岛津LC-10AT型HPLC注意事项
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一、流动相1、流动相应选用色谱纯试剂、高纯水或双蒸水，酸碱液及缓冲液需经过滤后使用，过滤时注意区分水系膜和油系膜的使用范围；2、水相流动相需经常更换（一般不超过2天），防止长菌变质；3、使用双泵时，A、B、C、D四相中，若所用流动相中有含盐流动相，则A、D（进液口位于混合器下方）…
一、流动相
1、流动相应选用色谱纯试剂、高纯水或双蒸水，酸碱液及缓冲液需经过滤后使用，过滤时注意区分水系膜和油系膜的使用范围；
2、水相流动相需经常更换（一般不超过2天），防止长菌变质；
3、使用双泵时，A、B、C、D四相中，若所用流动相中有含盐流动相，则A、D（进液口位于混合器下方）放置含盐流动相，B、C（进液口位于混合器上方）放置不含盐流动相；A、B、C、D四个储液器中其中一个为棕色瓶，用于存放水相流动相。
1、采用过滤或离心方法处理样品，确保样品中不含固体颗粒；
2、用流动相或比流动相弱（若为反相柱，则极性比流动相大；若为正相柱，则极性比流动相小）的溶剂制备样品溶液，尽量用流动相制备样品液；
3、手动进样时，进样量尽量小，使用定量管定量时，进样体积应为定量管的3～5倍；
三、色谱柱
1、使用前仔细阅读色谱柱附带的说明书，注意适用范围，如pH值范围、流动相类型等；
2、使用符合要求的流动相；
3、使用保护柱；
4、如所用流动相为含盐流动相，反相色谱柱使用后，先用水或低浓度甲醇水（如5％甲醇水溶液），再用甲醇冲洗。
四、操作过程
1、开机操作：
（1）、打开电源，用Harb相连接时，注意Harb电源，打开计算机，打开BootpServer（一般启动时已打开）；
（2）、自上而下打开个组件电源，BootpServer里显示有信号时（有六行字符），打开工作站（先打开Online）；
（3）、打开冲洗泵头的10％异丙醇溶液的开关（需用针捅抽），控制流量大小，以能流出的最小流量为准；
（4）、注意各流动相所剩溶液的容积设定，若设定的容积低于最低限会自动停泵，注意洗泵溶液的体积，及时加液；
（5）、使用过程中要经常观察工作状态，及时正确处理各种突发事件。
2、先以所用流动相冲洗系统一定时间（如所用流动相为含盐流动相，必须先用水冲洗20分钟以上再换上含盐流动相），正式进样分析前30min左右开启D灯或W灯，以延长灯的使用寿命；
3、建立色谱操作方法，注意保存为自己命名的Method，勿覆盖或删除他人的方法及实验结果；
4、使用手动进样器进样时，在进样前和进样后都需用洗针液洗净进样针筒，洗针液一般选择与样品液一致的溶剂，进样前必须用样品液清洗进样针筒3遍以上，并排除针筒中的气泡；
5、溶剂瓶中的沙芯过滤头容易破碎，在更换流动相时注意保护，当发现过滤头变脏或长菌时，不可用超声洗涤，可用5%稀硝酸溶液浸泡后再洗涤；
6、实验结束后，一般先用水或低浓度甲醇水溶液冲洗整个管路30分钟以上，再用甲醇冲洗。冲洗过程中关闭D灯、W灯；
7、关机时，先关闭泵、检测器等，再关闭工作站，然后关机，最后自下而上关闭色谱仪各组件，关闭洗泵溶液的开关；
8、使用者须认真履行使用登记制度，出现问题及时向老师报告，不要擅自拆卸仪器。未经操作培训，不得擅自使用仪器。
自己总结的12条 注意事项
以下12条注意事项是自己在安装和使用液相色谱仪中的经验得出的，可能存在某些片面性，如有不当之处请多提宝贵建议。
1、流动相必须用HPLC级的，使用前过滤除去其中的颗粒性杂质和其他物质(使用0.45um或更细的膜过滤)。
2、流动相过滤后要用超声波脱气，脱气后应该恢复到室温后使用。
3、不能用纯乙腈作为流动相，这样会使单向阀粘住而导致泵不进液。
4、使用缓冲溶液时，做完样品后应立即用去离子水冲洗管路及柱子一小时，然后用甲醇(或甲醇水溶液)冲洗40分钟以上，以充分洗去离子。对于柱塞杆外部，做完样品后也必须用去离子水冲洗20ml以上。
5.长时间不用仪器，应该将柱子取下用堵头封好保存，注意不能用纯水保存柱子，而应该用有机相(如甲醇等)，因为纯水易长霉。
