为什么要用小白鼠的脑细胞做科学研究_百度知道关注今日：0 | 主题：468954
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【原创】小鼠骨髓巨噬细胞原代培养技术（含图）
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这个帖子发布于3年零61天前，其中的信息可能已发生改变或有所发展。
最近在做小鼠骨髓来源巨噬细胞原代培养，有一些结果，请大家分享与讨论。1.C57小鼠颈椎脱臼处死，取双侧股骨与胫骨，转移至超净台；2.仔细分离肌肉等组织，完整暴露骨质，离断两端，1ml针头冲洗骨髓至DMEM培养基中；3.1000rpmx5min，重悬细胞，2mlL929细胞上清+10%DMEM培养基中
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不知道您现在做得怎么样了，我也是做这方面的，然后我培养出来的骨髓源巨噬细胞跟您的好像不太一样，给个图，希望互相讨论交流哈。总觉得至少是两种细胞，一种梭形的，一种椭圆形的，我都是不清楚骨髓源巨噬细胞的形态到底是怎样的呢！200倍
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第2天，本来计划不换液，但因死细胞太多，怕影响贴壁细胞生长，就用前面说的含20%L929培养基的DMEM培养基换液，换液后图片如下
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目前只到这一步了，不知道结果如何，请大家讨论。另外有个问题，后面想做巨噬细胞的细胞实验，需要转移至六孔板，看园子里养RAW细胞的消化方法好像说法不一，不知道原代巨噬细胞的消化是否也会有同样问题，即是否直接胰酶消化或者是吹打即可，欢迎讨论！
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您好，能加你QQ，深切交流吗？我也在做巨噬细胞。
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cheff0412 edited on
我也在做这个细胞，楼主能否加qq交流一下呀
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cheff0412 edited on
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fh_ssk edited on
我也在做这个细胞，楼主能否加qq交流一下呀
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cheff0412 edited on
原代巨噬细胞交流，大家一起进来讨论，共同进步。
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cheff0412 edited on
谢谢楼主分享经验。请问L929细胞的上清是如何收集的？初始的接种密度是多少，培养几天后能保证MCF的浓度？如何避免培养时间长了L929细胞状态不好？
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请问大家现在巨噬细胞养的怎么样？我用的是Peprotech Asia
M-csf因子，为什么每次收集的细胞都很少。
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楼主你好，我也在培养BMM，刚提完细胞，请问楼主成功了吗？可否发一下后面几天培养的图片，分享一下经验？谢谢！
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fh_ssk 最近在做小鼠骨髓来源巨噬细胞原代培养，有一些结果，请大家分享与讨论。1.C57小鼠颈椎脱臼处死，取双侧股骨与胫骨，转移至超净台；2.仔细分离肌肉等组织，完整暴露骨质，离断两端，1ml针头冲洗骨髓至DMEM培养基中；3.1000rpmx5min，重悬细胞，2mlL929细胞上清+10%DMEM培养基中 楼主，方便加个QQ交流下吗？我现在也在做这个BMDM细胞，遇到了一些问题，想请教一下，可以不？
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cheff0412 edited on
fh_ssk 最近在做小鼠骨髓来源巨噬细胞原代培养，有一些结果，请大家分享与讨论。1.C57小鼠颈椎脱臼处死，取双侧股骨与胫骨，转移至超净台；2.仔细分离肌肉等组织，完整暴露骨质，离断两端，1ml针头冲洗骨髓至DMEM培养基中；3.1000rpmx5min，重悬细胞，2mlL929细胞上清+10%DMEM培养基中 请问您加L929上清是什么作用呢？
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fh_ssk 目前只到这一步了，不知道结果如何，请大家讨论。另外有个问题，后面想做巨噬细胞的细胞实验，需要转移至六孔板，看园子里养RAW细胞的消化方法好像说法不一，不知道原代巨噬细胞的消化是否也会有同样问题，即是否直接胰酶消化或者是吹打即可，欢迎讨论！我是直接用的0.25%胰酶37℃消化~6-8 min，吹打即可，都能吹下来的哟！
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cheff0412 edited on
不知道您现在做得怎么样了，我也是做这方面的，然后我培养出来的骨髓源巨噬细胞跟您的好像不太一样，给个图，希望互相讨论交流哈。总觉得至少是两种细胞，一种梭形的，一种椭圆形的，我都是不清楚骨髓源巨噬细胞的形态到底是怎样的呢！200倍
