抗坏血酸标准溶液配制 完美作业网 www.wanmeila.com
固蓝盐b测定法中水溶性固体抗坏血酸含量在0.2g/l以上怎么制备 食品中还原型抗坏血酸的测定 1 范围 本标准规定了食品中抗坏血酸的分光光度法。 本标准适用于各类食品中的还原型抗坏血酸的测定。 本标准不适用于脱氢行抗坏血酸的测定。 2 原理
在乙酸溶液中，抗坏血酸与固蓝盐B反应生成黄色的草酰肼–2–羟基丁酰内酯衍生物，在最大吸收波长420处测定吸光度，与标准系列比较定量。 3 试剂 3.1 乙酸溶液（12%）：吸收12mL冰乙酸，加水稀释至100mL。 3.2 乙酸溶液（ 2%）：吸收 2mL冰乙酸，加水稀释至100mL。 3.3 乙二胺四乙酸二钠溶液（35g/L）：称取3.5g乙二胺四乙酸二钠[C10H14N2O8Na·2H2O]于水中，加热使之溶解后，放冷，并稀释至100 mL。 3.4 蛋白沉淀剂 3.4.1 乙酸锌溶液（220g/L）：称取22.0g乙酸锌[Zn(CH3COO)2·2H2O],加3 mL冰乙酸溶于水，并稀释至100 mL。 3.4.2 亚铁氰化钾溶液（106g/L）：称取10.6g亚铁氰化钾[K4Fe(CN)4·3H2O],加水溶解至100 mL。 3.5 显色剂：固蓝盐B（Fast Blue Salt B）溶液（2g/L）：准确称取0.3125g固蓝盐B，加水溶解于100 mL。 3.6 抗坏血酸标准储备溶液（2.0mg/mL）：精密称取0.2000g抗坏血酸，加20 mL乙酸溶液（12%），溶解后移入100 mL棕色容量瓶中，用水稀释至刻度，混匀。此溶液每毫升相当于2.0mg抗坏血酸（10℃下冰箱内贮存在2d内稳定）。 3.7 抗坏血酸标准使用液（0.1g/L）：用移液管精密吸取5.0 mL抗坏血酸标准储备溶液（2.0g/L）于100 mL棕色容量瓶内，加5 mL乙酸溶液（12%），用水稀释至刻度，混匀。此溶液每毫升相当于100μg/mL抗坏血酸（临用时配制）。 4 仪器 4.1 分光光度计。 4.2 捣碎机。 4.3 离心沉淀机。 4.4 10mL具塞玻璃比色管。 5 分析步骤
5.1 试样溶液的制备 5.1.1 非蛋白性食 5.1.1.1 液体试样：抗坏血酸含量在0.2g/L以下的试样，混匀后可直接取样测定；抗坏血酸含量在0.2g/L以上的试样，用水适量稀释后测定。 5.1.1.2 水溶性固体试样：准确称取1.0g～5.0g精确至0.001g（含0.2g/kg以下抗坏血酸）放入乳钵中，加5mL乙酸溶液（12%）研磨溶解后，移入100mL棕色容量瓶内，加水稀释至刻度。 5.1.1.3 蔬菜、水果：称取鲜样可食部分20.0g～50.0g于捣碎机内，加同倍量的乙酸溶液（12%）捣成匀浆。称取10.0g～......
