问答题:自动化免疫速率定时散射比浊法抗原仪进行抗原过量检测的原理?

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问题:  &#xe6
[单选] 首先应用速率散射比浊法进行免疫测定的是()
A . A.SternbergB . B.MileC . C.RayleighD . D.ManciniE . E.Fahey
下列关于散射比浊分析描述,错误的是() A.散射光的强度与复合物的含量成反比。
B.测定的散射信号值应是在散射信号响应值曲线的上升臂部分。
C.散射比浊法分析与透射比浊分析的原理完全不同。
D.一定要保持抗体过量以维持抗原抗体复合物的相对不溶解性。
E.抗体量恒定时,形成免疫复合物的反应速率与散射信号响应值的上升呈正比。
速率散射比浊分析的抗原过量检测时,出现第二次速率峰值信号表示() A.被测定抗原量过高,应稀释重测。
B.被测定抗原量太低,应取上一个稀释浓度。
C.第一次速率峰值信号是由全部的待测抗原产生。
D.第一次速率峰值信号是由部分的待测抗原产生。
E.以上均不对。
散射比浊法测定时,为维持抗原-抗体复合物相对不溶解性应() A.保持抗原过量。
B.保持抗体过量。
C.保持抗原-抗体相等。
D.保持抗原略大于抗体量。
E.与抗原或抗体量无关。
流式细胞仪检测原理中最重要的一点就是() A.采用荧光检测器检测特定荧光的特定发射波长。
B.检测激发光的波长。
C.检测荧光的颜色。
D.检测前向散射光。
E.检测侧向散射光。
下列关于液流系统的鞘液的描述,错误的是() A.鞘液是辅助样本作正常检测的基质液。
B.鞘液是用来与样本作对比的。
C.鞘液是包裹在样本流周围。
D.使样本保持处于喷嘴中心位置,保证检测精确性。
E.防止样本流细胞靠近喷孔而形成堵塞。
首先应用速率散射比浊法进行免疫测定的是()
参考答案:A
●&&参考解析2016年临床检验主管技师考试考前押题8_卫生资格考试-中华考试网
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2016年临床检验主管技师考试考前押题8&&【
】&&[ 日 ]
1.目前免疫比浊分析中最常用的方法是A
A.散射比浊法B.速率透射比浊法C.分光光度计比色法
D.免疫透射比浊法E.肉眼比浊法
2.免疫检测自动化的首要目的是A
A.提高工作效率和检测的精密度B.减低操作者劳动强度
C.减少操作程序D.自动检测及校对E.提高检测的可靠性
3.散射比浊分析中,多采用B
A.Mile原理B.Rayleigh原理
C.Fahey原理D.Mancini 原理E.Sternberg原理
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4.抗原抗体结合反应遵守典型的C
A. Mancini 曲线B. Fahey曲线
C.Heidelberger 曲线D.Mile曲线E.Rayleigh曲线
5.定时散射比浊分析应保证B
A.抗原过量B.抗体过量C.抗体与抗原处于最适比D.抗原与抗体比例为1:1
E 抗原与抗体比例为2:1
6.定时散射比浊分析时,如果待测标本抗原浓度过高,则应B
A. 照常进行反应B.将待测标本稀释后重新测定C. 进行全量样本检测
D.测量结果更可靠E 增加抗体的浓度后重新检测
7.首先应用速率散射比浊法进行免疫测定的是A
A.SternbergB. RayleighC. MileD.ManciniE.Fahey
8.速率散射比浊分析设计的前提是B
A.抗原过量 B.抗体过量 C.抗体与抗原处于最适比 D.抗原与抗体比例为1:1
E 抗原与抗体比例为2:1
9.免疫透射比浊分析中,检测测器与透射光的夹角为A
A.00 B.50 C.150 D.450 E.900
10.免疫比浊分析主要用于检测A
A.免疫球蛋白、补体等 B.内分泌激素 C.病毒血清标志物
