质粒提取与酶切电泳实验报告_百度文库
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质粒提取与酶切电泳实验报告
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你可能喜欢酶切后的质粒电泳应该是什么样子的(酶切,质粒电泳,质粒,双酶切) - DNA技术 - 生物秀
标题: 酶切后的质粒电泳应该是什么样子的(酶切,质粒电泳,质粒,双酶切)
摘要: [酶切后的质粒电泳应该是什么样子的(酶切,质粒电泳,质粒,双酶切)] 拿了老师07年保存的pcDNA3 1(+)菌种，铺皿、挑克隆摇菌抽质粒等一系列过程后，为验证是否可以用以后实验用到的酶切得开，选用了Nhe1,Kpn1(均为宝生物的）两种酶分别单，双酶切。体系均为20ul：双酶切:质粒(0 5ug) M Buffer Kpn1 Nhe1 ddH2O样本1 1ul 4ul 1ul 1ul 13ul样本2 1 3ul 4ul 1ul 1ul 12 7ul单酶切：样本1 关键词:[酶切 双酶切 质粒 质粒电泳 电泳 单酶切 菌种]……
拿了老师07年保存的pcDNA3.1(+)菌种，铺皿、挑克隆摇菌抽质粒等一系列过程后，为验证是否可以用以后实验用到的酶切得开，选用了Nhe1,Kpn1(均为宝的）两种酶分别单，双酶切。体系均为20ul：双酶切:质粒(0.5ug) M Buffer Kpn1 Nhe1 ddH2O样本1 1ul 4ul 1ul 1ul 13ul样本2 1.3ul 4ul 1ul 1ul 12.7ul单酶切：样本1 1ul 2ul 1ul -- 16ul 1ul 2ul -- 1ul 16ul样本2 1.3ul 2ul 1ul --l 15.7ul样本2 1.3ul 2ul -- 1ul 15.7ul37度，1小时后，加2ulloading buffer电泳，电泳图片见附件，共10个孔，从左起一次为：1.wide range500-15000(takara) 2-5为样本1的，2 双酶切 3未酶切的质粒 4Kpn单切 5Nhe1 6-9为样本2 6未酶切的质粒 7 双酶切 8Kpn单切 9Nhe1 10 1kb ladder(NEB)不知何原因marker跑不开，未酶切的质粒应该是环状的，有以下疑问1.我的3,6号对不？2.单双酶切后质粒应该是什么样的，我的单双酶切对照结果能说明什么问题？3.最后这个pc3.1(+)能否用?请各位老师指点解答啊，吾不盛感激！先谢谢了！
回复电泳跑得时间太短，marker都没跑出加样孔，100V，30min试试。未酶切环形质粒应该比酶切的质粒跑得快。单酶切和双酶切他们的大小差不多，应该在同一水平线。重新跑次电泳看看吧。回复电泳跑得时间太短，marker都没跑出加样孔，100V，30min试试。未酶切环形质粒应该比酶切的质粒跑得快。单酶切和双酶切他们的大小差不多，应该在同一水平线。重新跑次电泳看看吧。 sod，谢谢！可能是我太急了，电泳跑了20分钟就去做别的事了，我明天一早再跑下看看。有2个疑问还请你解答一下：1.你讲，未酶切环形质粒应该比酶切的质粒跑得快，请解释下原因。2.我的未酶切的质粒与酶切后的大约都在同一水平线上，是因为什么，因为未切开吗？ 先谢了回复今天又重新跑了电泳，除marker跑开了，其余没什么变化回复今天又做了有用之前的两个酶重新切了pc3.1(+)和pGEMT /144bp,就是T载体中有我的目的片段，是144bp,如图由左至右为1kb DNAladder，pcDNA3.1(+) 1，pcDNA3.1(+) 2，pGEMT /144bp 1，pGEMT /144bp 2，wide range500-15000,144bp属于小片段吗，如果切下来可以通过点用检测得到不？非常需要指点~如果酶切后要胶回收的话，酶切需要大体系如100或150ul,是质粒，酶，反应液的量加倍不，还是按20ul体系加，只是用水补足100或150ul呢？回复最后的图是酶切后的？怎么看不到你的目的片段？还有为什么喜欢用DNAladder，5000Marker就够用了。用50ul体系按说明书（我用的NEB）多酶切几管，之后胶回收。回复最后的图是酶切后的？怎么看不到你的目的片段？还有为什么喜欢用DNAladder，5000Marker就够用了。用50ul体系按说明书（我用的NEB）多酶切几管，之后胶回收。是酶切后的，没有切开吧?我还没找到原因，难道要过夜？回复是酶切后的，没有切开吧?我还没找到原因，难道要过夜？不知道你用哪个公司的酶，我一直用NEB的，酶切2小时，37度，注意质粒量不要加太多，20ul体系加0.5-1ug，50ul体系加1-1.5ug。回复不知道你用哪个公司的酶，我一直用NEB的，酶切2小时，37度，注意质粒量不要加太多，20ul体系加0.5-1ug，50ul体系加1-1.5ug。NEB的没有共同的反应液，买的takara的酶，切1,3小时都试过了，我都是加0.5ug质粒，只能过夜试试了。回复NEB的没有共同的反应液，买的takara的酶，切1,3小时都试过了，我都是加0.5ug质粒，只能过夜试试了。Double Digest Recommendation(s) for KpnI-HF? + NheI-HF?:Digest in NEBuffer 4 + BSA at 37°C. 高保真内切酶都是共用Buffer4,效果很不错，如果过夜不行，可以买个NEB的试试。回复NEB的没有共同的反应液，买的takara的酶，切1,3小时都试过了，我都是加0.5ug质粒，只能过夜试试了。meixue1024 您好！NEB现在有高保真的内切酶，NheI-HF和KpnI-HF ，都是用Buffer4的，所有的高保真内切酶都统一了Buffer，均为Buffer4。您可以选择，建议您做双酶切时，根据NEB网站上的免费软件Double Digest Finder给出的条件进行实验，链接为：/nebecomm/DoubleDigestCalculator.asp回复NEB, thanks.当时选酶就从实验室里找出一本你们公司的产品书翻了一下，没看到啊，什么时候有的还不知道呢。回复NEB, thanks.当时选酶就从实验室里找出一本你们公司的产品书翻了一下，没看到啊，什么时候有的还不知道呢。meixue1024 您好！请您方便的话，告诉我您的收件人姓名地址和邮编，我这边安排相关人员给您寄一本最新版目录，HF的内切酶出来有很长时间了，您拿的目录肯定是比较早的，我这边给您免费寄一本，以便您后续使用方法。
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电话：021-目标片段和质粒酶切后连接之前需要胶回收吗_百度知道
目标片段和质粒酶切后连接之前需要胶回收吗
提问者采纳
可以选择吸附柱过滤除掉被切掉的小分子片段，是否酶切完全，会干扰目的片段与载体连接，胶回收可以避免收集不完全酶切的质粒片段（包括完整的环状质粒和线性质粒）等等需要。如果不想用胶回收方法纯化，被切掉的部分同样带有粘性末端（因为粘性末端的碱基互补）。胶回收纯化的好处是直观的判断酶切实验结果是否理想
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