维生素cx=v×c÷m×f×(100÷1000)
不理解 这个公式是维生素测定公式，维生素C测定就是对维生素C的测定。在测定维生素C的国标方法中，荧光法为测定食物中维生素C含量的第一标准方法，2、4－二硝基苯肼法作为第二法。一荧光法编辑1．原理样品中还原型抗坏血酸经活性炭氧化成脱氢型抗坏血酸后，与邻苯二胺（OPDA）反应生成具有荧光的喹喔啉（quinoxaline）,其荧光强度与脱氢抗坏血酸的浓度在一定条件下成正比，以此测定食物中抗坏血酸和脱氢抗坏血酸的总量。脱氢抗坏血酸与硼酸可形成复合物而不与OPDA反应，以此排除样品中荧光杂质所产生的干扰。本方法的最小检出限为0.022g/ml。2．适用范围GB12392-90本方法适用于蔬菜、水果及其制品中总抗坏血酸的测定3．仪器3．1．实验室常用设备。3．2．荧光分光光度计或具有350nm及430nm波长的荧光计。3．3．打碎机。4．试剂本实验用水均为蒸馏水，试剂不加说明均为分析纯试剂。（1）偏磷酸－乙酸液：称取15g偏磷酸，加入40ml冰乙酸及250ml水，搅拌，放置过夜使之逐渐溶解，加水至500ml。4℃冰箱可保存7～10天。（2）0.15mol/L硫酸：取10ml硫酸，小心加入水中，再加水稀释至1200ml。（3）偏磷酸－乙酸－硫酸液：以0.15mol/L硫酸液为稀释液，其余同4.1.配制。（4）50%乙酸钠溶液：称取500g乙酸钠（CH3COONa·3H2O），加水至1000ml。（5）硼酸-乙酸钠溶液：称取3g硼酸，溶于100ml乙酸钠溶液（4.4）中。临用前配制。（6）邻苯二胺溶液：称取20mg邻苯二胺，于临用前用水稀释至100ml。（7）0.04%百里酚蓝指示剂溶液：称取0.1g百里酚蓝，加0.02mol/L氢氧化钠溶液，在玻璃研钵中研磨至溶解，氢氧化钠的用量约为10.75ml，磨溶后用水稀释至250ml。变色范围：pH=1.2红色pH=2.8黄色pH>4.0兰色（8）活性炭的活化：加200g炭粉于1L1+9盐酸中，加热回流1~2h，过滤，用水洗至滤液中无铁离子为止，置于110~120℃烘箱中干燥，备用。（9）标准抗坏血酸标准溶液（1mg/ml）：准确称取50mg抗坏血酸，用溶液（4.1）溶于50ml容量瓶中，并稀释至刻度。抗坏血酸标准使用液（100μg/ml）:取10ml抗坏血酸标准液，用偏磷酸-乙酸溶液稀释至100ml。定容前试pH值，如其pH>2.2时，则应用溶液（4.3）稀释。标准曲线的制备：取下述"标准"溶液（抗坏血酸含量10μg/ml）0.5、1.0、1.5和2.0ml标准系列，取双份分别置于10ml带盖试管中，再用水补充至2.0ml。5.操作步骤5.1样品制备全部实验过程应避光。称取100g鲜样，加100g偏磷酸-乙酸溶液，倒入打碎机内打成匀浆，用百里酚蓝指示剂调试匀浆酸碱度。如呈红色，即可用偏磷酸-乙酸溶液稀释，若呈黄色或兰色，则用偏磷酸-乙酸-硫酸溶液稀释，使其pH为1.2。匀浆的取量需根据样品中抗坏血酸的含量而定。当样品液含量在40~100μg/ml之间，一般取20g匀浆，用偏磷酸-乙酸溶液稀释至100ml，过滤，滤液备用。5.2氧化处理：分别取样品滤液及标准使用液各100ml于带盖三角瓶中，加2g活性炭，用力振摇1min，过滤，弃去最初数毫升滤液，分别收集其余全部滤液，即样品氧化液和标准氧化液，待测定。5.3各取5ml标准氧化液于2个50ml容量瓶中，分别标明"标准"及"标准空白&quo......
空白对照以等量蒸馏水代替显色液，阴性对照以等量蒸馏水代替样品，阳性对照使用抗坏血酸标准溶液。 巨噬细胞染色程滴加等量蒸馏水?均衡ph值,细胞各种均属蛋白质,蛋白质系两性电解质,所带电荷随溶液pH定,偏酸性环境电荷增,易与伊红结合,红细胞嗜酸性粒细胞染色偏红,细胞核呈淡蓝色或染色；偏碱性环境负电荷增,易与美蓝结合,所细胞呈灰蓝色,颗粒呈深暗,嗜酸性颗粒呈暗褐,甚至棕黑色,性颗粒偏粗,呈紫黑色.稀释染液必须用缓冲液,冲洗用水应近性,否则导致细胞染色呈色异,形态难识别,甚至错误.
