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临床免疫学检验.doc
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临床免疫学检验
一、免疫球蛋白检测
概念:免疫球蛋白(Ig)是指具有抗体活性或化学结构与抗体相似的球蛋白统称。由浆细胞产生,存在于机体的血液、体液、外分泌液和某些细胞的膜上。
按重链性质分:IgG、IgA、IgM、IgD 、 IgE、IgG
于出生后三个月开始合成, 3—5岁接近***水平。IG是血液中含量最高的Ig,占血清总Ig的75%—80%,是抗感染的主要抗体。是唯一能通过胎盘的抗体。
IgA:分为分泌型和血清型,分泌型的合成和分泌部位在肠道、呼吸道、乳腺、唾液腺和泪腺,血清型占总Ig的10—20%。
IgM:是分子量最大的Ig。占血清Ig的5-10%。是个体发育过程中最早出现的抗体,在胚胎发育晚期的胎儿即能产生IgM。在机体受抗原刺激后,是最先产生的抗体。IgM是血管内抗感染的主要抗体。
IgE:是正常人血清中含量最少的Ig。约0.1—0.9mg/L。占总血清Ig的0.02%,为亲细胞抗体。参与Ⅰ型超敏反应,与变态反应、寄生虫病及皮肤过敏有关。
(四)临床意义
⒈免疫球蛋白增高
(1)单克隆免疫球蛋白增高(M蛋白血症)
IgG、IgA 、IgD 或IgE增高。见于:多发性骨髓瘤、巨球蛋白血症.淋巴样异常增生性疾病等。
(2)多克隆免疫球蛋白增高
①感染:特别是慢性感染如细菌、寄生虫、螺旋体感染,IgG、IgM增高
②自身免疫性疾病:SLE以IgG、IgA或IgG、 IgM增高多见,类风关以IgM增高为主
③慢性肝病:IgG、 IgA 、IgM可增高,慢活肝IgG、
IgM增高明显
⑶IgD增高:见于IgD型多发性骨髓瘤、妊娠末期、大量吸烟者
⑷IgE增高:见于IgE型多发性骨髓瘤、变态反应性疾病、寄生虫病及皮肤过敏、急慢肝、肾综
⒉免疫球蛋白减少
IgG&6.0g/L,IgM、IgA&0.4g/L
(1)先天性:见于先天性无丙种球蛋白血症、先天无胸腺症
(2)获得性: 见于大量蛋白丢失性疾病:肾综、剥脱性皮炎中毒性骨髓病、白血病、淋巴网状系统肿瘤:淋巴瘤、霍奇金病
长期使用免疫抑制剂
⑶Ig减少易引起反复感染
IgG缺乏:易患化脓性感染
IgM 缺乏:易患革兰氏性阴败血症
IgA缺乏:易患呼吸道感染
二、血清M蛋白检测
M蛋白是一种单克隆B淋巴细胞异常增殖时产生的,具有相同结构和电泳迁移率的免疫球蛋白分子或其分子片段。
M蛋白检测的临床意义
多发性骨髓瘤
巨球蛋白血症
重链病:α型、γ型、μ型
半分子病:一条重链+一条轻链
恶性淋巴瘤
良性M蛋白血症
二、补体检测
补体是人或动物血清中的一组具有酶活性的糖蛋白,在机体免疫系统中发挥抗感染和免疫调节的作用,也参与免疫病理反应。
㈠ CH50测定
㈠ CH50临床意义
主要反应补体经典激活途径的溶血功能,其结果与C1-C9各组分的量和活性均有关
增高见于:急性炎症、组织损伤
①急、慢性肾小球肾炎
②各种自身免疫病
③感染性疾病
④作为判断肝病严重程度的指标
㈡ C1q测定的临床意义
是补体经典途径激活的始动因素
增加:见于骨髓炎、类风关、痛风
降低:见于SLE、肾小球肾炎、肾病综合症、重度营养不良
㈢ C3测定的临床意义
补体中含量最高,是经典途径和旁路途径的关键物质,也是一种急性时相反应蛋白
增高见于:急性炎症或传染病早期、
急性组织损伤、恶性肿瘤、
移植排异反应
㈢ C3测定的临床意义
⑴补体合成能力降低:慢性肝病、肝坏死
⑵补体合成原料不足:营养不良