6.每次做完样品后应该用溶解样品的溶剂(如甲醇)等清洗进样器。
7.C18柱绝对不能进蛋白样品，血样、样品。
8.堵塞导致压力太大，按预柱&混合器中的过滤器&管路过滤器&单向阀检查并清洗。
清洗方法：①以异丙醇作溶剂冲洗；②放在异丙醇中间用；③用10％稀硝酸清洗。
9.气泡会致使压力不稳，重现性差，所以在使用过程中要尽量避免产生气泡。
10.如果进液管内不进液体时，要使用注射器吸液：通常在输液前要进行流动相的清洗。11.要注意柱子的PH值范围，不得注射强酸强碱的样品，特别是碱性样品。
12.更换流动相时应该先将吸滤头部分放入中边振动边清洗，然后插入新的流动相中。更换无互溶性的流动相时要用异丙醇过渡一下。
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流动相走空了，色谱柱进空气了怎么办
昨天流动相走空了大约4个小时，是HPX-87H测糖的柱子，现在泵中的空气已经抽出来了，接上色谱柱的进口端，柱压一直为零，走的0.005M的硫酸流动相。求各位指导下现在该怎么办？
换上甲醇水用低流速大概0.3-0.5ml/min慢慢走，把里面的气泡赶出来 色谱柱是不会进气泡的，气泡应该都在管路上。大流速反冲，或者不接色谱柱用异丙醇冲洗。 理论上 泵是无法将气泡泵入色谱柱的 所以 不用太担心 换上流动相后Prime完 低流速多冲会儿 工程师曾经说过，如果跑空的话，有机相是进不去，纯水用很低的速度慢慢冲，我以前也干过这种事情，0.1ml/min开始走，逐步升高流速，估计两个小时，就能搞定 试下低醇冲洗吧，例如10%的甲醇。&& 查看话题
求助：岛津LC-10AT液相色谱的使用问题
最近刚刚接触岛津LC-10AT液相色谱，有很多问题不明白呀，有个师姐懂，但是她就是不告诉我，郁闷！希望大家能给我建议建议：
1：A泵是主泵，B泵是从泵，那我用流动相冲洗柱子的时候（一瓶流动相是水，另一瓶是甲醇），是不是只要把A，B泵都打开，按下pump键，然后两个流速都设为一样就可以了吗？
2：梯度洗脱时，时间程序和浓度也总是设置不好，郁闷呀！
呵呵，找本说明书看看吧，关于10a泵的说明书就可以 冲柱子的时候，可以先用水冲再换甲醇冲，按func可以设置流速。操作软件上可以设置梯度。 关于你的问题是这样，首先你的工作站是什么？岛津原装工作站还是配制国产工作站。这两个是不一致的。
如果楼主还有什么疑问，可以和我联系。请教，柱子进了气泡如何解决？
12:33:54&&&来源：&&&评论：&&
请教，柱子进了气泡如何解决？我的分离手性氨基酸的柱子进了气泡，怎么办？会对柱子有损伤么？谢谢 关键词:[柱子 气泡 氨基酸 手性]…
我的分离手性的柱子进了气泡，怎么办？会对柱子有损伤么？谢谢
在柱子允许的范围内，提高流速试试。也可以先将柱子后的管道出口采取堵一下松开，再堵一下，再松开，如此多次，应该可以。
你唯一可行的方法就是用流动相冲洗，低流速慢慢冲，同时将柱子的出口向上（把柱子竖起）这样就会把气泡从上面赶出来，冲洗的时间一定要长。高流速会使柱压力加大，你要小心！！！对柱子的损害不是很大！！！
前提：不论使用什么类型的柱子，首先必须对其填料的性能有基本了解。如该柱适用什么样的溶剂，什么类型的样品，流速及耐压范围等，一般柱箱内均有详细的说明书，使用柱子前，务必要仔细阅读，以保证正确使用这些柱子。例如，样品的予处理除去样品中的强极性或与柱填料产生不可逆吸附的杂质、使用0.45μm的过滤除去微粒杂质。再如，选择流动相也有讲究的，结合反向色谱的例子稍稍说点：流动相对样品的溶解能力，保证样品组分不会沉淀在柱中。流动相具有一定惰性，与样品不产生化学反应。流动相的黏度要尽量小，以便在使用较长的时能得到好的分离效果；同时降低柱压降，延长液体泵的使用寿命(可运用提高温度的方法降低流动相的黏度)。流动相的物化性质要与使用的检测器相适应。如使用UV检测器，最好使用对紫外吸收较低的溶剂配制。流动相沸点不要太低，否则容易产生气泡，导致实验无法进行。