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请问您加L929上清是什么作用呢？L929培养上清中有活性M-CSF，将其作为M-CSF的来源！哈哈，我自己解答了
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cheff0412 edited on
各位，有用巨噬细胞集落刺激因子刺激骨髓细胞转化为巨噬细胞的么，M-CSF用多大的浓度，每只C57能得到多少巨噬细胞？我的每只小鼠只能得到2X10E6啊，和文献的差很多，请各位讨论指点。
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各位战友，我用M-CSF刺激BMDM后检测发现CD206出现高表达峰，这不成了,M2极化了吗？？？求帮助，我需要M0细胞自己加刺激分子刺激分化才好
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各位战友，我用M-CSF刺激BMDM后检测发现CD206出现高表达峰，这不成了,M2极化了吗？？？求帮助，我需要M0细胞自己加刺激分子刺激分化才好我刺激M0成M2，CD206反而没表达？ 请问，M-CSF用多大浓度，每只鼠能得多少巨噬细胞？
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居然被注册了 各位战友，我用M-CSF刺激BMDM后检测发现CD206出现高表达峰，这不成了,M2极化了吗？？？求帮助，我需要M0细胞自己加刺激分子刺激分化才好 M-CSF就是向M2方向分化的 GM-CSF是向M1方向分化的
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心蓝5636 我刺激M0成M2，CD206反而没表达？ 请问，M-CSF用多大浓度，每只鼠能得多少巨噬细胞？ 20ng/ml,骨髓巨噬大概10^7
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亲亲蝴蝶飞
M-CSF就是向M2方向分化的 GM-CSF是向M1方向分化的但是很多文献，想要从骨髓获得巨噬细胞都是用M-CSF,刺激啊，一般GM-CSF是用来刺激DC，不过你的这个说法我也有看到过~~
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丁香园版主
居然被注册了 但是很多文献，想要从骨髓获得巨噬细胞都是用M-CSF,刺激啊，一般GM-CSF是用来刺激DC，不过你 ...我最近也在做，明天上图。我看到文献有先加gmcsf也有先加mcsf.然后在加lps等。我想可以不培养m0,直接加gmcsf然后加lps inf等诱导m1. 可能这样更定向~个人想法
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丁香园版主
这是我培养的骨髓巨噬细胞，经F480流式鉴定。这是我第一次做，昨天又提了两只小鼠。请指教。
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居然被注册了 但是很多文献，想要从骨髓获得巨噬细胞都是用M-CSF,刺激啊，一般GM-CSF是用来刺激DC，不过你 ...我的这个说法好多文献都是这样做的，但是我们老板解释的却是“略偏”。
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居然被注册了
20ng/ml,骨髓巨噬大概10^7但是也有文献报道用的是100ng/ml，请问你用20ng/ml诱导几天，隔天换液吗？
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居然被注册了
20ng/ml,骨髓巨噬大概10^7 你好，请问，你的每只小鼠可以的到10^7的成熟巨噬细胞吗？我也是按照楼主的方法提的，但是我培养出来的细胞特别少，都不到10^5，好忧伤。可以给我详细的培养步骤吗？我也是用L929上清刺激分化成熟的，原代分选出来多久换液呢？我做过2小时，4小时跟隔天换液，感觉效果都差不多，取的时候细胞挺多的，但是一换液，都没有多少贴壁的细胞，是我的处理不好，细胞都死了吗？求前辈指导。。。
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我现在的情况，和你差不多!取的时候挺多的，一换液就没了！
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亲们，我马上也要开始养骨髓巨噬细胞了，但由于我是新手，老板说让我先不用细胞因子，不知道结果会怎样。。。静待。。希望后期可以向前辈们讨教讨教。
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楼主你好！我们最近也在养巨噬细胞细胞，结果前几天也跟你的一样，请问楼主的巨噬细胞最后鉴定结果怎样？
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可以请教经验吗？
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丁香园版主
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用 流式测CD206需要破膜么，还是直接表面染色，流抗用哪家的，我用biolegend公司的，应该需要破膜，说明书上是这样写的：Each lot of this antibody is quality control tested by .