⑶补体消耗或丢失太多:急性肾小球肾炎链球菌感染后肾炎、狼仓性肾炎、SLE活动期、化疗后
⑷先天补体缺乏
㈣ C4测定的临床意义
增高:见于各种传染病、急性炎症(如急性风湿热、皮肌炎、关节炎等)和组织损伤等
降低:见于自身免疫性肝炎、狼仓性肾炎
SLE、类风关、IgA型肾病等
在SLE,C4的降低常早于其他补体成分,且缓解时较其他成分回升迟
㈤B因子测定的临床意义
主要反应补体旁路途径的溶血功能
增高:见于某些自身免疫性疾病、肾综、
慢性肾炎、恶性肿瘤
降低:见于肝病、急性肾小球肾炎、
自身免疫性溶贫
三、细胞免疫检测
泛指执行机体免疫功能的各种细胞,主要包括T、B和NK细胞等与免疫应答有关的细胞。
不同的细胞群或亚群各有其不同的表面标志和功能,可反映机体的细胞免疫状态或功能
细胞免疫检测的应用
自身免疫性疾病、免疫缺陷病、肿瘤患者治疗前后细胞免疫功能的检测
骨髓移植和器官移植过程中免疫功能监护
感染性疾病和变态反应性疾病的免疫功能监测
某些疾病的发病机制研究
T细胞抗原标记:
CD2、CD3、CD4、CD5 、CD7、 CD8
B细胞抗原标记:
CD10、CD19、CD20、CD21、CD22
髓系(粒-单系)抗原标记:
CD11b、CD31-36、CD64、CD68、CD13、
CD14、CD15、MPO
巨核系抗原标记:
CD41a、CD41b、CD42b、CD61
干细胞抗原标记:CD34
祖细胞抗原标记:CD38
红细胞抗原标记;CD71、血型抗原A、H
非谱系抗原标记:HLA-DR
急性白血病免疫分型
分型基础:正常血细胞从多能干细胞分化、发育、成熟为功能细胞的过程中,细胞膜、细胞浆或胞核抗原的出现,表达增多与减少甚至消失与血细胞的分化发育阶段密切相关,而且表现出与细胞系列及其分化程度相关的特性。这些细胞表面和细胞浆内的抗原随着分化成熟过程不断发生改变,称为造血细胞分化抗原。分化抗原的表达与否可作为鉴别和分类血细胞的基础。
T淋巴细胞表面标志检测
一、T淋巴细胞表面标志检测
1. E玫瑰花结形成试验:CD2+
2.T细胞分化抗原测定:
CD3+、CD4+、CD8+
免疫荧光法和流式细胞术
自身免疫性疾病、免疫缺陷病、肿瘤患者治疗前后细胞免疫功能的检测
骨髓移植和器官移植过程中免疫功能监护
感染性疾病和变态反应性疾病的免疫功能监测
某些疾病的发病机制研究
CD3+检测的临床意义:
总T淋巴细胞的重要标志
评价免疫缺陷症及白血病、淋巴瘤的分型诊断
自身免疫性疾病如SLE、类风湿关节炎等的免疫调节治疗
器官移植或骨髓移植时免疫监测及指导免疫抑制治疗
CD3+CD4+检测的临床意义:
辅助、诱导T淋巴细胞的标志
机体免疫功能检测
白血病、淋巴瘤的分型诊断
免疫抑制治疗效果评价
病毒感染性疾病时常降低
CD3+CD4+检测的临床意义:
CD4+绝对计数
是HIV(+)者/AIDS诊断和分型指标之一。
HIV(+)者分型:
一期:&500×106/L;
二期:(200-499) ×106/L;
三期: &200×106/L
CD3+CD8+检测的临
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临床免疫学自身抗体检测及应用
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第二十章　自身抗体检测及应用