谁知道GB12392-90的原文啊关于食品分析方面的国家标准是国家规定的原文 不是按规定要求采用的分析方法和论文抗坏血酸(维生素C)的测定方法在测定维生素C的国标方法中,荧光法为测定食物中维生素C含量的第一标准方法,2,4-二硝基苯肼法作为第二法.一,荧光法1.原理样品中还原型抗坏血酸经活性炭氧化成脱氢型抗坏血酸后,与邻苯二胺(OPDA)反应生成具有荧光的喹喔啉(quinoxaline),其荧光强度与脱氢抗坏血酸的浓度在一定条件下成正比,以此测定食物中抗坏血酸和脱氢抗坏血酸的总量.脱氢抗坏血酸与硼酸可形成复合物而不与OPDA反应,以此排除样品中荧光杂质所产生的干扰.本方法的最小检出限为0.022 g/ml.2.适用范围GB12392-90 本方法适用于蔬菜,水果及其制品中总抗坏血酸的测定3.仪器3.1.实验室常用设备.3.2.荧光分光光度计或具有350nm及430nm波长的荧光计.3.3.打碎机.4.试剂本实验用水均为蒸馏水,试剂不加说明均为分析纯试剂.(1)偏磷酸-乙酸液:称取15g偏磷酸,加入40ml冰乙酸及250ml水,搅拌,放置过夜使之逐渐溶解,加水至500ml.4℃冰箱可保存7～10天.(2)0.15 mol/L硫酸:取10ml硫酸,小心加入水中,再加水稀释至1200ml.(3)偏磷酸-乙酸-硫酸液:以0.15mol/L硫酸液为稀释液,其余同4.1.配制.(4)50% 乙酸钠溶液:称取500g乙酸钠(CH3COONa·3H2O),加水至1000ml.(5)硼酸-乙酸钠溶液:称取3g硼酸,溶于100ml乙酸钠溶液(4.4)中.临用前配制.(6) 邻苯二胺溶液:称取20mg邻苯二胺,于临用前用水稀释至100ml.(7) 0.04%百里酚蓝指示剂溶液:称取0.1g百里酚蓝,加0.02mol/L氢氧化钠溶液,在玻璃研钵中研磨至溶解,氢氧化钠的用量约为10.75ml,磨溶后用水稀释至250ml.变色范围:pH=1.2 红色pH=2.8 黄色pH>4.0 兰色(8) 活性炭的活化:加200g炭粉于1L 1+9盐酸中,加热回流1~2h,过滤,用水洗至滤液中无铁离子为止,置于110~120℃烘箱中干燥,备用.(9)标准抗坏血酸标准溶液(1mg/ml):准确称取50mg抗坏血酸,用溶液(4.1)溶于50ml容量瓶中,并稀释至刻度.抗坏血酸标准使用液(100μg/ml): 取10ml抗坏血酸标准液,用偏磷酸-乙酸溶液稀释至100ml.定容前试pH值,如其pH>2.2时,则应用溶液(4.3)稀释.标准曲线的制备:取下述"标准"溶液(抗坏血酸含量10μg/ml)0.5,1.0,1.5和2.0ml标准系列,取双份分别置于10ml带盖试管中,再用水补充至2.0ml.5.操作步骤5.1 样品制备全部实验过程应避光.称取100g鲜样,加100g偏磷酸-乙酸溶液,倒入打碎机内打成匀浆,用百里酚蓝指示剂调试匀浆酸碱度.如呈红色,即可用偏磷酸-乙酸溶液稀释,若呈黄色或兰色,则用偏磷酸-乙酸-硫酸溶液稀释,使其pH为1.2.匀浆的取量需根据样品中抗坏血酸的含量而定.当样品液含量在40~100μg/ml之间,一般取20g匀浆,用偏磷酸-乙酸溶液稀释至100ml,过滤,滤液备用.5.2 氧化处理:分别取样品滤液及标准使用液各100ml于带盖三角瓶中,加2g活性炭,用力振摇1min,过滤,弃去最初数毫升滤液,分别收集其余全部滤液,即样品氧化液和标准氧化液,待测定.5.3 各取5ml标准氧化液于2个50ml容量瓶中,分别标明"标准"及"标准空白".5.4 各取5ml样品氧化液于2个50ml容量瓶中,分别标明"样品"及"样品空白".5.5 于"标准空白"及"样品空白"溶液中各加5ml硼酸-乙酸钠溶液,混合摇动15min,用水稀释至50ml,在4℃冰箱中放置2h,取出备用.5.6 于"样品"及"标准"溶液中各加入5ml50%乙酸钠溶液,用水稀释至50ml,备用.5.7 荧光反应取"标准空白"溶液,"样品空白"溶液及(5.6)中"样品"溶液各2ml,分别置于10ml带盖试管中.在暗室中迅速向各管中加入5ml邻苯二胺,振摇混合,在室温下反应35min,用激发光波长338nm,发射光波长420nm测定荧光强度.标准系列荧光强度分别减去标准空白荧光强度为纵坐标,对应的抗坏血酸含量为横坐标,绘制标准曲线或进行相关计算,其直线回归方程供计算时使用.6. 计算X=(c×V/m)×F×(100/1000)式中:X-----样品中抗坏血酸及脱氢抗坏血酸总含量,mg/100g;c------由标准曲线查得或由回归方程算得样品溶液浓度,μg/m-----试样质量,g;F------样品溶液的稀释倍数;V------荧光反应所用试样体积,ml.