检测雌激素类化合物的哺乳动物细胞表达载体的研究--《中国畜牧兽医学会2004学术年会暨第五届全国畜牧兽医青年科技工作者学术研讨会论文集（下册）》2004年
检测雌激素类化合物的哺乳动物细胞表达载体的研究
【摘要】：本文以增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因为报告基因构建了4个启动子不同的表达载体。以这些表达载体瞬时转染MCF-7细胞,报告基因的基础表达与启动子的强度相关。以17β-雌二醇(E2)诱导表达载体瞬时转染的MCF-7细胞,发现在表达载体pERE-TA-EGFP、pERE-TK-EGFP、pERE-SV-EGFP转染的MCF-7细胞,E2能诱导2倍以上的报告基因的表达。这表明在这些瞬时表达系统中报告基因的表达是雌激素依赖性的,因此这些表达载体可用于稳定转染,以建立稳定表达分析系统。
【作者单位】：
【关键词】：
【分类号】：S859.8【正文快照】：
雌激素类化合物是指所有具有雌激素活性的化合物,是重要的环境内分泌干扰物(endocinedisruPting comPounds,Eocs),其种类多,结构多种多样。环境中的雌激素EDcs通过污染水、土壤、空气而进入生物链,在生物链富集、放大,通过饲料、饮水、空气等途径在畜禽体内富集、放大,危害家
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基于基因枪技术的拟南芥瞬时表达转化方法的建立
第38卷第5期
2008年9月河南大学学报(自然科学版)JournalofHenanUniversity(NaturalScience)Vol.38?No.5Sep.2008
基于基因枪技术的拟南芥瞬时表达转化方法的建立
张小莉,王鹏程,宋纯鹏1,211*
(1.河南大学生命科学学院植物逆境生物学重点实验室,河南开封.河南省中医学院,郑州450008)
摘?要:以拟南芥叶片为材料,分析不同轰击参数对基因枪转化后的叶片中LUC表达效率的影响.结果表明,-
0.09MPa的真空度、4.5MPa可裂膜压力以及5cm的载体膜与叶片距离相结合能够获得最佳的转化效率.同时,研究ABA对基因枪转化后的叶片中LUC基因表达的影响,结果显示转化后的叶片具有正常的生理活性,ABA处理能够较好地诱导LUC基因的表达.
关键词:基因枪;瞬时表达分析;脱落酸;基因表达;拟南芥
中图分类号:Q78???文献标志码:A文章编号:08)05-0506-04
SetupofTransientExpressionAssaySystemBasedon
ParticleBombardmentinArabidopsis
ZHANGXiao?li1,2,WANGPeng?cheng1,SONGChun?peng1*
(1.TheKeyLaboratoryofPlantStressBiology,CollegeofLifeScience,HenanUniversity,HenanKaifeng
475004,C?2.HenanUniversityofTraditionalChineseMedicine,Zhengzhou450008,China)
Abstract:Inthisresearch,theauthorsdetectedtheluciferaseactivityinparticlebombardmenttransformedArabidopsisleaveswithdifferentbombardparameters,andfoundthatwith-0.09MPavacuum,4.5MPapressureand5cmtargetdistancecouldobtainhighesttransformrate.TheauthorsalsocomparedtheLUCactivityincontrolandABAtreatmentdrivedbyfourrepeatedABREelements.TheresultsindicatedthatABAtreatmentenhancedLUCactivityobviously,theseresultssuggestedthattransformedleavesmaintainnormalbiologicalactivityandaresuitablefortransientexpressionassay.
Keywords:tranArabidopsis
瞬时表达分析(transientexpressionassay)是一种快速的基因-蛋白质研究方法[1],通过在细胞内建立暂时高效的表达系统,获得目的基因或蛋白的短暂的高水平表达.与稳定表达相比,瞬时表达具有时间短,不需要整合到染色体上等优势,已经成为植物功能基因组研究的重要技术手段之一,在研究启动子活性、顺式作用元件(cis?element)的转录活性、转录调控蛋白功能等方面起着重要作用[2-4].基因枪转化是目前利用植物材料进行瞬时表达分析的主要转化技术[5,6],作者以模式植物拟南芥的叶片为材料,以LUC荧光蛋白(luciferase)的活性作为监测指标,研究不同基因枪轰击条件对LUC基因转录活性的影响,为优化拟南芥叶片基因枪转化系统,进而分析研究相关蛋白的功能提供理论参考.
1?材料与方法
1.1?实验材料
拟南芥(Arabidopsisthaliana)野生型种子点种于MS固体培养基(3%蔗糖、0.6%琼脂)上,4?春花3d后放于材料室进行培养.生长的光暗周期为12h 12h,温度(21!2)?,光照强度100~150?mol?m-2?s,相对湿度70%左右.培养约10d后,将幼苗移至营养土中生长.-1
?收稿日期:
?基金项目:国家自然科学基金资助项目()
?作者简介:张小莉(1963-),女,副教授,在读博士,从事植物细胞和分子生物学研究.
贡献者：onewzz
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一种植物表达载体的构建及其在金柑上的瞬时表达,瞬时表达载体,过表达载体构建,基因表达载体的构建,表达载体构建,真核表达载体的构建,基因过表达载体构建,真核表达载体构建,植物表达载体的构建,原核表达载体构建
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