您所在位置： &
&nbsp&&nbsp&nbsp&&nbsp
离子交换层析解读.ppt79页
本文档一共被下载：
次 ,您可全文免费在线阅读后下载本文档。
文档加载中...广告还剩秒
需要金币：300 &&
你可能关注的文档：
··········
··········
实践中采用何种形式梯度洗脱液较为理想，这完全取决于特定的应用要求，并无规律可循。一般最好从线性梯度开始，然后按照摸索试验进行。 在阶梯式梯度溶液中所用的适宜浓度，应在线形梯度溶液的基础上慎重地选定。
在一定时间内，不同形式的梯度液流经层析柱某点累积体积时的浓度C，可用公式计算：
C CB-（CB-CA） 1- CB：B瓶浓度 CA：A瓶浓度 V2：流经层析柱体积 V1：洗脱液的总体积 V1 V2 举例： 离子交换层析中，以0.1-0.5mol/L的NaCl梯度的缓冲液洗脱（总体积200ml，梯度瓶直径相同），通过层析柱75ml时， NaCl浓度是多少？
0.5- 0.5-0.1 × 1- 0.25mol/L 75 200 7、洗脱速度 洗脱速度通常要保持恒定
洗脱速度慢比快的分辨率好
如果洗脱峰相对集中某个区域造成重叠，则应适当缩小梯度范围或降低洗脱速度来提高分辨率；如果分辨率较好，但洗脱峰过宽，则可适当提高洗脱速度。
8、洗脱液的监测收集及组分鉴定 监测 用紫外检测仪进行，在280nm处观察洗脱液的光吸收 收集 用分布收集器收集，可以自动收集，也可以手动收集 鉴定 聚丙烯酰胺凝胶电泳、测定活性等 9、离子交换剂的清洗、再生和保存
可溶于碱的污染物
0.1 mol/L NaOH洗涤、蒸馏水洗涤、结合缓冲液洗涤，可以除去诸如脂类、蛋白质和核酸这类的污染物。
对于疏水性污染物 乙醇溶液（如70%的乙醇）或非离子型的去污剂洗涤，可以除去脂类和其他的疏水性物质。 → → 金属污染物 EDTA饱和的10 mmol/L HCl（即pH 2）处理柱子 沉淀物杂质
去污剂、尿素和盐酸胍，可将柱子在6 mol/L 的尿素中平衡和温育，然后用去离子水和缓冲液洗涤。 再生 对使用过的离子交换剂进行处理，使其恢复原来性状的过程。 酸碱交替浸泡
处理洗净蛋白等杂质后，
正在加载中，请稍后...细胞库/细胞培养
ELISA试剂盒
实验室仪器/设备
原辅料包材
体外检测试剂
离子交换层析
离子交换层析
来源：互联网
点击次数：9369
离子交换层析的基本操作离子交换层析的基本装置及操作步骤与前面介绍的柱层析类似，这里就不再重复了。下面主要介绍离子交换层析操作中应注意的一些具体问题。1.层析柱离子交换层析要根据分离的样品量选择合适的层析柱，离子交换用的层析柱一般粗而短，不宜过长。直径和柱长比一般为1:10到1:50之间，层析柱安装要垂直。装柱时要均匀平整，不能有气泡。2.平衡缓冲液离子交换层析的基本反应过程就是离子交换剂平衡离子与待分离物质、缓冲液中离子间的交换，所以在离子交换层析中平衡缓冲液和洗脱缓冲液的离子强度和pH的选择对于分离效果有很大的影响。平衡缓冲液是指装柱后及上样后用于平衡离子交换柱的缓冲液。平衡缓冲液的离子强度和pH的选择首先要保证各个待分离物质如蛋白质的稳定。其次是要使各个待分离物质与离子交换剂有适当的结合，并尽量使待分离样品和杂质与离子交换剂的结合有较大的差别。一般是使待分离样品与离子交换剂有较稳定的结合。而尽量使杂质不与离子交换剂结合或结合不稳定。在一些情况下（如污水处理）可以使杂质与离子交换剂有牢固的结合，而样品与离子交换剂结合不稳定，也可以达到分离的目的。另外注意平衡缓冲液中不能有与离子交换剂结合力强的离子，否则会大大降低交换容量，影响分离效果。选择合适的平衡缓冲液，直接就可以去除大量的杂质。并使得后面的洗脱有很好的效果。如果平衡缓冲液选择不合适，可能会对后面的洗脱带来困难，无法得到好的分离效果。3.