向前移动而停留在此区域内。 pH稍高的第二种两性电解质，其等电点为pI2，也移向正极，由于pI2＞pI1，因此定位于第一种两性电解质之后。 这样，经过一定时间后，具有不同等电点的两性电解质按各自的等电点依次排列，形成了从正极到负极递增的连续pH梯度
（二）电聚焦分离蛋白质的过程 蛋白质分子具有两性解离及等电点的特征，在碱性区域蛋白质分子带负电荷向阳极移动，当移动至某一pH位点时失去电荷而停止移动，此处介质的pH恰好等于该蛋白质分子pI。 同理，位于酸性区域的蛋白质分子带正电荷向阴极移动，直到它们的等电点上聚焦为止，就不再泳动，而被浓缩成狭窄的区带。 载体两性电解质的理化性质 载体两性电解质（Ampholine)：多氨基多羧基脂肪族混合物。 理化性质：缓冲性能强；导电性能好；分子量较小；紫外吸收值低；一般不与样品起化学反应 载体两性电解质的pH范围与用量选择 pH范围选择：测定未知样品的等电点时，一般先采用pH3-10的两性电解质摸索，初步测出等电点后，改用包括样品pI值的窄pH范围的两性电解质。 用量选择：两性电解质通常为1-2%。 测定蛋白质等电点的操作 1、配制凝胶 一般选用凝胶浓度T为5%-7.5%。在等电聚焦中，凝胶只是作为一种对抗对流的支持介质，因此，不考虑分子筛效应。 同时，加入一定pH范围的载体两性电解质，以便形成连续的pH梯度 2、加样
直接加在聚丙烯酰胺凝胶溶液中；
或者加在凝胶柱顶部。 3、聚焦
聚焦时电极缓冲液要根据两性电解质载体的pH范围而定
电压恒定在200V/6cm，聚焦6-8h。 4、固定与染色：氨基黑、考马斯亮蓝 5、样品pH的测定：洗涤→冰冻切片→测pH 6、蛋白质的洗脱、定量 7、pI的测定：固相pH梯度电聚焦法 双向电泳 1975年O′Farrall等人根据不同组份之间的等电点差异和分子量差异建立了IEF/SDS-PAGE双向电泳。其中IEF电泳（柱状）为第一向，SDS-PAGE为第二向（板状）。 IEF/ SDS-PAGE双向电泳对蛋白质的分离是极为精细的，因此特别适合于分离细菌或细胞中复杂的蛋白质组分。 双向电泳的重要性 原位细胞提取与样品处理→双向电泳→质谱的技术路线是典型的一条蛋白质组学研究的技术路线 双向电泳是研究蛋白质组学的关键技术，是深刻认识蛋白质结构与功能的重要工具。
第三节 琼脂糖凝胶电泳 通常情况下，核酸类物质的分离、鉴定采用琼脂糖凝胶电泳法； 若需要分辨率高的电泳，特别是只有几个bp的差别应该选择聚丙烯酰胺凝胶电泳； 用琼脂糖凝胶和聚丙烯酰胺凝胶电泳分离线性DNA时，迁移率与其分子量密切相关，与碱基组成无关。这也是采用凝胶电泳法测定核酸分子质量的依据所在。 DNA凝胶电泳：配制电泳缓冲液--制备琼脂糖凝胶--加样--电泳--染色--凝胶成像--分析结果 （一）适合的电泳缓冲液
常用的缓冲液有TAE和TBE，而TBE比TAE有着更好的缓冲能力。 电泳时使用新制的缓冲液可以明显提高电泳效果。注意电泳缓冲液多次使用后，离子强度降低，pH值上升，缓冲性能下降，可能使DNA电泳产生条带模糊和不规则的DNA带迁移的现象。
载样缓冲液的作用： ①增加样品密度，使其比重增加，以确保DNA均匀沉入加样孔内。 ②在电泳中形成肉眼可见的指示带，可预测核酸电泳的速度和位置。 ③使样品呈色，加样操作更方便。 （四）电泳的合适电压和温度
电泳时电压不应该超过20V/cm，电泳温度应该低于30℃，对于巨大的DNA电泳，温度应该低于15℃。 注意：如果电泳时电压和温度过高，可能导致出现条带模糊和不规则的DNA带迁移的现象。