例: 测定每一制备溶液的荧光强度.用标准溶液每ml含2.5μg,5.0μg,7.5μg及10.0μg,各标准浓度管读数减去相应的标准空白读数的各平均值做标准曲线.由样品液读数减去样品液空白读数之值,从标准曲线上查得相应的抗坏血酸(μg/ml),按取样量及稀释率计算样品中抗坏血酸的含量.如:取制备好的辣椒样品2.138g,稀释到100ml,氧化后分别取10ml滤液稀释到50ml样品读数为23.34,样品空白读数为3.188,样品读数减去样品空白读数为20.152,查荧光标准曲线相当标准抗坏血酸的2.23μg.2.23×100 50 100-----×-×-- = 52(mg/100g)2.138 10 10007. 注意事项7.1 大多数植物组织内含有一种能破坏抗坏血酸的氧化酶,因此,抗坏血酸的测定应采用新鲜样品并尽快用偏磷酸-醋酸提取液将样品制成匀浆以保存维生素C.7.2 某些果胶含量高的样品不易过滤,可采用抽滤的方法,也可先离心,再取上清液过滤.7.3活性炭可将抗坏血酸氧化为脱氢抗坏血酸,但它也有吸附抗坏血酸的作用,故活性炭用量应适当与准确,所以,应用天平称量.我们的实验结果证明,用2g活性炭能使测定样品中还原型抗坏血酸完全氧化为脱氢型,其吸附影响不明显.二,2,4-二硝基苯肼法1.原理总抗坏血酸包括还原型,脱氢型和二酮古乐糖酸.样品中还原型抗坏血酸经活性炭氧化为脱氢抗坏血酸,再与2,4-二硝基苯肼作用生成红色脎,脎的含量与总抗坏血酸含量成正比,进行比色测定.2.适用范围GB12392-90 本方法适用于蔬菜,水果及其制品中总抗坏血酸的测定.3. 仪器3.1恒温箱:37±0.5℃3.2可见-紫外分光光度计3.3打碎机4.试剂本实验用水均为蒸馏水,试剂纯度均为分析纯.4.1 4.5mol/L硫酸:谨慎地加250ml硫酸(比重1.84)于700ml水中,冷却后用水稀释至1000ml.4.2 85%硫酸:谨慎地加900ml硫酸(比重1.84)于100ml水中.4.3 2%2,4-二硝基苯肼溶液:溶解2g 2,4-二硝基苯肼于100ml4.5mol/L硫酸内,过滤.不用时存于冰箱内,每次用前必须过滤.4.4 2%草酸溶液:溶解20g草酸于700ml水中,稀释至1000ml.4.5 1%草酸溶液:稀释500ml 2%草酸溶液到1000ml.4.6 1%硫脲溶液:溶解5g硫脲于500ml 1%草酸溶液中.4.7 2%硫脲溶液:溶解10g硫脲于500ml1%草酸溶液中.4.8 1mol/L盐酸:取100ml盐酸,加入水中,并稀释至1200ml.4.9 活性炭:将100g活性炭加到750ml 1mol/L盐酸中,回流1~2h,过滤,用水洗数次,至滤液中无铁离子(Fe3+)为止,然后置于110℃烘箱中烘干.4.10 标准(1)抗坏血酸标准溶液(1mg/ml):溶解100mg纯抗坏血酸于100ml 1%草酸溶液中.(2)标准曲线绘制加1g活性炭于50ml标准溶液中,摇动1min,过滤.取10ml滤液放入500ml容量瓶中,加5.0g硫脲,用1%草酸溶液稀释至刻度.抗坏血酸浓度为20μg/ml.取5,10,20,25,40,50,60ml稀释液,分别放入7个100ml容量瓶中,用1%硫脲溶液稀释至刻度,使最后稀释液中抗坏血酸的浓度分别为1,2,4,5,8,10及12μg/ml.按样品测定步骤形成脎并比色.以吸光值为纵坐标,以抗坏血酸浓度(μg/ml)为横坐标绘制标准曲线.5. 操作步骤5.1样品制备全部实验过程应避光.5.1.1鲜样制备:称100g鲜样和100g2%草酸溶液,倒入打碎机中打成匀浆,取10-40g匀浆(含1-2mg抗坏血酸)倒入100ml容量瓶中,用1%草酸溶液稀释至刻度,混匀.5.1.2干样制备:称1-4g干样(含1-2mg抗坏血酸)放入乳钵内,加入1%草酸溶液磨成匀浆,倒入100ml容量瓶中,用1%草酸溶液稀释至刻度,混匀.5.1.3将上述两液过滤,滤液备用.不易过滤的样品可用离心机沉淀后,倾出上清液,过滤,备用.5.2氧化处理:取25ml上述滤液,加入0.5g活性炭,振摇1min,过滤,弃去最初数毫升滤液.取10ml此氧化提取液,加入10ml 2%硫脲溶液,混匀.5.3呈色反应5.3.1于三个试管中各加入4ml稀释液.