本章考点　　1.概念　　2.自身抗体的特性、概念　　3.常见自身抗体的检测　　4.自身抗体检测的临床应用　　自身免疫：当机体免疫系统受某种因素作用使自身免疫耐受削弱或破坏时，免疫系统会对自身成分包括：正常或变性的组织、器官、细胞、蛋白质或酶类等自身抗原产生免疫应答反应，出现自身抗体或致敏淋巴细胞的这种现象称为自身免疫。　　自身免疫性疾病：当某种原因使自身免疫应答过分强烈时，也会导致相应的自身组织、器官损伤或功能障碍，这种病理状态称为自身免疫性疾病。　　自身抗体；血循环中针对自身组织、器官、细胞及细胞内成分的抗体称为自身抗体。　　正常人血清中可有多种微量的自身抗体或致敏淋巴细胞，它能清除体内衰老细胞而起到免疫稳定的效应。
第一节　自身抗体的特性
　　　　自身抗体是自身免疫性疾病的重要标志。每种自身免疫性疾病都伴有特征性的自身抗体谱。患者血液中存在高效价自身抗体是自身免疫性疾病的特点之一，也是临床确诊自身免疫性疾病的重要依据。　　产生自身抗体的抗原包括以下几种：化学修饰的组织抗原；与自身组织成分存在交叉反应的外来抗原；隐蔽抗原；自身细胞HLA-DR抗原的表达以及低分化的组织抗原等，在一定条件下，均可刺激机体产生自身抗体。自身抗体与疾病的关系：某些自身抗体对某种疾病的诊断具有高度特异性，已经成为该病的血清标记性抗体或特异性抗体；某些自身抗体与疾病的活动性有相关性；少数自身抗体参与了免疫病理性损伤。　　测定自身抗体的意义：自身免疫性疾病的诊断；疾病活动性的判断；疗效的观察；指导临床用药等。
第二节　常见自身抗体的检测
　　　　自身抗体种类很多，这里只是简单介绍几种常见的自身抗体的检测。　　　　一、类风湿因子　　（一）概念　　类风湿因子（rheumatoid factor，RF）是一种抗人或动物IgG分子Fc片段抗原决定簇的抗体，是以变性IgG为靶抗原的自身抗体。可与人或动物的变性IgG结合，而不与正常IgG发生凝集，最多见于类风湿性关节炎患者。　　Rose等1984年在RA（rheumatoid arthritis）患者血清中发现RF。RF有IgM、IgG、IgA和IgE型，IgM型为主要类型。　　（二）检测方法　　1.胶乳凝集试验：以IgG吸附于聚苯乙烯胶乳颗粒上，如血清中含有RF，可与乳胶颗粒出现凝集反应。该法只能定性或半定量，灵敏度及特异性不高，只能检测IgM型RF。　　2.速率散射比浊法：定量检测、准确、快速，准确性和敏感性高于胶乳凝集实验。也只能检测IgM型RF。　　3.ELISA法：可检出不同Ig类型的RF，在酶标记抗体时，分别标记IgG、IgA或IgM。　　（三）临床应用　　RF主要见于类风湿，在类风湿性关节炎患者中的检出率很高，RF阳性支持早期RA的倾向性诊断，对年轻女性应进行RA和风湿热的鉴别；而对非活动期RA的诊断，需参考病史。但RF也像ANA一样，并不是RA独有的特异性抗体。在SLE患者约有50%RF阳性，在其他结缔组织病如SS、硬皮病、慢性活动性肝炎以及老年人中均可有不同程度的阳性率。部分正常人也可出现。但RF滴度或含量一般较低（80IU／ml伴严重关节功能障碍者，提示预后不良。　　IgG型RF：与患者滑膜炎、血管炎和关节的症状密切相关。正常人以及非RA患者中很难检出。　　IgA型RF：10%RA可检出，为RA临床活动的指标，与骨质破坏以及关节炎症状的严重程度显著相关。　　IgE型RF：在关节液、胸水中高于血清水平。