（五）染色 常用的核酸染色剂是溴化乙啶(EB)，染色效果好，操作方便，但是稳定性差，具有毒性。 而其他系列例如SYBR Green，GelRed，虽然毒性小，但价格昂贵。
溴化乙锭( Ethidium bromide, EB)染色 EB嵌入DNA碱基对之间, 会被紫外光激发而放出约600nm的荧光. EB为致癌物，操作时务必戴上手套!!! SYBR-Green染色 SYBR-GreenⅠ：荧光染料特异性地掺入DNA双链后，发射荧光信号。 SYBR-GreenⅡ：广泛用于检测琼脂糖和聚丙烯酰胺凝胶中的RNA 或单链DNA。 （六）凝胶成像 1. 以紫外光做为光源. 2. 需使用红或黄色滤光片去除光源干扰. 3. 操作时须小心EB, 务必戴上手套.
毛细管电泳 概念：毛细管电泳技术是一类以毛细管为分离通道、以高压直流电场为驱动力，根据样品中各组分之间迁移速度和分配行为上的差异而实现分离的一类液相分离技术。 CE基本原理 分离依据：高电场强度作用下，毛细管(10~50μm)中的待测物质，可按其淌度的差异得到有效的分离。 淌度（电泳迁移率,
mobility） 带电离子在单位电场下的迁移速度 CE中电渗流的方向 电渗流的方向取决于毛细管内表面电荷的性质： νef 电泳速度
内表面带负电荷，溶液带正电荷，电渗流流向阴极； νeo 电渗速度
内表面带正电荷，溶液带负电荷，电渗流流向阳极； νap 组分的迁移速CE特点：自动化程度高，测试速度快；进样量少；应用范围广 度 应用： 分析核酸：DNA测序
检测蛋白质
分析糖类物质
药物分析 第七节 印记法（转移电泳） 概念
探针：将有识别能力的物质（如抗原、激素、核酸等）和酶/同位素/荧光物质结合成的复合物。 固相载体：用于吸附生物大分子物质的固体材料。硝酸纤维素膜（NC）、尼龙膜等。 封阻：用一种不与待测物反应的物质封闭固定基质上未吸附蛋白质的区域 印迹：把经凝胶电泳后的组分，通过吸附或电泳方法转移或者以直接点样方式吸附到固相载体上，此过程称电泳印迹。 放射自显影：将含放射性同位素的复合物置于X感光胶片上压片，当放射性同位素电离辐射时，胶片上会发生化学感光作用，随后经显影、定影后可呈现斑点或谱带。 典型的印迹实验步骤 1、凝胶电泳
SDS-PAGE、尿素-PAGE、IEF-PAGE 2、蛋白质/核酸在固相载体上固定化
3、封阻 4、用探针检出固定载体上感兴趣的蛋白/核酸 Western Blot ― 蛋白印迹 蛋白质样品的制备
聚丙烯酰胺凝胶电泳
蛋白质的转移
靶蛋白的免疫学检测 蛋白质样品的制备和分离 蛋白制备方法 直接裂解细胞：加样缓冲液；制备蛋白质提取液 蛋白分离：SDS-PAGE；尿素-PAGE；IEF-PAGE；2D-PAGE 转移法（1）：虹吸法
转移法（2）：电转移
转移法（3）：真空转移 靶蛋白的免疫学检测：封闭
靶蛋白与第一抗体反应
与第二抗体反应
显色 思考题 影响带点颗粒在电场中泳动速度的因子有哪些？ 为什么不连续系统或连续系统的聚丙烯酰胺凝胶电泳比琼脂糖电泳分辨率高？ 配15%聚丙烯酰胺凝胶溶液10ml，问需要丙烯酰胺和双丙烯酰胺各多少克？ 哪些因子影响聚丙烯酰胺凝胶的化学聚合速度？预电泳的目的是什么？预电泳时应注意哪些因素？
简述琼脂糖凝胶电泳、不连续聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）、电聚焦、 SDS-PAGE的一般原理及方法。 几种常见的蛋白电泳。 转移电泳有哪几类?各有何用途？ 名词 电泳 区带电泳 电渗 凝胶总浓度 交联度 分子筛效应 电聚焦电泳（IEF） 双向电泳