一个试管作为空白,在其余试管中加入1.0ml 2%2,4-二硝基苯肼溶液,将所有试管放入37±0.5℃恒温箱或水浴中,保温3h.5.3.2 3h后取出,除空白管外,将所有试管放入冰水中.空白管取出后使其冷到室温,然后加入1.0ml 2%2,4-二硝基苯肼溶液,在室温中放置10~15min后放入冰水内.其余步骤同样品.5.3.3 85%硫酸处理:当试管放入冰水后,向每一试管中加入5ml85%硫酸,滴加时间至少需要1min,需边加边摇动试管.将试管自冰水中取出,在室温放置30min后比色.5.3.4 比色:用1cm比色杯,以空白液调零点,于500nm波长测吸光值.6. 计算同荧光法.7. 注意事项7.1 大多数植物组织内含有一种能破坏抗坏血酸的氧化酶,因此,抗坏血酸的测定应采用新鲜样品并尽快用2%草酸溶液制成匀浆以保存维生素C.7.2 若溶液中含有糖,硫酸加得太快,溶解热会使溶液变黑.7.3 试管自冰水中取出后,颜色会继续变深,所以,加入硫酸后30分钟应准时比色.
标定标准溶液和测定样品所用方法是否应该相同 如果不同会怎样 5分维生素C是一种已糖醛基酸,有抗坏血病的作用,所以被人们称做抗坏血酸,主要为还原型及脱氢型两种,广泛存在于植物组织中,新鲜的水果、蔬菜,特别是枣、辣椒、苦瓜、柿子叶、猕猴桃、柑橘等食品中含量较多.它是氧化还原酶之一,本身易被氧化,但在有些条件下又是一种抗氧化剂. 维生素C（还原型）纯品为白色无臭结晶,熔点190～192℃,溶于水或乙醇中,不溶于油剂.在水溶液中易被氧化,在碱性条件下易分解,在弱酸条件中较稳定,维生素C开始氧化为脱氢型抗坏血酸（有生理作用）.如果进一步水解则生成2,3-二酮古乐糖酸,失去生理作用. 根据它具有的还原性质可以测定维生素C的含量.常用的测定方法有（1）2,6-二氯靛酚法 （还原型VC）（2）2,4-二硝基苯肼法 （总VC）（3）碘量法（4）荧光分光光度法一、2,6-二氯靛酚滴定法 1、原理：还原型抗坏血酸还原染料2,6-二氯靛酚,该染料在酸性中呈红色,被还原后红色消失.还原型抗坏血酸还原2,6-二氯靛酚后,本身被氧化成脱氢抗坏血酸.在没有杂质干扰时,一定量的样品提取液还原标准2,6-二氯靛酚的量与样品中所含维生素C的量成正比. 2、试剂 ⑴ 1%草酸溶液：称取10g草酸,加水至1000ml； ⑵ 2%草酸溶液：称20g草酸,加水至1000ml； ⑶ 维生素C标准液：准确称20mgVC溶于1%草酸中,并稀释至100ml,吸5ml于50ml容量瓶中,加入1%草酸至刻度,此溶液每毫升含有0.02mgVC； ⑷ 0.02%2,6-二氯靛酚溶液：称取2,6-二氯靛酚50mg,溶于200ml含有52mg碳酸氢钠的热水中,冷却后,稀释至250ml,过滤于棕色瓶中,贮存于冰箱内,应用过程中每星期标定一次. 标定一：吸标液（VC）5ml于三角瓶→加6%KI溶液0.5ml→加1%淀粉3滴→用0.001N KIO3标液滴定到淡兰色. 计算： 抗坏血酸浓度（mg/ml）= （V1 × 0.088）/ V2 V1 - 滴定时消耗0.001N KIO3标液的体积（ml） V2 -维生素C重量（g） 0.088 -1ml0.001N KIO3标液≈维生素C的量（mg/ml）标定二：吸5ml已知浓度V C标液 → 加5ml1%草酸 → 用染料2,6-二氯靛酚滴定至溶液呈粉红色,在15秒不褪色为终点计算：每毫升2,6-二氯靛酚相当于维生素C的毫克数等于滴定度（T） T= （C × V1）/ V2 C - 维生素C的浓度（mg/ml） V1 -维生素C的体积（ml） V2 -消耗2,6-二氯靛酚的体积（ml） ⑸ 0.001N KIO3标液：吸0.1N KIO3溶液5ml→于500ml容量瓶内→加水至刻度,每毫升相当于VC0.008mg； ⑹ 0.5%淀粉溶液； ⑺ 6%KI溶液； 3、操作方法 ⑴ 提取：称样50g→加2%草酸100ml→到入捣碎机中→处理→过滤→颜色若深可加白陶土 ⑵ 滴定：吸5ml样液→于三角瓶→用染料滴定至粉红色→15秒内不褪色计算： VC（mg/100g）=（V × T）/ W × 100 V -消耗染料体积（ml） T -1ml染料所能氧化维生素C的毫克数 W- 滴定时所有滤液中含有样品的克数 4、注意事项 ⑴ 所有试剂的配制最好都用重蒸馏水； ⑵ 滴定时,可同时吸二个样品.一个滴定,另一个作为观察颜色变化的参考； ⑶ 样品进入实验室后,应浸泡在已知量的2%草酸液中,以防氧化,损失维生素C； ⑷ 贮存过久的罐头食品,可能含有大量的低铁离子（Fe2+）,要用8%的醋酸代替2%草......