在流动相配制好后，一定要进行脱气等。因此很多的时候不经意就产生了气泡！总之，气泡气柱效低，降低了理论塔板数，送样压力减少甚至无法控制，分离效果变差，有时出现双峰。如果是凝胶颗粒，很可能干柱并使介质破裂！我能想到的解决方法：1 重新装柱，如果是自制的，可以把柱子一端封死，加上BUFFER，搅匀，沉淀后待用！2 适当提高流速，一般都没有太大的作用，如果是买的封闭较好的柱子，正反方向交替冲一下。3 如果是反相色谱可以用脱气后甲醇冲洗：先用水洗，再用甲醇洗。若用过：必须先水洗，再甲醇洗。4 最重要的是看你的柱子的特性，看是否提供有TROUBLESHOOTING！平时可以去http://www.sepu.net/ 上多看看！
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岛津LC-10AT型高效液相色谱系统的使用和维护
核心提示：1．目的规范岛津LC-10AT型高效液相色谱系统的使用和维护。2．范围本规程适用于岛津LC-10AT型高效液相色谱系统的使用和维护。3．职
规范岛津LC-10AT型高效液相色谱系统的使用和维护。
本规程适用于岛津LC-10AT型高效液相色谱系统的使用和维护。
质检室仪器分析员负责岛津LC-10AT型高效液相色谱系统的日常使用和维护。
4.1 系统组成：本系统由2个LC-10ATvp溶剂输送泵（分主/A泵和副/B泵）、Rheodyne 7725i手动进样阀、SPD-10Avp紫外-可见检测器、SCL-10AVP系统控制器、CLASS-VP（Ver. 6.1）工作站和IBM台式电脑等组成。
4.2.1使用前应根据待检样品的检验方法准备所需的流动相，用合适的0.45&m滤膜过滤，超声脱气20min。
4.2.2 根据待检样品的需要更换合适的色谱柱（柱进出口位置应与流动相流向一致）和定量环。
4.2.3 配制样品和标准溶液（也可在平衡系统时配制），用合适的0.45&m滤膜过滤。
4.2.4 检查仪器各部件的电源线、数据线和输液管道是否连接正常。
4.3.1接通电源，依次开启不间断电源、B泵、A泵、检测器、系统控制器，待泵和检测器自检结束后，打开电脑显示器、主机。
4.3.2启动CLASS-VP工作站
4.3.2.1确认仪器、系统控制器启动后，打开计算机电源，并从Windows的任务栏中选择Start & Programs & Chromatography & CLASS-VP以打开CLASS-VP菜单窗口。（可以通过桌面上的快捷方式，迅速打开CLASS-VP主菜单）
4.3.2.2 在Main Menu 窗口中双击Instrument图标。
4.3.2.3 输入用户名和口令，以登录CLASS-VP。缺省情况下，已经用户名和口令分别为&system&和&2001&。
4.3.2.4 当SCL-10Avp发出蜂鸣声后，说明已建立与计算机之间的连接，Instrument窗口打开。
4.3.2.5 启动色谱图监视器
4.3.2.5.1 从Windows任务栏中选择Program& Chromatography & Chromatogram Monitor 以打开 Chromatogram Monitor 窗口。
4.3.2.5.2 根据需要设置受监视项的类型和格式。
4.3.2.6 启动脱机处理
4.3.2.6.1 在 Main Menu 窗口中双击 Offline Processing 图标。
4.3.2.6.2 双击为数据采集而设置的仪器名称，以打开仪器进行脱机处理。
4.4 CLASS-VP初始系统设置（设置方法缺省参数）
4.4.1 单击&New&按钮，并接着单击 New Method 即可初始化方法参数。
4.4.2 从Option 选项卡的Method菜单中选择命令，并在对话框中更改每条命令的参数，以选择常用的选项。
4.4.3 选择File & Method & Save as Default 即可将在此处设置的选项保存成缺省参数。
4.5 设置分析参数
4.5.1 设置LC参数