上样离子交换层析的上样时应注意样品液的离子强度和pH值，上样量也不宜过大，一般为柱床体积的1－5%为宜，以使样品能吸附在层析柱的上层，得到较好的分离效果。4.洗脱缓冲液在离子交换层析中一般常用梯度洗脱，通常有改变离子强度和改变pH两种方式。改变离子强度通常是在洗脱过程中逐步增大离子强度，从而使与离子交换剂结合的各个组分被洗脱下来；而改变pH的洗脱，对于阳离子交换剂一般是pH从低到高洗脱，阴离子交换剂一般是pH从高到低。由于pH可能对蛋白的稳定性有较大的影响，故一般通常采用改变离子强度的梯度洗脱。梯度洗脱的装置前面已经介绍了，可以有线性梯度、凹形梯度、凸形梯度以及分级梯度等洗脱方式。一般线性梯度洗脱分离效果较好，故通常采用线性梯度进行洗脱。洗脱液的选择首先也是要保证在整个洗脱液梯度范围内，所有待分离组分都是稳定的。其次是要使结合在离子交换剂上的所有待分离组分在洗脱液梯度范围内都能够被洗脱下来。另外可以使梯度范围尽量小一些，以提高分辨率。5.洗脱速度洗脱液的流速也会影响离子交换层析分离效果，洗脱速度通常要保持恒定。一般来说洗脱速度慢比快的分辨率要好，但洗脱速度过慢会造成分离时间长、样品扩散、谱峰变宽、分辨率降低等副作用，所以要根据实际情况选择合适的洗脱速度。如果洗脱峰相对集中某个区域造成重叠，则应适当缩小梯度范围或降低洗脱速度来提高分辨率；如果分辨率较好，但洗脱峰过宽，则可适当提高洗脱速度。6.样品的浓缩、脱盐离子交换层析得到的样品往往盐浓度较高，而且体积较大，样品浓度较低。所以一般离子交换层析得到的样品要进行浓缩、脱盐处理。离子交换层析的应用离子交换层析的应用范围很广，主要有以下几个方面。1.水处理离子交换层析是一种简单而有效的去除水中的杂质及各种离子的方法，聚苯乙烯树脂广泛的应用于高纯水的制备、硬水软化以及污水处理等方面。纯水的制备可以用蒸馏的方法，但要消耗大量的能源，而且制备量小、速度慢，也得不到高纯度。用离子交换层析方法可以大量、快速制备高纯水。一般是将水依次通过H+ 型强阳离子交换剂，去除各种阳离子及与阳离子交换剂吸附的杂质；再通过OH- 型强阴离子交换剂，去除各种阴离子及与阴离子交换剂吸附的杂质，即可得到纯水。再通过弱型阳离子和阴离子交换剂进一步纯化，就可以得到纯度较高的纯水。离子交换剂使用一段时间后可以通过再生处理重复使用。2.分离纯化小分子物质离子交换层析也广泛的应用于无机离子、有机酸、核苷酸、氨基酸、抗生素等小分子物质的分离纯化。例如对氨基酸的分析，使用强酸性阳离子聚苯乙烯树脂，将氨基酸混合液在pH 2~3上柱。这时氨基酸都结合在树脂上，再逐步提高洗脱液的的离子强度和pH，这样各种氨基酸将以不同的速度被洗脱下来，可以进行分离鉴定。目前已有全部自动的氨基酸分析仪。3.分离纯化生物大分子物质离子交换层析是依据物质的带电性质的不同来进行分离纯化的，是分离纯化蛋白质等生物大分子的一种重要手段。由于生物样品中蛋白的复杂性，一般很难只经过一次离子交换层析就达到高纯度，往往要与其它分离方法配合使用。使用离子交换层析分离样品要充分利用其按带电性质来分离的特性，只要选择合适的条件，通过离子交换层析可以得到较满意的分离效果。
相关实验方法
本网站所有注明“来源：丁香园”的文字、图片和音视频资料，版权均属于丁香园所有，非经授权，任何媒体、网站或个人不得转载，授权转载时须注明“来源：丁香园”。本网所有转载文章系出于传递更多信息之目的，且明确注明来源和作者，不希望被转载的媒体或个人可与我们联系，我们将立即进行删除处理。
试剂（盒）
丁香通采购热线：400-
Copyright (C)
DXY All Rights Reserved.离子交换层析（IEX）
离子交换层析（IEX）
离子交换层析（IEX）
离子交换层析是根据蛋白与填料之间可逆地电荷相互作用而进行分离的一种层析技术。生物分子即使有很小的电荷差异也可以被分离开。选择性最佳的离子交换剂和最优的实验条件有利于我们获得最高的分辨率。