检验水果中维他命C的含量 实验是一个生物性质的实验.不用碘进行检验用其他的试剂,水果、蔬菜维生素C含量测定法(2,6－二氯靛酚滴定法)中华人民共和国国家标准 UDC 634.1/.8 :635.1/.8水果、蔬菜维生素C含量测定法 :543 (2,6－二氯靛酚滴定法) GB 6195-86Determination of vitamin C in vegetables and fruits (2,6-dichloro-indophenol titration method)1 适用范围 本标准适用于果品、蔬菜及其加工制品中还原型抗坏血酸的测定(不含二价铁、二价 锡、一价铜、二氧化硫、亚硫酸盐或硫代硫酸盐),不适用于深色样品.2 测定原理 染料2,6－二氯靛酚的颜色反应表现两种特性,一是取决于其氧化还原状态,氧化态为深蓝色,还原态变为无色;二是受其介质的酸度影响,在碱性溶液中呈深蓝色,在酸性介质中呈浅红色.用蓝色的碱性染料标准溶液,对含维生素C的酸性浸出液进行氧化还原滴定,染料被还原为无色,当到达滴定终点时,多余的染料在酸性介质中则表现为浅红色,由染料用量计算样品中还原型抗坏血酸的含量.3 仪器设备 a.高速组织捣碎机:r/min.b.分析天平.c.滴定管:25ml、10ml.d.容量瓶:100ml.e.锥形瓶:100ml、50ml.f.吸管:10ml、5ml、2ml、1ml.g.烧杯:250ml、50ml.h.漏斗.4 试剂(凡未加说明者均为分析纯)4.1 浸提剂4.1.1 偏磷酸:2%溶液(W/V)* ,4.1.2 草酸:2%溶液(W/V).4.2 抗坏血酸标准溶液(1mg/ml):称取 100mg(准确至 0.1mg)抗坏血酸**,溶于浸提剂中并稀至100ml.现配现用.──────────* 偏磷酸不稳定,切勿加热.** 一般抗坏血酸纯度为99.5%以上,可不标定.如试剂发黄,则弃去不用.若要检查其纯度,可按附录B方法标定.4.3 2,6－二氯靛酚(2,6－二氯靛酚吲哚酚钠盐)溶液:称取碳酸氢钠52mg溶解在200ml热蒸馏水中,然后称取 2,6－二氯靛酚 50mg溶解在上述碳酸氢钠溶液中.冷却定容至250ml,过滤至棕色瓶内,保存在冰箱中.每次使用前,用标准抗坏血酸标定其滴定度.即吸取1ml抗坏血酸标准溶液于50ml锥形瓶中,加入10ml浸提剂,摇匀,用2,6－二氯靛酚溶 液滴定至溶液呈粉红色15s不褪色为止.同时,另取 10ml浸提剂做空白试验.滴定度按式(1)计算:C·V滴定度 T(mg/ml)＝─────………………………… (1)V1－V2式中:T-─每毫升2,6－二氯靛酚溶液相当于抗坏血酸的毫克数; C-─抗坏血酸的浓度,mg/ V-─吸取抗坏血酸的体积, V1-─滴定抗坏血酸溶液所用 2,6－二氯靛酚溶液的体积, V2-─滴定空白所用2,6－二氯靛酚溶液的体积,ml.4.4 白陶土(或称高岭土),对维生素C无吸附性.5 测定步骤5.1 样液制备:称取具有代表性样品的可食部分100g,放入组织捣碎机中,加 100ml浸 提剂,迅速捣成匀浆.称 10～40g浆状样品,用浸提剂将样品移入 100ml容量瓶,并稀释 至刻度,摇匀过滤.若滤液有色,可按每克样品加 0.4g白陶土脱色后再过滤.5.2 滴定:吸取10ml滤液放入50ml锥形瓶中,用已标定过的 2,6－二氯靛酚溶液滴定,直至溶液呈粉红色 15s不褪色为止.同时做空白试验.6 结果计算6.1 计算公式:维生素 C按式(2)计算:(V－V0)·T·A维生素C(mg/100g)＝────────-×100 …………………(2)W式中:V--滴定样液时消耗染料溶液的体积, V0--滴定空白时消耗染料溶液的体积,T--2,6－二氯靛酚染料滴定度,mg/ A--稀释倍数; W--样品重量,g.6.2 平行测定的结果,用算术平均值表示,取三位有效数字,含量低的保留小数点后两位数字.6.3 平行测定结果的相对相差,在维生素C含量大于20mg/100g时,不得超过2%,小于 20mg/100g时,不得超过 5%.