4.5.1.1 设置新的分析参数时，请从通过单击&New&按钮打开的列表中选择New Method，则将加载缺省方法参数，且方法文件名&Untitled.met&将显示在LC Setup Assistant窗口中，通过单击Open按钮即可打开现有的方法文件。
4.5.1.2 通过在LC Setup Assistant窗口中单击泵和检测器的图标来配置LC参数。使用时钟图标输入时间程序命令。
4.5.1.3 选择 File & Method & Save as 并输入方法名称。
4.5.2 将方法下载到SCL-10Avp：完成创建方法之后，单击下面的图标即可将该方法下载到SCL-10Avp上。下载完成时，出现一个消息窗口，请单击OK。
4.5.3 启动仪器控制：激活SCL-10Avp，将液体流量调整到已下载的方法参数。当所有组分稳定时，出现&Ready&指示灯，且状态栏变为绿色。
4.5.4 设置方法（斜率）：
4.5.4.1 请在检测器的基线稳定之后选择Control & Preview Run或单击工具栏上的&Preview&按钮。
4.5.4.2 单击数据图形之后，再在Integration工具栏上单击&SLOPE&按钮，即可从基线测量斜率的参考值。
4.5.4.3 单击SLOPE对话框中的Add to table按钮，即可在Method & Integration Events 表中记录此设置。
4.5.5 设置方法（自定义报告）：单击工具栏上的&Report&按钮，打开Method Custom Report窗口；单击&Open&按钮，然后选择Open Report Temlate 打开一个模板文件。
4.5.6 保存已更改的方法：要当前名称保存方法文件，亦即覆盖原来的名称，请从菜单中选择File & Method & Save 命令，或单击&Save&按钮，然后单击下拉菜单上的Save Method。4.6 平衡系统
4.6.1系统的操作
4.6.1.1基线检查
4.6.1.2 单击LC Setup Assistant 窗口中 &Baseline Check&按钮。
4.6.1.3 指定测量噪音和漂移的起始时间和结束时间，对于Noise 的Threshold值，请输入期望的满刻度值的大约1/100；对于Drift的Threshold值，请输入1/10。单击Start开始测量。测量结束后，测得的噪音值和漂移值将出现在Status区域里。
4.6.1.4 采集数据之前要检查基线，如果基线检查检查合格，即可立即开始采集。如果Export on Fail 对话框已经选中，并且在指定的Maximum时间内重复进行基线检查仍然失败，则不会进行数据采集。
4.6.1.5 启动和关闭单击LC Setup Assistant 窗口中的Startup/Shut Down 按钮。
4.6.1.5.1设置启动条件
4.6.1.5.1.1 在Startup窗口中指定启动的Date and Time，当达到指定的日期和时间时即可下载指定的方法文件参数。
4.6.1.5.1.2 如果此处未指明方法文件，则使用最近使用的方法文件。如果需要，请在Offline Processing窗口中创建一个用于启动的方法文件，并在此处指定它。
4.6.1.5.2 设置关闭条件
4.6.1.5.2.1在Offline Processing 模式下创建一个用于关闭的方法。通常情况下需要将泵的流速设置到低（或为零），并且需要关闭检测器的灯管，等等。用一个新的文件名将此方法保存到磁盘上。
4.6.1.5.2.2 单击Shut Down窗口中&Open&按钮以选择关闭方法文件。另外，如果需要，也可选中或取消选中&Sample Cooler OFF&或&Degasser OFF After Cool Down&选项。
4.6.2 等度洗脱方式
4.6.2.1 按A泵的[pump]键，A、B泵将同时启动，pump指示灯亮。用检验方法规定的流动相冲洗系统，一般最少需6倍柱体积的流动相。
