体外抗原抗体反应结合是否产生非特异沉淀反应

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抗原抗体反应原理
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  抗原与抗体能够特异性结合是基于抗原决定簇(表位)和抗体超变区分子间的结构互补性与亲和性。这种特性是由抗原、抗体分子空间构型所决定的。除两者分子构型高度互补外,抗原表位和抗体超变区必须密切接触,才有足够的结合力。   抗原抗体反应可分为两个阶段:第一阶段为抗原与抗体发生特异性结合的阶段,此阶段反应快,仅需几秒至几分钟,但不出现可见反应;第二阶段为可见反应阶段,这一阶段抗原抗体复合物在适当温度、pH、电解质和补体影响下,出现沉淀、凝集、细胞溶解、补体结合介导的肉眼可见的反应,此阶段反应慢,往往需要数分钟至数小时。在血清学反应中,以上两阶段往往不能严格分开,往往受反应条件(如温度、pH、电解质、抗原抗体比例等)的影响。   (一)抗原抗体结合力   抗原抗体是一种非共价的结合,不形成共价键,需要四种分子间引力参与。   1.静电引力:又称库伦引力。是因抗原、抗体带有相反电荷的氨基与羧基基团间相互吸引的能力,这种吸引力的大小和两个电荷间的距离平方成反比。两个电荷距离越近,静电引力越大;   2.范德华引力:这是原子与原子、分子与分子相互接近时分子极化作用发生的一种吸引力,是抗原、抗体两个大分子外层轨道上电子相互作用时,两者电子云中的偶极摆动而产生的引力。这种引力的能量小于静电引力;   3.氢键结合力:是供氢体上的氢原子与受氢体上氢原子间的引力。其结合力较强于范德华引力;   4.疏水作用力:水溶液中两个疏水基团相互接触,由于对水分子的排斥而趋向医学教。育网收集整,理聚集的力。当抗原表位和抗体超变区靠近时,相互间正负极性消失,周围亲水层也立即失去,从而排斥两者间的水分子,使抗原抗体进一步吸引和结合。疏水作用力是这些结合力中最强的,因而对维系抗原抗体结合作用最大。   (二)抗原抗体的亲和性和亲和力   亲和性指抗体分子上一个抗原结合点与对应的抗原决定簇之间相适应而存在的引力,它是抗原抗体间固有的结合力。亲和性用平衡常数K来表示,K值越大,亲和性越高,与抗原结合也越牢固。   抗体的亲和力指抗体结合部位与抗原表位间结合的强度,与抗体结合价相关,所谓多价优势,抗体亲和力高,与抗原结合牢固,不易解离。   (三)亲水胶体转化为疏水胶体   抗体是球蛋白,大多数抗原亦为蛋白质,它们溶医学教。育网收集整,理解在水中皆为胶体溶液,不会发生自然沉淀。亲水胶体形成机制是因蛋白质含有大量的氨基和羧基残基,这些残基在溶液中带有电荷,由于静电作用,在蛋白质分子周围出现了带相反电荷的电子云。如果溶液pH偏高,蛋白质分子带负电荷,周围出现极化的水分子,形成水化层,而当抗原抗体的结合,使表面电荷减少或消失,电子云也消失,水化层变薄,蛋白质由亲水胶体转化为疏水胶体。此时,如再加入电解质,如NaCl,则进一步使疏水胶体物相互靠拢,形成可见的抗原抗体复合物。
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抗原和对应抗体在一定条件下特异结合形成可逆性抗原-抗体复合物的过程。抗原-抗体是免疫球蛋白分子上的抗原结合簇与抗原分子上的相互吸引以及多种分子间的引力参与发生的。这种反应没有的形成。由于抗原的物理性状、抗体的特点、参与反应的介质和实验条件的不同,抗原-抗体反应可分为凝集反应 、沉淀反应 、补体结合反应或嗜细胞反应等,这些反应已成为疾病诊断、病原微生物鉴定、流行病学调查以及科学研究工作广泛应用的手段。
抗体都是蛋白质(免病球蛋白)。多数抗原也是蛋白质,少数为多糖、、等物质。以水为分散媒的中,在一定的下,分散相分子中的基(如、、等)发生电离而使胶体粒子带,同种粒子所带电荷相同,彼此互相排斥。这些与水有很强的亲和力,使粒子外围构成水层成为亲水胶体,因而胶体粒子能均匀地分布在溶液中。如果抗原-抗体发生特异性结合,就不能与周围结合,而构成憎水胶体。憎水胶体在溶液中的稳定性取决于胶体的。若在溶液中加入一定量的电解质,则可中和胶体表面上的电荷,促使粒子相互吸引而出现凝集反应或沉淀反应等。此外,还有库伦吸引力、范德瓦耳斯力、结合作用、疏水相互作用等分子间引力参与和促进抗原-抗体反应。
抗原与抗体反应具有高度的特异性。这一反应是分子表面的结合,虽然相当稳定,但因抗原-抗体本身未受到破坏,它们仍可分离,因此,反应是可逆的。此外,抗原分子与抗体分子的结合有一定的比例。一般来说,抗原是多价的,抗体是双价的,因而一个抗体分子可结合两个抗原分子,而一个抗原分子可结合多个抗体。所以,在比例适合时它们可形成高度的抗原-抗体复合物,沉淀下降。抗体过多或抗原过多,都不能形成高度的抗原-抗体复合物,不产生沉淀或沉淀很少。
抗原-抗体反应可分为两个阶段。第一阶段为抗原与抗体的结合阶段。这一阶段使亲水系统变为憎水系统,反应很快,几秒钟至几分钟即可完成,但无可见反应。第二阶段为抗原与抗体反应的可见阶段,出现凝集、沉淀、补体结合等反应。这一阶段的反应比较慢,需要几分钟至几十分钟,并受电解质、温度、酸碱度等因素的影响。
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抗原与抗体相互结合只局限于一些大分子表面的特定部位,即抗原决定簇和抗体结合位点之间,且以亲和力的作用方式结合在一起。抗原抗体的结合并没有共价键形成,而是由这些特定部位之间的短程分子力相互作用的结果。这些吸引力只有在极短的距离内才有效。因此抗原决定簇与抗体结合位点在空间上必须处于紧密接触状态,才能产生足够的结合力。这种分子间的互补结构决定了抗原抗体结合的专一性。 抗原抗体分子间的作用力,即亲和力包括以下几种: 1、盐键(离子键) 2、范德华力 3、疏水作用 4、氢键 二、抗原与抗体结合的可逆性
抗原抗体的结合反应是一个可逆的反应 Ab+Ag
由于抗原抗体结合的可逆性,可利用亲和层析法分离纯化抗原或抗体;利用待测抗原和标准抗原与抗体的竞争结合,进行抗原或抗体的定量测定,如放免检测法、酶联免疫吸附法等 三、抗原与抗体反应中量的关系
当抗体与抗原结合时,如果是颗粒抗原,则出现
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