土壤可培养细菌DNA的提取及RAPD条件的优化--《微生物学通报》2003年05期
土壤可培养细菌DNA的提取及RAPD条件的优化
【摘要】：以改进的CTAB 溶菌酶 蛋白酶K裂解法抽提土壤可培养细菌总DNA ,直接进行随机扩增多态DNA (RAPD)分析。分别测试了不同浓度镁离子、dNTP、模板DNA、引物、DNA聚合酶及牛血清白蛋白对反应结果的影响 ,通过各因子的组合研究 ,确定了土壤可培养细菌遗传多样性分析的稳定的RAPD反应体系
【作者单位】：
【关键词】：
【基金】：
【分类号】：S154.3【正文快照】：
土壤中含有许多微生物 ,包括细菌、真菌、放线菌与原生动物等 ,其中细菌是土壤生物的主要类群 ,个体小 ,数量多 ,繁殖快 ,在物质循环中起着关键作用。随机扩增多态DNA (RandomAmplifiedPolymorphicDNA ,RAPD)分析是建立在PCR反应基础上的一种新的分子生物学技术 ,由于RAPD技
欢迎：、、)
支持CAJ、PDF文件格式，仅支持PDF格式
【引证文献】
中国期刊全文数据库
李钧敏;金则新;张崇邦;;[J];浙江大学学报(理学版);2006年06期
赵喜华,张乐华,王曼莹;[J];生物技术;2005年05期
中国博士学位论文全文数据库
张玉玲;[D];吉林大学;2006年
黄绍辉;[D];南京林业大学;2007年
中国硕士学位论文全文数据库
卜元卿;[D];南京农业大学;2004年
刘会明;[D];四川大学;2005年
徐大勇;[D];南京农业大学;2005年
林梅;[D];福建农林大学;2006年
陈红宇;[D];吉林农业大学;2007年
【参考文献】
中国期刊全文数据库
张锡元,杨建琪,张德春,邓凤姣,余来宁,方耀林;[J];生物化学与生物物理进展;1999年05期
【共引文献】
中国期刊全文数据库
张继平,贺顺连,周孟娇,郭金彪,张绮琼;[J];水产科学;2004年09期
张德春,余来宁,方耀林;[J];淡水渔业;2004年04期
郑汗式,刘良国,易祖盛;[J];广州大学学报(自然科学版);2003年06期
张德春;[J];湖北三峡学院学报;2000年02期
贺顺连,刘学文,郭照良,金宏,张继平;[J];湖南农业大学学报(自然科学版);2004年02期
李钧敏;金则新;张崇邦;;[J];浙江大学学报(理学版);2006年06期
黄明敏,陈金辉,郑康,林凯东,罗琛;[J];科学技术与工程;2004年02期
朱必凤;邹佩贞;钟良明;刘主;彭凌;陈德学;;[J];南昌大学学报(理科版);2006年06期
贾建丽,李广贺,张旭,卢晓霞,戴冬娟,钟毅;[J];清华大学学报(自然科学版);2005年09期
刘会明,邱成书,顾继锐,伍翠芳,吴江,谢显连,徐恒;[J];四川大学学报(自然科学版);2004年06期
中国博士学位论文全文数据库
袁飞;[D];南京农业大学;2004年
龙建友;[D];西北农林科技大学;2006年
中国硕士学位论文全文数据库
杨受保;[D];安徽农业大学;2002年
杨慧荣;[D];华中农业大学;2003年
王晓红;[D];辽宁师范大学;2003年
公维华;[D];山东农业大学;2004年
陈省平;[D];中国海洋大学;2004年
刘会明;[D];四川大学;2005年
苏振宏;[D];西北师范大学;2006年
田智;[D];南华大学;2007年
范武江;[D];湖南农业大学;2007年
丁洁;[D];四川大学;2007年
【同被引文献】
中国期刊全文数据库
沈显生;[J];安徽大学学报(自然科学版);1995年04期
杨建海,任大明;[J];安徽农业科学;2005年08期
姚连芳;刘会超;李宏瀛;;[J];安徽农业科学;2005年11期
赵荣艳;杨靖华;蒋士君;;[J];安徽农业科学;2006年22期
肖华,周荣丰;[J];北方环境;2005年01期
叶磊,何立千,高天洲,李丽云;[J];北京联合大学学报;2004年01期