4.6.2.2 检查各管路连接处是否漏液，如漏液应予以排除。
4.6.2.3 观察泵控制屏幕上的压力值，压力波动应不超过1MPa。如超过则可初步判断为柱前管路仍有气泡，按4.5.6操作。
4.6.2.4 观察基线变化。如果冲洗至基线漂移&0.01mV/min，噪声为&0.001mV时，可认为系统已达到平衡状态，可以进样。
4.6.3 梯度洗脱方式
4.6.3.1 以检验方法规定的梯度初始条件，按4.6.2项下方法平衡系统。
4.6.3.2 在进样前运行1~2次空白梯度。方法：按A泵的[run]键，prog.run指示灯亮，梯度程序运行；程序停止时，prog.run指示灯灭。
4.7 进样、采集运行
4.7.1 进样
4.7.1.1进样前按检测器[zero]键调零，按软件中 [零点校正] 按钮校正基线零点，再按一下 [查看基线] 按钮使其弹起。
4.7.1.2用试样溶液清洗注射器，并排除气泡后抽取适量。
4.7.2采集运行
4.7.2.1从菜单栏中选择 Control & Show Tray。或者，单击LC Setup Assistant窗口中的&Single Run&按钮或工具栏上的Single Run按钮。指定所需的项并单击Start按钮。
4.7.2.2 记录自动启动和关闭：单击LC Setup Assistant窗口中的Start/Shut Down按钮。在Start/Shut Down对话框中单击需要记录的Startup、Shut Down和 Startup/Shut Down中的任一按钮并确认或更改设置。单击Submit按钮进入待机对话框，该对话框停留在屏幕上等候执行设置。
4.7.2.3终止采集
4.7.2.3.1 延长运行时间：选择Control & Extend Run并输入添加到运行结束的时间值。要缩短采集时间，请指定一个负值。（对当前采集有效）
4.7.2.3.2 紧急停机
4.7.2.3.2.1 采集过程中，单击工具栏上的&Stop Run&按钮。接着就会出现一条消息，询问您是否&Abort the current run&,如果单击Yes，当前的数据采集就会终止。
4.7.2.3.2.2 如果在随后出现的消息上单击Yes, 剩余的采集就不会再运行，序列就会终止。如果单击No, 剩余的采集就会开始运行。
4.8更换流动相并排气泡
4.8.1 将A/B管路的吸滤器放入装有准备好的流动相的储液瓶中；
4.8.2 逆时针转动A/B泵的排液阀180&，打开排液阀；
4.8.3 按A/B泵的[purge]键，pump指示灯亮，泵大约以9.9ml/min的流速冲洗，3min（可设定）后自动停止；
4.8.4 将排液阀顺时针旋转到底，关闭排液阀。
4.8.5 如管路中仍有气泡，则重复以上操作直至气泡排尽。
4.8.6 如按以上方法不能排尽气泡，从柱入口处拆下连接管，放入废液瓶中，设流速为5ml/min，按[pump]键，冲洗3min后再按[pump]键停泵，重新接上柱并将流速重设为规定值。
4.9 清洗系统和关机
4.9.1 数据采集完毕后，关闭检测器，继续以工作流动相冲洗10min后，换水冲洗。
4.9.2 清洗进样阀
4.9.2.1 用启动注射器吸10ml超纯水；
4.9.2.2 将注射针导入口冲洗头（Rheodyne部件号）连接到注射器出口上（不要针），并将它们一起接到进样口上；
4.9.2.3 使进样阀保持在Inject位置，慢慢将水推入，水将通过注射针导入口、引导管、注射针导入管和注射针密封圈，由样品溢出管排出。
4.9.3 清洗柱
4.9.3.1 C18柱先用超纯水以1ml/min冲洗40min以上，再用甲醇或乙腈冲洗20min。
4.9.3.2 Protein PAK60柱先用超纯水冲洗90min以上，再用甲醇或乙腈冲洗40min。
4.9.4 用水冲洗柱后，分别用20ml超纯水冲洗柱塞杆外部和法兰盘上小孔。
4.9.5 清洗完成后，先将流速降到0，再依次关闭泵、脱气机、UPS，断开电源。
4.9.6 填写使用记录。
编辑：songjiajie2010}