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还有问题，就是既然驱动力是负电荷，那为什么移动的距离白质分子电泳的迁移率主要取决于本身的分子量，而与蛋白和分子量有关，而不是和所带的电荷大小有关呢？还有为什质所带的电荷无关，在一定条件下，蛋白质的分子量的对数么蛋白质电泳时垂直的，DNA 电泳是水平的呢？ 与电泳迁移率间呈负相关。
DNA 电泳一般使用的都是琼脂糖凝胶电泳，电泳的驱动力靠加热会使蛋白质变性，肯定会改变复合物的性质，只要不是DNA 骨架本身的负电荷。 改变分子量/表观分子量，就不会影响结果。
蛋白质电泳（一般指SDS-PAGE ）一般使用的都是聚丙烯酰胺聚丙烯酰氨凝胶电泳
凝胶电泳，电泳的驱动力靠与蛋白质结合的SDS 上所携带的目录
负电荷。 简介
所以相同点就是样品都是带负电荷的，从负极向正极移动，作用
移动的距离都和样品的分子量有关。而且这两个电泳体系可补充信息
以互相交换使用。进行大分子蛋白质电泳时，可以考虑换用过程
琼脂糖凝胶，因为该体系孔径大。相反，如果需要精确到各常见问题及分析
位数碱基的DNA 电泳也可以使用聚丙烯酰胺凝胶系统，因为简介
使用该系统可以将相差一个碱基的两条DNA 链分开。
聚丙烯酰胺凝胶电泳
不同点首先是样品不同。这个就不用多说了。其次是结果的聚丙烯酰氨凝胶电泳
观察方法不同。DNA 电泳普遍使用EB 做染料，在紫外灯下观作用：用于分离蛋白质和寡糖核苷酸。
察；而蛋白电泳使用的考马斯亮蓝染色，还需要经过脱色步
作用原理 聚丙烯酰胺凝胶电泳是网状结构，具有分子筛骤，不过观察起来比较简单。还有就是胶体系的差别，DNA 效应。它有两种形式：（1）非变性聚丙烯酰胺凝胶，在电泳电泳通常是一胶跑到底，而蛋白质电泳则会有分离胶和浓缩的过程中，蛋白质能够保持完整状态，并依据蛋白质的分子胶之区别。 量大小、蛋白质的形状及其所附带的电荷量而逐渐呈梯度分先说这么多，有不明白的你再问好了～ 开。
回答补充：
而SDS-PAGE 仅根据蛋白质亚基分子量的不同就可以分电泳中样品移动的本质确实是样品所携带的电荷。但是，区开蛋白质。该技术最初由shapiro 于1967年建立，他们发现分这些条带直接可以用分子量而无需使用电荷数，是因为这在样品介质和丙烯酰胺凝胶中加入离子去污剂和强还原剂些样品的电荷/分子量比都是恒定的了。以DNA 分子为例，它后，蛋白质亚基的电泳迁移率主要取决于亚基分子量的大小在电泳中的移动是靠其骨架中磷酸所携带的负电荷来实现（可以忽略电荷因素）。
的，而这个磷酸分子又是每一个核苷酸中都有的，所以DNA 编辑本段
分子所携带的负电荷数是由其核苷酸总数决定的。而且，DNA 作用
分子中核苷酸的组成动辄成百上千，在如此大的分子量面前，
SDS 是阴离子去污剂，作为变性剂和助溶试剂，它能断讨论单个核苷酸之间分子量的差别就显得毫无意义。这样，裂分子内和分子间的氢键，使分子去折叠，破坏蛋白分子的DNA 分子中负电荷的量就可以用DNA 的分子量来代替，反过二、三级结构。而强还原剂如巯基乙醇，二硫苏糖醇能使绊来，DNA 的分子量也就可以用DNA 分子所携带的电荷来代替胱氨酸残基间的二硫键断裂。在样品和凝胶中加入还原剂和（一句话，DNA 分子的电荷/分子量比是恒定的）。 SDS 后，分子被解聚成多肽链，解聚后的氨基酸侧链和SDS 这在蛋白电泳中（特别是SDS-PAGE 中）是一样的。在SDS-PAGE 结合成蛋白- SDS胶束，所带的负电荷大大超过了蛋白原有中，SDS 将蛋白质变性成直线分子并紧密包裹于其上，使得的电荷量，这样就消除了不同分子间的电荷差异和结构差异。 其所携带的电荷与蛋白分子量成了一定的比例，剩下的就和