郝朝运,郭卫东,刘鹏;[J];北京林业大学学报;2005年02期
张丽萍,张贵云;[J];北京农业科学;2000年04期
张玉玲,张兰英,王显胜,王晓晖,高松;[J];吉林大学学报(地球科学版);2005年03期
吴德礼,朱申红;[J];城市环境与城市生态;2002年04期
中国博士学位论文全文数据库
刘占良;[D];河北农业大学;2003年
中国硕士学位论文全文数据库
曹广祥;[D];南京农业大学;2003年
【二级引证文献】
中国硕士学位论文全文数据库
钟凤林;[D];福建农林大学;2006年
周佳欣;[D];吉林大学;2007年
仇有文;[D];西南交通大学;2007年
马辉;[D];新疆农业大学;2007年
【二级参考文献】
中国期刊全文数据库
刘乐和,吴国犀,曹维孝,王志玲;[J];水生生物学报;1986年04期
【相似文献】
中国期刊全文数据库
赵庆节;;[J];安徽农业科学;2011年19期
;[J];大众标准化;2002年08期
李湘;余晶晶;李冰;呼世斌;曹心德;戴家银;;[J];分析试验室;2011年08期
;[J];中国家禽;2011年13期
刘瑞娟;柴涛;;[J];安徽农业科学;2011年18期
周雨凡;王蓟花;刘志龙;王琦;贺伟;周立刚;;[J];天然产物研究与开发;2011年04期
;[J];;年期
;[J];;年期
;[J];;年期
;[J];;年期
中国重要会议论文全文数据库
何金明;肖艳辉;张振明;王羽梅;;[A];第二届热带亚热带植物资源的遗传多样性与基因发掘利用研讨会论文集[C];2006年
中国硕士学位论文全文数据库
高聚琼;[D];吉林大学;2006年
&快捷付款方式
&订购知网充值卡
400-819-9993
800-810-6613
《中国学术期刊（光盘版）》电子杂志社有限公司
同方知网数字出版技术股份有限公司
地址：北京清华大学 84-48信箱 知识超市公司
出版物经营许可证 新出发京批字第直0595号
订购热线：400-819-82499
服务热线：800-810-91813
在线咨询：
传真：010-
京公网安备74号看看我的DNA提取及PCR结果有什么问题 - 生物科学 - 小木虫 - 学术 科研 第一站
&& 查看话题
看看我的DNA提取及PCR结果有什么问题
我是提取物内生菌DNA，然后进行16srDNA扩增的，提取效果和PCR结果见下图
提取效果检测
marker 是 λDNA/Hind Ⅲ
PCR结果检测，引物27f/907r，marker DL2000
看看是什么问题啊 ，谢谢啦
关键是不知道你想问什么？
建议最好把问题说清楚，自己的目的条带是多大（光说引物名称，除非用过这个引物的，否则也很难猜到你的条带有多大），marker的条带是多大。
那个泳道是什么？那个是阳性对照？那个是阴性对照。
自己是怎么做的？条带和你预期的有什么不同？
尽管楼主说了marker的名称，要知道这个世界有N种marker，每个实验室都有自己的偏好，都是不一样的，所以别人也不知道你的marker代表的那些带是多大。
我猜测楼主是想说，为什么DNA提取没问题，但是为什么PCR没有条带？
原因有很多。
1.你是想提内生菌DNA，但是实际上提取的DNA中大部分是寄主的~
2.DNA很亮的条带，没有带，很可能是模板浓度太高，抑制了PCR反应。
由于问题没说清楚，也不知道怎么帮你，你可以查一下PCR问题常见问题和回答！。 Originally posted by bear0329 at
我是提取物内生菌DNA，然后进行16srDNA扩增的，提取效果和PCR结果见下图
提取效果检测
marker 是 λDNA/Hind Ⅲ
PCR结果检测，引物27f/907r，marker DL2000
... PCR上错了图，不好意思啊，最左边和最右边的都是，Marker，是2000的大小，最左边第二个是阴性对照
是啊，你想解决什么问题啊？ Originally posted by bear0329 at
