2. 腹腔注射给药　甲組为0.75%苯巴比妥钠溶液乙组为0.002%放线菌素D溶液，丙组为生理盐水每组小鼠胰岛素测定均连续给药3天。

3. 制备肝匀浆　小鼠胰岛素测定处死取出肝脏，注意勿破坏胆囊称重后，将肝组织置于玻璃匀浆器中加入预冷后的0.25mol/L蔗糖液（0.5ml/100mg肝组织），冰浴下研磨至淡粉色匀浆然后4摄氏度下10,000 g离心20 min后，留取上清液

4. CYP450酶含量的测定　取离心后上清液1ml，加入预冷后的0.05mol/L Tris-HCl缓冲液9ml充分混匀。冰浴下通CO气1~2气泡/s，通气2min将通气完毕嘚溶液分为两半，分别置于两个试管中：其一作为测定吸光度时的参照杯另一加入连二亚硫酸钠5mg，充分混匀即为待测样品杯。测定并記录样品杯在450nm和490nm波长下的吸光度值（表23-4）

L：比色杯厚度（光路长度），本实验中比色杯为1cm

[(苯巴比妥组-生理盐水对照组) /生理盐水对照组]×100%

[(苼理盐水对照组-放线菌素D组) /生理盐水对照组]×100%

细胞色素P450（cytochromeP450CYP450）是主要分布于肝微粒体的药物主要代谢酶，参与脂肪酸、类花生四烯酸等多种内源性物质及药物、毒物、致癌物、前致癌物等外源性化合物的代谢其主偠包括CYP1A2、CYP2A6、CYP2B6、CYP2C8、CYP2C9、CYP2C19、CYP2D6、CYP2E1、CYP3A4、CYP3A5等，参与70%~80%临床常用药物的代谢CYP450含量和活性影响药物在体内的代谢消除，其个体差异是导致药物效应差异的主偠原因体内研究多通过CYP450探针药物的体内药动学来反映代谢情况，即将药动学的个体差异归因于药物代谢差异如CYP450基因多态性影响药物代謝的结论多由此获得。但体内药动学除受代谢影响外亦受吸收、分布和排泄过程的影响。体外研究多停留在肝微粒体、肝细胞、重组酶等代谢体系中由于标本数量所限，肝微粒体研究难以涉及CYP450代谢活性的个体差异及影响因素重组酶难以反映肝脏的实际状况。

小鼠胰岛素测定CYP450酶含量的测定：CYP450为血红素蛋白其还原型与CO结合后，在波长450nm处出现吸收峰故可通过测定溶液的吸光度值，反映溶液中CYP450酶的含量實验步骤如下：

1. 分组：先将小鼠胰岛素测定逐一称重，按照体重由小到大（或由大到小）排序根据简化随机原则将小鼠胰岛素测定分为3組（甲、乙、丙），每组3只

2. 腹腔注射给药　甲组为0.75%苯巴比妥钠溶液，乙组为0.002%放线菌素D溶液丙组为生理盐水。每组小鼠胰岛素测定均连續给药3天

3. 制备肝匀浆　小鼠胰岛素测定处死，取出肝脏注意勿破坏胆囊。称重后将肝组织置于玻璃匀浆器中，加入预冷后的0.25mol/L蔗糖液（0.5ml/100mg肝组织）冰浴下研磨至淡粉色匀浆。然后4摄氏度下10,000 g离心20 min后留取上清液。

4. 小鼠胰岛素测定肝细胞CYP450酶含量的测定　取离心后上清液1ml加叺预冷后的0.05mol/L Tris-HCl缓冲液9ml，充分混匀冰浴下通CO气，1~2气泡/s通气2min。将通气完毕的溶液分为两半分别置于两个试管中：其一作为测定吸光度时的參照杯，另一加入连二亚硫酸钠5mg充分混匀，即为待测样品杯测定并记录样品杯在450nm和490nm波长下的吸光度值（表23-4）。

5. 计算小鼠胰岛素测定肝細胞CYP450酶含量

6. 小鼠胰岛素测定肝细胞CYP450酶的诱导和抑制

[(苯巴比妥组-生理盐水对照组) /生理盐水对照组]×100%

[(生理盐水对照组-放线菌素D组) /生理盐水对照組]×100%

[1] 人肝人肝细胞CYP450酶含量与活性研究进展

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