SDS-PAGE 一般采用的是不连续缓冲系统，于连续缓冲系核酸电泳一样了。 统相比，能够有较高的分辨率。
至于为什么核酸的横着跑，蛋白竖着跑，个人认为最大的问
浓缩胶的作用是有堆积作用，凝胶浓度较小，孔径较大，题是蛋白制胶的过程导致的。蛋白制胶由于使用了两种不同把较稀的样品加在浓缩胶上，经过大孔径凝胶的迁移作用而的凝胶系统，所以需要一个水平的分界面。这个分界面在配被浓缩至一个狭窄的区带。当样品液和浓缩胶选TRIS/HCL胶的过程中是依靠异丙醇在重力作用下的压力下形成的。所缓冲液，电极液选TRIS/甘氨酸。电泳开始后，HCL 解离成氯以，一并就竖着跑了～～
离子，甘氨酸解离出少量的甘氨酸根离子。蛋白质带负电荷，电泳加样为什么要煮沸？ 因此一起向正极移动，其中氯离子最快，甘氨酸根离子最慢，你是做什么电泳？用的什么东西？要达到什么目的？请把问蛋白居中。电泳开始时氯离子泳动率最大，超过蛋白，因此题说清楚 在后面形成低电导区，而电场强度与低电导区成反比，因而加热是SDS-PAGE 测量蛋白质复合物分子量的必须步骤。 产生较高的电场强度，使蛋白和甘氨酸根离子迅速移动，形通过加热，促进蛋白形成椭圆结构，椭圆的短轴一致，长轴成以稳定的界面，使蛋白聚集在移动界面附近，浓缩成一中依据蛋白的分子量而不同，在电泳中表现为不同的泳动速率，间层。
与蛋白标准对照，从而达到测定分子量的目的。
此鉴定方法中，蛋白质的迁移率主要取决于它的相对分蛋白质在聚丙烯酰胺凝胶中电泳时，它的迁移取决于它所带子质量，而与所带电荷和分子形状无关。
电荷以及分子大小和形状等因素。如果在聚丙烯酰胺系统中补充信息
加入阴离子去污剂十二烷基磺酸钠 (SDS),大多数蛋白质能
聚丙烯酰胺凝胶电泳简称为PAGE （Polyacrylamide gel 与SDS 按一定比例结合，即每克蛋白质结合1.4g 的SDS －复electrophoresis ）
合物都带上相同密度的负电荷，它的量大大超过了蛋白质分聚丙烯酰氨凝胶电泳
子原有的电荷量，因而消除了蛋白质原有的电荷差别，使蛋
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SDS-PAGE电泳常见问题_生物学_自然科学_专业资料。SDS-PAGE电泳常见问题 ...(SDS) :阳离子去污剂,作用有四:去蛋白质电荷、解 离蛋白质之间的氢键、取消...回答:多数情况是因为小分子在胶里的运动不 SDS-PAGE 电泳问题总结 (2012-04-...一般凝胶可在室温下保存 4 天,SDS 可水解聚丙烯酰胺。2、一般 常用的有氨基黑...SDS-PAGE电泳过程中常见问题以及解决方法_生物学_自然科学_专业资料。SDS-PAGE ...(SDS) :阳离子去污剂,作用有四:去蛋白质电荷、 解离蛋白质之间的氢键、取消...SDSSDS-PAGE 电泳小问答 电泳的基本原理? Q:SDS-PAGE 电泳的基本原理? SDS-...(SDS):阳离 子去污剂,作用有四:去蛋白质电荷、解离蛋白质之间的氢键、 子...SDS-PAGE电泳过程中常见问题以及解决方法_生物学_自然科学_专业资料。SDS-PAGE ...(SDS) :阳离子去污剂,作用有四:去蛋白质电荷、解离蛋白质之间的氢键、 取消...+++SDS-PAGE常见问题分析总结_化学_自然科学_专业资料。SDS-PAGE 常见问题 1....4. 提高 SDS-PAGE 电泳分辨率的途径? 聚丙烯酰胺的充分聚合, 可提高凝胶的...浓缩胶的作用是有堆积作用,凝胶浓度较小,孔径较大,把较稀的样品加在浓缩胶上...SDS-PAGE常识 6页 1下载券