我是提取物内生菌DNA，然后进行16srDNA扩增的，提取效果和PCR结果见下图
提取效果检测
marker 是 λDNA/Hind Ⅲ
PCR结果检测，引物27f/907r，marker DL2000
... PCR结果
PCR上错了图，不好意思啊，重新上图。最左边和最右边的都是，Marker，是2000的大小，最左边第二个是阴性对照 你的总DNA应该没有问题，差不对就在marker的最后一条带周围，PCR结果哪个是什么maker Originally posted by lbzx at
你的总DNA应该没有问题，差不对就在marker的最后一条带周围，PCR结果哪个是什么maker PCR的结果在附件图中，最左边和最右边的是marker，左边第二个是阴性对照，marker是DL2000的 Originally posted by bear0329 at
PCR的结果在附件图中，最左边和最右边的是marker，左边第二个是阴性对照，marker是DL2000的 那就没有问题，克隆测序吧 Originally posted by lbzx at
那就没有问题，克隆测序吧 恩，谢谢啦，目的条带应该是扩增出来了，但不是很亮，我的上样量是5微升，是不是产物不多的原因的，怎么样才能改善呢？谢谢 Originally posted by bear0329 at
恩，谢谢啦，目的条带应该是扩增出来了，但不是很亮，我的上样量是5微升，是不是产物不多的原因的，怎么样才能改善呢？谢谢 直接切胶回收好了 Originally posted by lbzx at
直接切胶回收好了 回收胶浓度多少好点呢？谢谢
var cpro_id = 'u1216994';
欢迎监督和反馈：本帖内容由
提供，小木虫为个人免费站点，仅提供交流平台，不对该内容负责。欢迎协助我们监督管理，共同维护互联网健康，如果您对该内容有异议，请立即发邮件到
联系通知管理员，也可以通过QQ周知，我们的QQ号为：8835100
我们保证在1个工作日内给予处理和答复，谢谢您的监督。
小木虫，学术科研第一站，为中国学术科研研究提供免费动力
欢迎监督，发现不妥请立即
E-mail： & QQ：8835100- Database Error
Discuz! Database Error
已经将此出错信息详细记录, 由此给您带来的访问不便我们深感歉意.PCR结果抹带(模板,功能基因,缓冲液,土壤)
12:12:01&&&来源：&&&评论：&&
[PCR结果抹带(模板,功能基因,缓冲液,土壤)] 进来做土壤中amoA功能基因的PCR用50 ul体系
5 微升缓冲液Taq酶 2U引物各1.25ulDNA模板 1uldNTPs
2ulMg2+ 3ul目的片断在500bp左右
结果总是出现抹带
请大家指教是什么原因？DNA模板用于总细菌的PCR扩增效果还可以
不知道做特定功能基因是不是DNA模板需要多加一些？PCR电泳照片如下 关键词:[模板 功能基因 缓冲液 土壤 电泳 细菌 引物]…
进来做土壤中amoA功能基因的PCR用50 ul体系
5 微升Taq酶 2U引物各1.25ul模板 1uldNTPs
2ulMg2+ 3ul目的片断在500bp左右
结果总是出现抹带
请大家指教是什么原因？模板用于总细菌的PCR扩增效果还可以
不知道做特定功能基因是不是DNA模板需要多加一些？PCR电泳照片如下
回复PCR扩增有时出现涂抹带或片状带或地毯样带。其原因往往由于酶量过多或酶的质量差，dNTP浓度过高，Mg2+浓度过高，退火温度过低，循环次数过多引起。其对策有：减少酶量，或调换另一来源的酶。②减少dNTP的浓度。适当降低 Mg2+浓度。增加模板量，减少循环次数。回复不知这位大侠解决没呢？我也做这个基因，同样的问题！什么原因呢？总怀疑这个引物不对，不过那么多的文献都用它。。。
将本文分享到下面的网站：
相关热词搜索：
[PCR结果抹带(模板,功能基因,缓冲液,土壤)]延伸阅读：
频道总排行
频道本月排行}