•  荷叶荷叶铁线蕨蕨又叫荷叶金钱艹、荷叶铁线蕨草是荷叶铁线蕨蕨科荷叶铁线蕨蕨属下的一个中国特有的品种，是多年生的蕨类荷叶荷叶铁线蕨蕨的植株高大约5到20厘米，它的根状茎短并且直立叶子簇生，单叶叶柄长3到14厘米，粗0.5到1.5毫米呈深栗色，叶子的基部密被着与根状茎上相同的鳞片和柔毛葉片呈圆形或是圆肾形，直径大约2到6厘米叶柄处生有或深或浅的缺裂，叶片上面围绕着叶柄处着生形成1到3个同心圆圈，叶片的边缘长囿圆钝的齿牙叶片的下面稀疏的长有棕色长柔毛。

  全部

荷叶荷叶铁线蕨蕨是肾叶荷叶铁線蕨的一个地理变型种,它首次发现于我国四川省的万县[1]除了重要的生物学意义意外,荷叶荷叶铁线蕨蕨的药用价值很早就被人们认知。据《本草纲目》记载,荷叶荷叶铁线蕨蕨可入药,具有清热解毒,利尿通淋的作用[2]目前已经得出荷叶荷叶铁线蕨蕨水粗提物对大肠杆菌、绿脓杆菌均具有较强的抑菌活性[3]。在此基础上进一步研究荷叶荷叶铁线蕨蕨不同溶剂提取物的抑菌活性以期发现新型抗菌物质。为荷叶荷叶铁線蕨蕨作为原料成为当今开发、研制无公害新型杀菌剂提供理论依据现将试验结果报道如下。1材料与方法1.1菌株:大肠埃希菌、铜绿假单胞菌、流感嗜血杆菌、粪链球菌购于中国药品生物制品检定所1.2药材:荷叶荷叶铁线蕨蕨采集于重庆市万州区,由重庆市三峡中药研究所张建海敎授鉴定。1.3培养基和试剂:采用NCCLS推荐使用的牛肉蛋白胨,青霉素钠,链霉素,红四氮唑(TTC)1.4方法1.4.1提取方法:荷叶荷叶铁线蕨蕨不同溶剂粗提取物的制备,參照文献[4,5]方法进行提取。(1)水提取物:取粉碎过80目筛的荷叶荷叶铁线蕨蕨粉100g,精密称定,加水500ml,沸水煮2h,过滤,滤液于55减压蒸馏,冷冻干燥,用DMSO配成500mg/ml溶液,巴氏消毒后备用;以此类推获得70%乙醇提取物、丙酮提取1.4.2培养基的制备:牛肉蛋白胨培养基。1.4.3菌液的制备[6]:将各供试菌菌种接种于MH琼脂分区划线,置37恒溫箱中培养18~24h,用接种环挑起单个菌落分别接种于MH肉汤培养基中,于37培养18~24h,用BaCl2比浊法确定每种菌的浓度,然后用生理盐水矫正含菌量为CFU/ml,再用肉汤稀释菌悬液100倍,含菌约CFU/ml,备用1.4.4药物敏感性实验:采用管碟法[7],取生长对数期菌液,取100l菌液涂于MH琼脂平板中央,用涂布棒均匀涂布,以无菌操作将灭菌的牛津杯放置在培养基上,轻轻加压,使其与培养基接触无空隙,每个平板可放置3个牛津杯。37培养15min至菌液被吸收,向3个牛津杯中分别添加100l500mg/ml的荷叶荷叶铁线蕨蕨不同溶剂提物液另2个牛津杯中分别加等量的生理盐水做阴性对照和青霉素、链霉素做阳性对照。然后置于37细菌培养箱中培养18~24h,观察抑菌圈,并采用十字交叉法测定抑菌圈直径,结果以毫米(mm)表示,重复5组,取平均值1.4.5MIC定[8]:以二倍稀释法测定MIC,在塑料离心管中加入MH肉汤对倍稀释成所需浓喥,起始质量浓度为500mg/ml,然后在96孔板中分别加入50l稀释好的样品,50l稀释好的菌液。每个浓度梯度设5份复孔;同时设空白对照组(只加肉汤),阴性对照组(只加菌液和肉汤),阳性对照组(添加青霉素、链霉素);置37培养箱中培养18~24h,培养结束后,每个孔中加入5l质量分数为0.5%的TTC,37继续培养1~3h,肉眼观察细菌的生长,培养孔呈現红色为有细菌生长,结果判断以不显色的组其样品质量浓度为该样品对测试菌MIC2结果2.1荷叶荷叶铁线蕨蕨粗提物的抑菌活性:荷叶荷叶铁线蕨蕨醇提物效果最佳,水提物效果次之,丙酮提取物效果相对较差。实验结果表明上述病原菌对荷叶荷叶铁线蕨蕨乙醇提取物均达到高度敏感,供試菌中全是革兰阴性菌,提示荷叶荷叶铁线蕨蕨提取物抗菌谱较窄见表1。表13种荷叶荷叶铁线蕨蕨粗提物抑菌圈直径(n=5,mm)样品粪链球菌大肠埃希菌流感嗜血杆菌铜绿假单胞菌水提取物55.759.539.741.7乙醇提取物57.561.342.545.5丙酮提取物30.735.925.629.1阴性对照----阳性对照注:“-”表示无抑菌作用2.2荷叶铁