SDS PAGE_电泳_常见问题 4页 1下载券
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SDS PAGE_电泳_常见问题 4页 1下载券王慧,张英起,颜真,碘乙酰胺在SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳中的应用
擅长领域&专家姓名
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&>&&>&内容
文献名称：碘乙酰胺在SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳中的应用
&&&&前言：将引入-样品处理,可以保证样品完全变性并保持状态。碘乙酰胺作为、封闭用于、蛋白质分析和双向样品制备等。在还原SDS-PAGE中,用6 mol/L的使蛋白质完全变性。用高还原分子中的二硫键。在加入碘乙酰胺至终浓度为0。1mol/L,于37℃反应2 h,加还原SDS-PAGE样品缓冲液100℃,3 min,然后进行SDS-PAGE分析。盐酸胍和碘乙酰胺可保证含二硫键的蛋白质分子完全变性并维持还原状态,在应用SDS-PAGE分析蛋白质样品的和纯度中有一定意义,并且该方法简便易行。&&&&To ensure the protein sample denatured and reduced thoroughly, iodoacetamide was employed in SDS-PAGE for the first time. Iodoacetamide is usually used as protease inhibitor or thiol group blocker in two-dimensional polyac-rylamide gel electrophoresis sample preparation, amino acid sequencing, MS analysis and so on. In reduced SDS-PAGE, we dissolved the sample in 6 mol/L GuHCl,2.88 mol/L β-ME then added iodoacetamide the final concentration of 0.1 mol/L, incubated the mixture at 37℃ for 2 h, then boiled wit...
碘乙酰胺在SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳中的应用
Article Name英文(英语)翻译
A Novel Application of lodoacetamide in SDS-PAGE;
WANG HZHANG Ying-YAN Z（ The Biotechnology CThe Fourth Military Medical UXi
an 710032;China）;
作者单位Author Agencies
陕西西安第四军医大学生物技术中心;
陕西西安第四军医大学生物技术中心 陕西西安;
文献出处 Article From
中国科学院上海冶金研究所; 材料物理与化学(专业)
博士论文 2000年度
SDS-聚丙烯凝胶电泳;
SDS-PAGE;AD
注：本页信息仅供交流学习使用，请勿将此信息作为用药或者就诊的依据！
<FONT color=# &2005&&京ICP备号&}