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用 流式测CD206需要破膜么，还是直接表面染色，流抗用哪家的，我用biolegend公司的，应该需要破膜，说明书上是这样写的：Each lot of this antibody is quality control tested by . 请问你最后解决了吗？到底需不需要破膜
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关于丁香园考点：细胞凋亡的含义
分析：实验中甲为对照组，乙、丙、丁三组为实验组，本实验中四组实验的醋酸铅浓度不同，为自变量，结果引起胸腺细胞凋亡率不同，为因变量．由表中数据可知，在正常的生活环境中，胸腺细胞也会发生凋亡，据此解答．
解：A、甲组无醋酸铅，乙、丙、丁有一定浓度的醋酸铅，故甲为对照组，乙、丙、丁三组为实验组，A错误．B、本实验中四组实验的醋酸铅浓度不同，为自变量，结果引起胸腺细胞凋亡率不同，为因变量，B错误．C、由表中数据可知，在正常的生活环境中，胸腺细胞也会发生凋亡，只是凋亡率低，C错误．D、据实验结果可知，铅离子浓度越高，胸腺细胞凋亡率越高，故高浓度的铅离子可导致小鼠特异性免疫功能减弱，D正确．故选：D．
点评：本题考查免疫相关知识，意在考查考生分析和比较数据的能力，理解所学知识的要点并能运用所学知识进行分析、推理和判断．
请在这里输入关键词：
科目：高中生物
生物膜系统在细胞的生命活动中发挥着极其重要的作用．如图1-3表示3种生物膜结构及其所发生的部分生理过程．请回答下列问题：（1）图1表示的生物膜是，该图所示生命活动的生理意义是（2）图2中若与受体蛋白结合的是促甲状腺激素释放激素，那么该生物膜所代表的细胞位于（3）图2若为肝细胞的细胞膜，若与受体结合的激素是胰岛素，则发生在肝细胞内的主要变化是（4）图3中的ATP参与的主要生理过程是，图3的生命活动说明生物膜具有的功能是．
科目：高中生物
如图表示动物、植物细胞二合一亚显微结构模式图（左右同一编号表示同一种细胞器）．（1）若某细胞含有AB两图中各种细胞器，则为细胞．细胞能量的“动力车间”为[]．植物细胞的“养料制造车间”和“能量转换站”是[]．（2）对来自内质网的蛋白质进行加工、分类和包装的“车间”及“发送站”是结构[]．参与该蛋白分泌的细胞结构还有、、．（3）细胞内表面积最大的膜结构是[]．如果B图为大蒜根细胞，则应该没有[]．与动物细胞有丝分裂有关的结构是[]．在两种细胞中功能不同的是[]．（4）A、B两种细胞的区别在于．
科目：高中生物
测得某一植物的果实在一段时间内，释放CO2的量与吸收O2量比值为7：4．下列选项中正确的是（　　）
A、有氧呼吸占优势B、有氧呼吸与无氧呼吸消耗的葡萄糖量相等C、无氧呼吸占优势D、只进行有氧呼吸
科目：高中生物
体内严重缺乏哪种无机离子的患者可能会出现乳酸中毒（　　）
A、Mg2+B、Ca2+C、Fe2+D、Zn2+
科目：高中生物
如图是人体内苯丙氨酸与酪氨酸代谢的部分途径，下列相关叙述正确的是（　　）