蛋白质的带电性取决于溶液的pH。一般，当溶液pH高于蛋白的等电点（pI）是，蛋白质会带负电荷，结合到带正电荷的阴离子交换填料上。当溶液pH小于蛋白的等电点时，蛋白带正电，结合到带负电的阳离子交换填料上。典型的，当pH高于蛋白的等电点（PI）时，蛋白质会结合到带正电荷的阴离子交换剂上。在等电点以下时，蛋白质会结合到带负电荷的阳离子交换剂上。
根据功能基团离子化状态随pH变化的程度，阴离子和阳离子交换剂又具有了强弱之分。强离子交换剂在广泛的pH范围内有着同样的电荷密度，而弱离子交换剂的电荷密度会随着pH的变化而改变。在不同pH值的情况下，弱离子交换剂的选择性和负载能力是不同的。我们推荐从强离子交换剂开始(比如Q, S,或SP)，如果选择性不能令人满意时再尝试弱离子交换剂。
在离子交换层析中，蛋白质会在低离子强度下结合在层析介质上。接下来通过提高盐浓度或改变pH使得结合的蛋白洗脱下来。洗脱方式可以选择连续梯度洗脱或分步洗脱。
最常用的盐是氯化钠，但也可以使用其他盐。
特色产品领域
Make sharing easier with AddThis for Firefox.
Sharing Service Filter
Bioprocessing Applications
/webapp/wcs/stores/servlet/catalog/en/GELifeSciences-us/applications/bioprocessing-applications/
请选择你所在的国家
选择一个国家将允许您访问本地内容，使您可以在本地的货币中购物
亚洲 & 大洋洲
北美洲 & 拉丁美洲
没找到你的国家？ 请继续我们的.期本期执编：Snail
离子交换层析技术专题
1848年Thompson等人发现了离子交换形象，直到本世纪50年代离子交换层析技术才开始应用于生物学领域的研究。离子交换层析是以离子交换剂作为固定相，样品中准备分离的溶质可以与固定相中的离子进行交换，洗脱时离子按结合力的弱强先后洗脱，从而达到分离纯化的作用。离子交换层析技术应用比较广泛，如氨基酸、糖类、核苷酸等的分离与纯化。
> 离子交换层析技术专题
离子交换层析概述
本文主要讲述了：离子交换层析的基本原理、离子交换介质的基本性质、离子交换介质的选择原则、离子交换层析的基本操作
离子交换层析技术
离子交换树脂是一种在交联聚合物结构中含有离子交换基团的功能高分子材料。离子交换树脂不溶于酸、碱溶液及各种有机溶
选择离子交换树脂的主要依据是被分离物质的性质和分离目的。最重要的一条是根据分离要求和分离环境保证分离目的物与主
离子交换层析具有灵敏度高，重复性、选择性好，分析速度快等优点，是当前最常用的层析法之一。
离子交换层析是利用离子交换剂上的可交换离子与周围介质中被分离的各种离子间的亲和力不同，经过交换平衡达到分离的目
离子交换层析技术应用
离子交换层析注意事项
装柱前要仔细看填料的使用说明书，每种填料都有自己的特性，以及特殊的装柱方法，针对不同的空柱，也要注意方法可能不
离子交换纯化是利用离子交换剂上的可解离基团(活性基团)对各种离子的亲和力不一样人达到分离的目的的一种分离技术。离
首先是对离子交换剂电荷基团的选择，确定是选择阳离子交换剂还是选择阴离子交换剂。这要取决于被分离的物质在其稳定的
离子交换速度的影响因素很多，综合起来主要有以下几个方面：(1)颗粒大小：愈小越快；(2)交联度：交联度小，交换速度快；
Copyright(C) All Rights Reserved粤ICP备号-3小木虫 --- 500万硕博科研人员喜爱的学术科研平台
&&查看话题
求助求助多糖 离子交换层析
第一次做离子交换层析，完全的新手，请教大家第三个峰之后的线是怎么回事？？为什么测的吸光值都在0.1到0.2之间？
QQ截图52.png
研究生必备与500万研究生在线互动！
扫描下载送金币
浏览器进程
打开微信扫一扫
随时随地聊科研}