维生素c分子中氢元素的质量分数最小对不对 病情分析：在测定维生素C的国标方法中,荧光法为测定食物中维生素C含量的第一标准方法,2,4－二硝基苯肼法作为第二法.一,荧光法1.原理样品中还原型抗坏血酸经活性炭氧化成脱氢型抗坏血酸后,与邻苯二胺（OPDA）反应生成具有荧光的喹喔啉（quinoxaline）,其荧光强度与脱氢抗坏血酸的浓度在一定条件下成正比,以此测定食物中抗坏血酸和脱氢抗坏血酸的总量.脱氢抗坏血酸与硼酸可形成复合物而不与OPDA反应,以此排除样品中荧光杂质所产生的干扰.本方法的最小检出限为0.022 g/ml.2.适用范围GB12392-90 本方法适用于蔬菜,水果及其制品中总抗坏血酸的测定3.仪器3.1.实验室常用设备.3.2.荧光分光光度计或具有350nm及430nm波长的荧光计.3.3.打碎机.4.试剂本实验用水均为蒸馏水,试剂不加说明均为分析纯试剂.（1）偏磷酸－乙酸液：称取15g偏磷酸,加入40ml冰乙酸及250ml水,搅拌,放置过夜使之逐渐溶解,加水至500ml.4℃冰箱可保存7～10天.（2）0.15 mol/L硫酸：取10ml硫酸,小心加入水中,再加水稀释至1200ml.（3）偏磷酸－乙酸－硫酸液：以0.15mol/L硫酸液为稀释液,其余同4.1.配制.（4）50％ 乙酸钠溶液：称取500g乙酸钠（CH3COONa·3H2O）,加水至1000ml.（5）硼酸-乙酸钠溶液：称取3g硼酸,溶于100ml乙酸钠溶液（4.4）中.临用前配制.（6） 邻苯二胺溶液：称取20mg邻苯二胺,于临用前用水稀释至100ml.（7） 0.04%百里酚蓝指示剂溶液：称取0.1g百里酚蓝,加0.02mol/L氢氧化钠溶液,在玻璃研钵中研磨至溶解,氢氧化钠的用量约为10.75ml,磨溶后用水稀释至250ml.变色范围：pH=1.2 红色pH=2.8 黄色pH＞4.0 兰色（8） 活性炭的活化：加200g炭粉于1L 1+9盐酸中,加热回流1~2h,过滤,用水洗至滤液中无铁离子为止,置于110~120℃烘箱中干燥,备用.（9）标准抗坏血酸标准溶液（1mg/ml）：准确称取50mg抗坏血酸,用溶液（4.1）溶于50ml容量瓶中,并稀释至刻度.抗坏血酸标准使用液（100μg/ml）： 取10ml抗坏血酸标准液,用偏磷酸-乙酸溶液稀释至100ml.定容前试pH值,如其pH＞2.2时,则应用溶液（4.3）稀释.标准曲线的制备：取下述"标准"溶液（抗坏血酸含量10μg/ml）0.5,1.0,1.5和2.0ml标准系列,取双份分别置于10ml带盖试管中,再用水补充至2.0ml.5.操作步骤5.1 样品制备全部实验过程应避光.称取100g鲜样,加100g偏磷酸-乙酸溶液,倒入打碎机内打成匀浆,用百里酚蓝指示剂调试匀浆酸碱度.如呈红色,即可用偏磷酸-乙酸溶液稀释,若呈黄色或兰色,则用偏磷酸-乙酸-硫酸溶液稀释,使其pH为1.2.匀浆的取量需根据样品中抗坏血酸的含量而定.当样品液含量在40~100μg/ml之间,一般取20g匀浆,用偏磷酸-乙酸溶液稀释至100ml,过滤,滤液备用.5.2 氧化处理：分别取样品滤液及标准使用液各100ml于带盖三角瓶中,加2g活性炭,用力振摇1min,过滤,弃去最初数毫升滤液,分别收集其余全部滤液,即样品氧化液和标准氧化液,待测定.5.3 各取5ml标准氧化液于2个50ml容量瓶中,分别标明"标准"及&quo......