A、基因①②③一般不会同时出现在人体内的同一个细胞中B、苯丙酮尿症的患者会因为黑色素不能合成同时患上白化病C、当人体衰老时，因酶②的活性降低而导致头发变白D、基因①②③的功能说明基因通过控制酶的合成从而控制生物的性状
科目：高中生物
水果贮藏保鲜时，降低呼吸的环境条件是（　　）
A、低O2、高CO2B、零上低温C、无O2、高CO2D、零下低温
科目：高中生物
如图为溶酶体的示意图（溶酶体中水解酶最适pH为5.0）．下列分析正确的是（　　）
A、该结构属于生物膜系统的范畴B、H+进入溶酶体的方式与葡萄糖进入红细胞的方式相同C、溶酶体吞噬入侵细胞的病原体过程与膜的流动性无关D、溶酶体破裂后，其内部各种水解酶的活性应升高或不变
科目：高中生物
如图为男性性激素--睾酮（T）的调节机制．注：GnRH（促性腺激素释放激素）、LH（黄体生成素）、FSH（卵泡刺激素）、T（睾酮）（1）图中①②③过程体现了性激素的调节，过程④说明性激素也存在调节．（2）图中各种激素通过体液运输到靶细胞所在位置，并与靶细胞的结合，完成信息传递后，这些激素就被，因而体内需要源源不断地产生激素．（3）有研究表明吸食某些毒品（如吗啡、海洛因、可卡因等）会影响人体性腺功能，于是有研究者对某戒毒所内的吸毒人员进行相关激素的检测并与健康人比较，检测结果均值如表所示．组别平均年龄（岁）吸毒史（年）吸毒量（g/d）LH（mlu/mL）FSH（mlu/mL）T（mlu/mL）健康者（30人）32--4.656.36.51吸毒者（30人）32平均4平均1.51.442.864.08①据表可知，吸毒者在图中会减弱的过程是（填序号）．②为了确定吸毒者T水平低的原因是睾丸受损还是LH和FSH减少，可将体内的量补充到健康者水平，一段时间后测定的含量，与健康者比较即可确定原因．③吸毒者的后代容易出现畸形儿、怪胎，可能的原因是毒品容易引起睾丸中精子形成的过程异常．④调查发现吸毒者容易出现怕冷、寒热交替等症状，说明吸毒使位于下丘脑的受损．
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ELISA试剂盒
实验室仪器/设备
原辅料包材
体外检测试剂
实验方法原理
自发活动是正常动物的生理特征。自发活动的多少往往能反映中枢兴奋或抑制作用状态。镇静催眠药地西泮（安定）等中枢抑制药均可明显减少小鼠的自发活动；而中枢兴奋药咖啡因等则可增加小鼠的自发活动。小鼠自发活动增减的程度与中枢兴奋药或抑制药的作用强度成正比。
试剂、试剂盒
仪器、耗材
一、方法：
取小白鼠2 只，称体重，分别放入两个钟罩内。待小鼠安静后，分别进行腹腔注射，一只1％苯甲酸钠咖啡因溶液150 mg∕Kg，另一只0.5％安定溶液20 mg∕Kg。给药10分钟后，观察两只小鼠的活动，比较有何不同。
二、结果：
小白鼠应尽量选取活泼者，同性。
实验前禁食禁水24 h。
实验最好在20 ℃以上室温下进行，室温过低常影响小白鼠活动。
实验最好在上午做，以为小白鼠的活动通常在中午及下午减少。
观察内容如走动、站立、嗅、理毛、舔、撕咬、平衡失调、竖尾等。
一、根据实验结果分析咖啡因、安定的基本药理作用。
(共1个问题)
谁能提供实验帮助？
谁做这个实验？
谁关注这个实验？
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