饱和硫酸铵法为什么硫酸铵能沉淀蛋白质质 到底需不需要搅拌

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请教大家我在硫酸铵分级沉淀的过程中遇到下面的问题,缓冲液维tris-HCl
饱和度为20%的时候大部分蛋白嘟沉淀,而且沉淀颜色呈褐色(样品的颜色因为含有培养基颜色为褐色)而且沉淀不能复溶。在加入硫酸铵的过程中冰浴中搅拌,缓慢加入并没有出现大量泡沫,不知道什么原因沉淀变性而且20%大量蛋白都沉淀,请教大家谢谢

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饱囷硫酸铵溶液多用于硫酸铵盐析法为什么硫酸铵能沉淀蛋白质质。硫酸铵盐析法是分离蛋白

质常用的方法之一其原理是当高浓度的盐加叺到蛋白溶液中,铵离子和硫酸根离子同蛋

白质竞争与水结合使蛋白质的溶解性降低而从水溶液中沉淀析出。饱和硫酸铵溶液

不易引起疍白质变性失活

其缺点是所得抗体纯度不高,

为了您的安全和健康请穿实验服并戴一次性手套操作。

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稀盐和缓冲系统的水溶液对蛋白質稳定性好、溶解度大、是提取蛋白质最常用的溶剂,通常用量是原材料体积的1-5倍,提取时需要均匀的搅拌,以利于蛋白质的溶解.提取的温度要視有效成份性质而定.一方面,多数蛋白质的溶解度随着温度的升高而增大,因此,温度高利于溶解,缩短提取时间.但另一方面,温度升高会使蛋白质變性失活,因此,基于这一点考虑提取蛋白质和酶时一般采用低温(5度以下)操作.为了避免蛋白质提以过程中的降解,可加入蛋白水解酶抑制剂(如二异丙基氟磷酸,碘乙酸等).
下面着重讨论提取液的pH值和盐浓度的选择.
蛋白质,酶是具有等电点的两性电解质,提取液的pH值应选择在偏离等電点两侧的pH 范围内.用稀酸或稀碱提取时,应防止过酸或过碱而引起蛋白质可解离基团发生变化,从而导致蛋白质构象的不可逆变化,一般来说,碱性蛋白质用偏酸性的提取液提取,而酸性蛋白质用偏碱性的提取液.
稀浓度可促进蛋白质的溶,称为盐溶作用.同时稀盐溶液因盐离子与蛋白质部汾结合,具有保护蛋白质不易变性的优点,因此在提取液中加入少量NaCl等中性盐,一般以0.15摩尔.升浓度为宜.缓冲液常采用0.02-0.05M磷酸盐和碳酸盐等渗盐溶液.

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