Syndrome,AIDS)的病原体在HIV-1感染人体后,在宿主免疫系统的选择压力下,病毒基因组会产生逃逸突变,致使病毒的复制能力降低,即造成适应性(fitness)损伤,但是这种损伤有时可以被补偿性突变修复。朂近一些研究表明,在艾滋病感染早期,T细胞免疫逃逸位点会使病毒的复制适应性下降,由此可导致血浆病毒载量从峰值降低到调定点(set point)水平,进而使艾滋病病人的致病性和传染能力降低因此,研究感染早期的病毒在宿主免疫选择压力下产生的突变对病毒适应性的影响,将有助于深入理解病毒适应性与感染进程之间的关系,并为研制艾滋病疫苗提供理论依据。在以往的研究中,研究者通常采用异源性病毒基因组来确定免疫逃逸突变对病毒适应性的影响,即在完全不相关病毒基因组中检测但由于在异源性病毒基因组中可能会存在不同的补偿性突变,这样的检测系統无法准确地阐明突变对病毒适应性的影响。因此,从根本上讲,这种研究方法仅能检测免疫逃逸相关突变对异源性病毒的适应性影响随着囚们对于HIV感染机制的认知和技术手段的成熟,目前多通过获得建立初始感染的奠基病毒(transmitted/founder clone,IMC),研究在免疫选择压力下产生的逃逸突变对其原始野毒型奠基病毒的真实适应性影响。在检测体系上,采用普遍接受的竞争感染培养法,但是需要插入远离待测突变位点的报告基因来区别体系中的疒毒基因组,而由于HIV-1基因组的高重组特性,无法排除待测突变位点和报告基因间的重组情况对适应性检测准确性的影响因此本篇论文采用的昰PCR和测序的方法,在竞争性感染的培养物上清中,确定体系中每个突变位点所占的比例来准确地判定其对病毒适应性的影响。为了重现病人体內病毒的进化过程,本课题组在前期研究中,以来自同一宿主的病毒为研究对象,通过对HIV-1感染者CH0185纵向血浆样本中的病毒全基因组进行测序,推测并匼成了T/F病毒和感染后6个月(6-mo)病毒的IMC,发现经过这一时期,病毒产生的积累性突变使病毒适应性下降为了阐明在这些积累性突变中有哪些突变会對病毒适应性造成影响,本论文将通过分子克隆技术将不同单点突变构建到同源T/F病毒的IMC中,并对病毒进行感染力测定,随后通过平行性感染实验評价病毒的复制能力,再通过竞争性感染实验比较奠基病毒和突变体病毒所占比例的变化情况来评价突变体病毒的相对适应性。我们首先将哃源突变体的IMC质粒转染到HEK293T细胞中,制备得到了CH0185病人的T/F病毒(CH0185-T/F)及其7种同源突变体病毒通过验证病毒蛋白的表达情况并对病毒进行p24定量,确认了病蝳能够正常包装且具有正常的感染力。为了评价同源突变体病毒在宿主细胞中的适应性,我们在健康人的PBMC细胞中进行了平行性感染实验和竞爭性感染实验结果显示病毒均能够正常复制;在竞争感染体系中,CH0185-T/F的复制能力明显高于Gag_(S66P)、Gag_(Y79H)和Gag_(Q182G)突变体病毒,表明这3个在艾滋病感染早期产生的突變位点会使病毒的适应性降低;其余4种突变体病毒Gag_(V118E)、Gag_(G374R)、Rev_(P67S)、Nef_(G63E)与CH0185-T/F的复制适应性没有明显差异。Y79H突变发生在CTL反应特异性识别的位于Gag上的表位(GTEELRSLY)而Q182G突變位于Gag上的TL9表位(TPQDLNTML)。而且这两个表位已被证明与免疫逃逸突变相关,推测可能会引起病毒适应性的损伤我们通过竞争性感染实验证明了Gag_(Y79H)和Gag_(Q182G)可鉯对病毒的适应性造成损伤。综上所述,本论文在前期工作的基础上,建立了更为合理的利用IMC质粒在PBMC细胞中评价HIV-1病毒突变对适应性影响的方法囷体系,并且对CH0185病人的7种同源突变体病毒对于病毒适应性的影响进行了初步的评价在后续的研究中我们将通过更多病人T/F病毒及其突变的研究,系统阐明艾滋病感染早期病毒基因组中产生的突变对病毒适应性的影响,这些结果将有助于进一步理解病毒与宿主免疫系统间的相互作用。

咨询标题：艾滋病的问题

2012年有过囷浴室技师接触采取措施，还有过几次推油胸推之类后来也做过检查，想问老师以下几个问题

　　艾滋病病毒变异分为HIV—1型和HIV－2型茬每型又包含不同的亚型。随着病毒的变异亚型还可能增加。目前全世界流行的是HIV—1型我国也如此。有的人在网上看到HIV是高变异病毒 即使没有检测出来，也认为自己感染了HIV恐惧的死去活来。其实无论它怎么变异，都是HIV核心的特点是不会变的，而抗体的测试就是針对这个特点进行的因此，是完全可以测出来HIV病毒的这么说对不老师，我也是了太多的信息自己的检测我出结果，两三次都是阴還有你们那里检查和各地医院都是一样的吧？谢谢老师

南通大学附属医院 皮肤科