怎么从标准曲线中查试液相应体积 病情分析：在测定维生素C的国标方法中,荧光法为测定食物中维生素C含量的第一标准方法,2,4－二硝基苯肼法作为第二法.一,荧光法原理样品中还原型抗坏血酸经活性炭氧化成脱氢型抗坏血酸后,与邻苯二胺（OPDA）反应生成具有荧光的喹喔啉（quinoxaline）,其荧光强度与脱氢抗坏血酸的浓度在一定条件下成正比,以此测定食物中抗坏血酸和脱氢抗坏血酸的总量.脱氢抗坏血酸与硼酸可形成复合物而不与OPDA反应,以此排除样品中荧光杂质所产生的干扰.本方法的最小检出限为0.022 g/ml.2.适用范围GB12392-90 本方法适用于蔬菜,水果及其制品中总抗坏血酸的测定3.仪器3.1.实验室常用设备.3.2.荧光分光光度计或具有350nm及430nm波长的荧光计.3.3.打碎机.4.试剂本实验用水均为蒸馏水,试剂不加说明均为分析纯试剂.（1）偏磷酸－乙酸液：称取15g偏磷酸,加入40ml冰乙酸及250ml水,搅拌,放置过夜使之逐渐溶解,加水至500ml.4℃冰箱可保存7～10天.（2）0.15 mol/L硫酸：取10ml硫酸,小心加入水中,再加水稀释至1200ml.（3）偏磷酸－乙酸－硫酸液：以0.15mol/L硫酸液为稀释液,其余同4.1.配制.（4）50％ 乙酸钠溶液：称取500g乙酸钠（CH3COONa·3H2O）,加水至1000ml.（5）硼酸-乙酸钠溶液：称取3g硼酸,溶于100ml乙酸钠溶液（4.4）中.临用前配制.（6） 邻苯二胺溶液：称取20mg邻苯二胺,于临用前用水稀释至100ml.（7） 0.04%百里酚蓝指示剂溶液：称取0.1g百里酚蓝,加0.02mol/L氢氧化钠溶液,在玻璃研钵中研磨至溶解,氢氧化钠的用量约为10.75ml,磨溶后用水稀释至250ml.变色范围：pH=1.2 红色pH=2.8 黄色pH＞4.0 兰色（8） 活性炭的活化：加200g炭粉于1L 1+9盐酸中,加热回流1~2h,过滤,用水洗至滤液中无铁离子为止,置于110~120℃烘箱中干燥,备用.（9）标准抗坏血酸标准溶液（1mg/ml）：准确称取50mg抗坏血酸,用溶液（4.1）溶于50ml容量瓶中,并稀释至刻度.抗坏血酸标准使用液（100μg/ml）： 取10ml抗坏血酸标准液,用偏磷酸-乙酸溶液稀释至100ml.定容前试pH值,如其pH＞2.2时,则应用溶液（4.3）稀释.标准曲线的制备：取下述"标准"溶液（抗坏血酸含量10μg/ml）0.5,1.0,1.5和2.0ml标准系列,取双份分别置于10ml带盖试管中,再用水补充至2.0ml.5.操作步骤5.1 样品制备全部实验过程应避光.称取100g鲜样,加100g偏磷酸-乙酸溶液,倒入打碎机内打成匀浆,用百里酚蓝指示剂调试匀浆酸碱度.如呈红色,即可用偏磷酸-乙酸溶液稀释,若呈黄色或兰色,则用偏磷酸-乙酸-硫酸溶液稀释,使其pH为1.2.匀浆的取量需根据样品中抗坏血酸的含量而定.当样品液含量在40~100μg/ml之间,一般取20g匀浆,用偏磷酸-乙酸溶液稀释至100ml,过滤,滤液备用.5.2 氧化处理：分别取样品滤液及标准使用液各100ml于带盖三角瓶中,加2g活性炭,用力振摇1min,过滤,弃去最初数毫升滤液,分别收集其余全部滤液,即样品氧化液和标准氧化液,待测定.5.3 各取5ml标准氧化液于2个50ml容量瓶中,分别标明"标准"及"......}