　　二、抗核抗体　　抗核抗体（antinuclear antibody，ANA）是以自身真核细胞成分作为靶抗原的一组自身抗体的总称，泛指各种核成分的抗体，是一种广泛存在的自身抗体。迄今已发现20余种。性质主要是IgG，也有IgM、IgA、IgD和IgE，可与不同来源的细胞核起反应，无器官特异性和种属特异性。ANA主要存在于血清中，也可存在于胸水、关节滑膜液以及尿液等体液中。　　ANA可见于多种疾病，主要存在于自身免疫性疾病患者血清中，如SLE、SS、MCTD、类风湿性关节炎等。也可见于慢性肝病、病毒感染以及正常老年人、妊娠妇女等。ANA阴性不能排除自身免疫性疾病的诊断；阳性也不一定是自身免疫性疾病。　　由于细胞核成分的复杂性，不同成分的抗原性也不同；因此就会有多种不同类型的ANA。ANA在不同的疾病中呈现不同的组合，不同的疾病有自己的抗核抗体谱。有些ANA只是针对某一特定成分，只在某一疾病中出现，成为该病的血清标志性抗体。ANA是一个重要的筛选试验。　　分类：按理化特性和抗原分布部位分为四大类。包括抗D
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过敏性鼻炎
过敏性鼻炎即变应性鼻炎，是指特应性个体接触变应原后，主要由IgE介导的介质（主要是组胺）释放，并有多种免疫活性细胞和细胞因子等参与的鼻黏膜非感染性炎性疾病。其发生的必要条件有3个：特异性抗原即引起机体免疫反应的物质；特应性个体即所谓个体差异、过敏体质；特异性抗原与特应型个体二者相遇。变应性鼻炎是一个全球性健康问题，可导致许多疾病和劳动力丧失。
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过敏性鼻炎病因
变应性鼻炎是一种由基因与环境互相作用而诱发的多因素疾病。变应性鼻炎的危险因素可能存在于所有年龄段。
1.遗传因素
变应性鼻炎患者具有特应性体质，通常显示出家族聚集性，已有研究发现某些基因与变应性鼻炎相关联。
2.变应原暴露
变应原是诱导特异性IgE抗体并与之发生反应的抗原。它们多来源于动物、植物、昆虫、真菌或职业性物质。其成分是蛋白质或糖蛋白，极少数是多聚糖。变应原主要分为吸入性变应原和食物性变应原。吸入性变应原是变应性鼻炎的主要原因。
（1）螨在亚热带和热带地区最主要的螨为屋尘螨、粉尘螨等。屋尘螨以人类皮屑为食，并主要生活在床垫、床底、枕头、地毯、家具及绒毛玩具中。在热（20℃以上）且潮湿（相对湿度大于80%）的环境中繁殖最快。屋尘螨变应原包含在其排泄物颗粒中，当沾染的织物被碰动后，这些颗粒便暴露于空气中并能够很快再次沉积下来。空气中的螨变应原浓度与变应性鼻炎的发病有关。
（2）花粉风媒花粉由于飘散量巨大且能远距离传输，因而可影响远离花粉源数百公里的人群。虫媒花粉只有直接接触才会致敏，如农艺师和花店店员。花粉的致敏能力随季节、地理位置、温度和植物种类而变化。大多数花粉致敏者会患有结膜炎。
（3）动物皮屑动物的皮屑及分泌物携带致敏原。猫、狗变应原在室内尘土和家具装饰中广泛存在。
（4）真菌变应原霉菌向室内、外环境中释放变应原性孢子，湿热环境生长迅速。
（5）蟑螂变应原变应原见于其粪便及甲壳中，颗粒较大，不在空气中播散。
（6）食物变应原在变应性鼻炎不伴有其他系统症状时，食物变态反应少见。另一方面，在患者多个器官受累的情况下，食物变态反应常见。对婴儿来说，多数是由牛奶和大豆引起的；对成人来说常见食物变应原包括：花生、坚果、鱼、鸡蛋、牛奶大豆、苹果、梨等。
过敏性鼻炎临床表现
变应性鼻炎的典型症状主要是阵发性喷嚏、清水样鼻涕、鼻塞和鼻痒。部分伴有嗅觉减退。
每天数次阵发性发作，每次多于3个，多在晨起或者夜晚或接触过敏原后立刻发作。
大量清水样鼻涕，有时可不自觉从鼻孔滴下。
间歇或持续，单侧或双侧，轻重程度不一。
大多数患者鼻内发痒，花粉症患者可伴眼痒、耳痒和咽痒。
过敏性鼻炎检查
鼻黏膜苍白、双下甲水肿，总鼻道及鼻底可见清涕或黏涕。
2.皮肤点刺试验
使用标准化变应原试剂，在前臂掌侧皮肤点刺，20分钟后观察结果。每次试验均应进行阳性和阴性对照，阳性对照采用组胺，阴性对照采用变应原溶媒。按相应的标准化变应原试剂说明书判定结果。皮肤点刺试验应在停用抗组胺药物至少7天后进行。
