西北大学 硕士学位论文 以金磁微粒为载体的全血基因组DNA纯化方法研究 姓名：赵明 申请学位级别：硕士 专业：生物化学与分子生物学 指导教师：崔亚丽 摘要 磁性复合微粒是甴高分子或无机材料与磁性超细粉末(如铁的氧化物、铁、钴、镍 等金属)构成的具有超顺磁性的胶态复合材料近年来，结合磁性氧化物粒孓和胶体金 具有粒径小比表面积大，超顺磁性及可修饰生物分子等特性借助外加磁场的使用， 这种新型磁性复合微粒已被用于免疫学檢测、酶的固定化、蛋白分离等领域以课题组 自主研制的金磁微粒为载体，本文建立了全血基因组DNA纯化方法并对相关问题进 行系统探討。 以人全血、猪血、大鼠血液等为样本通过对纯化过程中裂解条件、结合体系、金 磁微粒用量及非特异性吸附杂质的清洗、DNA洗脱等环節的优化，建立了从哺乳动物 全血中纯化基因组DNA的方法。通过紫外吸收检测、电泳分析、PCR扩增等手段对方 法的可靠性(包括得率、纯度、批内差、批间差等)进行了评价证实纯化得到的DNA 可满足PCR扩增实验的要求。此外以鸡血为样本，对纯化体系进行适当的调整建 立了禽类動物全血基因组DNA纯化方法。结果表明：从100pL人全血中可纯化得到基 因组DNA为2～5 gg从5 批内差小于7％，三个不同批次金磁微粒纯化得到DNA得率的批间差小于20％整个 纯化过程可在50min内完成，操作简单、不涉及酚氯仿等有毒试剂，可与国外同类 纯化方法相媲美 在金磁微粒为载体的DNA纯化體系建立过程中，发现存在一定的背景值即以超 纯水替代血样完成的操作过程，其洗脱液在260nrn处亦有较小特征吸收对比发现国 外同类产品也存在不同程度的背景值。据此对产生背景的主要原因作了分析，结果表 明金磁微粒组成中的表面铁的组分和洗脱液中的EDTA形成金属螯合物的反应可能是 导致背景值的主要原因，升高温度可以加速该反应对比Fe304磁粒和金磁微粒，结果