sds凝胶上样为何向样品缓冲液中加入SDS各试剂有何作用

点击联系发帖人 时间：2020-11-21 11:46
为何向样品缓冲液中加入SDS

您是指浓缩胶与分离胶吗上层濃缩胶缓冲液为PH6.8的Tris-HCl缓冲液。下层分离胶缓冲液为PH8.8的Tris-HCl缓冲液最后为电极缓冲液。ph8.3的Tris-giy缓冲液


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  • SDS可与蛋白质结合使蛋白质－SDS复合粅上带有大量的负电荷这时蛋白质本身的电荷完全被SDS掩盖，消除了各种蛋白质本身电荷的差异SDS还可以断开分子内和分子间的氢键，破壞蛋白质分子的二级和三级结构；DTT可以断开半胱氨酸残基之间的二硫键破坏蛋白质的四级结构，消除了蛋白结构之间的差异最终无电荷及结构上差异的蛋白（亚单位），电泳速度只是与其分子量大小有关；溴酚蓝用作电泳时的指示剂可大概指示电泳结束的时间。 


    1. 蛋白樣品与蛋白上样缓冲液按1:1的比例混合 
    2. 混匀后，100℃水浴加热5-10分钟使蛋白充分变性。 
    3. 冷却到室温后rpm离心2-5分钟，取上清直接上样电泳即可 
    4. 通常电泳时染料到达胶的底端附近（0.5-1cm）即可停止电泳。
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