3.血清特异性IgE检测
抽患者静脉血，做免疫学检测，不受药物及皮肤状态的影响。确诊变应性鼻炎的过敏原，需要临床表现病史、皮肤点刺试，血清特异性IgE检测结果综合考虑。
4.鼻激发试验
是变应性鼻炎诊断金标准，但具有风险，临床不作为常规方法。
过敏性鼻炎诊断
临床症状喷嚏、清水样涕、鼻塞、鼻痒等症状出现2项以上（含2项），每天症状持续或累计在1小时以上。可伴有眼痒、结膜充血等眼部症状。体征常见鼻黏膜苍白、水肿、鼻腔水样分泌物。变应原皮肤点刺试验阳性，和/或血清特异性IgE阳性，必要时可行鼻激发试验。
过敏性鼻炎鉴别诊断
变应性鼻炎需与急性鼻炎卡他期、脑脊液鼻漏及血管运动性鼻炎相鉴别。
过敏性鼻炎并发症
变应性鼻炎伴发疾病可分为相同的致病途径（如变态反应）或合并其他疾病（黏膜肿胀，黏液潴留引起的合并感染）。包括哮喘、结膜炎、慢性鼻-鼻窦炎、腺样体肥大、分泌性中耳炎等。变应性鼻炎的存在加重哮喘，大多数哮喘患者患有变应性鼻炎。室外变应原较室内变应原更易引起变应性结膜炎。
过敏性鼻炎治疗
1.避免接触变应原
（1）减少室内的尘螨数量；维持居住空间相对湿度至60%以下，但过低（如低于30%～40%）会造成不适；清扫地毯；清洗床上用品、窗帘，螨变应原溶于水，水洗纺织品可清除其中的大部分变应原；使用有滤网的空气净化机、吸尘器等。
（2）相应花粉致敏季节，规避致敏原。
（3）对动物皮毛过敏的患者回避过敏原。
2.药物治疗
应考虑以下因素：疗效、安全性、费用/效果比等。常用鼻内和口服给药，疗效在不同患者之间可能有差异。停药后无长期持续疗效，因此对持续性变应性鼻炎需维持治疗。延长治疗时间并不发生快速耐药性。鼻内给药具有许多优点，高浓度药物可直接作用于鼻部，避免或减少了全身副作用。但对于伴有其他过敏性疾病患者，药物需要作用不同靶器官，鼻内给药不是最佳选择，推荐全身药物治疗。妊娠期患者应慎用各种药物。
（1）抗组胺药口服或鼻用第2代或新型H1抗组胺药，可有效缓解鼻痒、喷嚏和流涕等症状。适用于轻度间歇性和轻度持续性变应性鼻炎，与鼻用糖皮质激素联合治疗中-重度变应性鼻炎。
（2）糖皮质激素鼻用糖皮质激素，可有效缓解鼻塞、流涕和喷嚏等症状。对其他药物治疗无反应或不能耐受鼻用药物的重症患者，可采用口服糖皮质激素进行短期治疗。
（3）抗白三烯药对变应性鼻炎和哮喘有效。
（4）色酮类药对缓解鼻部症状有一定效果，滴眼液对缓解眼部症状有效。
（5）鼻内减充血剂对鼻充血引起的鼻塞症状有缓解作用，疗程应控制在7天以内。
（6）鼻内抗胆碱能药物可有效抑制流涕。
（7）中药部分中药对缓解症状有效。儿童和老年人的治疗原则与成人相同，但应特别注意避免药物的不良反应。
3.免疫治疗
免疫治疗诱导了临床和免疫耐受，具有长期效果，可预防变应性疾病的发展。变应原特异性免疫治疗常用皮下注射和舌下含服。疗程分为剂量累加阶段和剂量维持阶段，总疗程不少于2年。应采用标准化变应原疫苗。
（1）适应证主要用于常规药物治疗无效的变应性鼻炎患者。
（2）禁忌证①哮喘发作期；②患者正使用β受体阻断剂；③合并其他免疫性疾病；④妊娠期妇女；⑤患者无法理解治疗的风险性和局限性。
免疫治疗可能出现局部和全身不良反应。
4.外科治疗
其适应证为经药物或免疫治疗鼻塞症状无改善，有明显体征，影响生活质量；鼻腔有明显的解剖学变异，伴有功能障碍；合并慢性鼻-鼻窦炎、鼻息肉，药物治疗无效。外科治疗不作为常规治疗变应性鼻炎的方法。
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