D. 肿瘤标志物 E.细胞表面标志首页 1
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() All Rights Reserved人血清免疫球蛋白类定时散射比浊检测系统的研制--《南方医科大学》2008年硕士论文
人血清免疫球蛋白类定时散射比浊检测系统的研制
【摘要】:人体内存在着10万种以上的蛋白质,在机体中承担着不同的任务,来源于组织细胞,对维持人体机能变化起着重要的作用,当疾病状态时又起着重要病理意义的那些特殊蛋白,统称为特定蛋白。为了揭示生命活动的规律,识别和检测这些蛋白质以及生理功能是必然的发展方向。人体免疫系统中也存在着这样一类与免疫系统疾病发生、发展、转归及预后紧密关联的特定蛋白,包括免疫球蛋白A(IgA)、免疫球蛋白G(IgG)、免疫球蛋白M(IgM)、以及补体C3、C4。人体免疫系统是人类保持健康、避免发生各种疾病的自卫防御系统,它是人类在进化过程里,与自然环境作斗争中逐渐建立和完善的,是一个组织严密、分工精细,成员众起各种疾病时,具有抵抗力,确保人体内环境的统一、稳定和平衡。人体内免疫功能失调会引起恶性肿瘤、慢性肾病、慢性肝炎、慢性胃病、糖尿病、红斑狼疮、风湿性心脏病、硬化症、重症肌无力、类风湿、中老年性疾病等各种免疫系统疾病,严重威胁着人类的健康,随着社会的发展和医学科技的不断进步,越来越多的免疫系统疾病被人们所重视,与其密切相关的特定蛋白的检测也日益受到广大医学和科研工作者的青睐及关注。目前国内外常用的特定蛋白的检测方法包括单向免疫扩散法、免疫电泳法、酶联免疫测定(ELISA)、化学发光免疫测定(CLIA)、时间分辨免疫测定(TRFIA)、透射比浊法等,但是这些方法都存在一定的弊端,操作繁琐,费时,不易自动化,因此检测时不仅将增加被检测者的经济负担,也使检测者耗费更多时间、精力和试剂。
随着实验技术的发展,特种蛋白分析技术由最初的试管沉淀反应、琼脂凝胶的扩散试验,发展到现代免疫分析技术,特种蛋白免疫分析技术方法逐步完善,其灵敏度逐步提高,检测水平由微克(μg)发展到纳克(ng),甚至皮克(pg)水平。特种蛋白分析仪是近年来国内常购的用于检测特种蛋白的临床检验设备。特定蛋白分析仪是利用抗原-抗体在一定条件下反应形成免疫复合物的原理,用免疫浊度法检测悬浮于缓冲液中的抗原-抗体免疫复合物颗粒的定量测定方法。特种蛋白分析仪从结构上主要分为透射比浊和散射比浊。
免疫比浊测定法(Immunoturbidimetry)具备生化检测的快速性和免疫分析的特异性,是将现代光学测量仪器与自动化检测系统相结合应用于沉淀反应的方法,可对各种液体介质中的微量抗原、抗体和药物以及小分子半抗原物质进行定量测定。与其它免疫分析方法相比,免疫比浊技术除了具有操作简单、灵活、检测范围广,易于自动化等显著特点,其最突出优势还在于克服了抗原过量引起的高剂量HOOK效应。最早可追溯到1967年,Ritchie等报道了散射比浊法(Nephelometry),其原理是光线通过检测溶液时,被其中所含的抗原抗体复合物折射而部分发生偏转,产生散射光。根据雷利散射公式,在一定条件下,透射光与微粒浓度成反比,散射光与微粒浓度成正比。散射比浊法可分为终点和速率散射比浊法及动态定时散射比浊法。而散射免疫比浊测定法,具有线性范围宽广,测定速度快,精密度高,特异性强、重复性好,结果稳定可靠,并可批量测定等优点,是一种微量、快速、自动化检测体液中特定蛋白质成分的免疫化学分析技术。
近年来,国内随着临床检测需求的增加,免疫比浊测定方法的应用也越来越普遍,因此对相应试剂及缓冲液的的使用也呈广泛趋势,但是由于国内临床使用的仪器基本依赖于进口,这就引发了一个严重的问题,这些仪器大多都只能使用它们自己的原装试剂和缓冲液,而且大都价格昂贵,不适宜大批量长期使用,使其在临床使用局限化。如果能研制出与仪器配套的试剂及缓冲液,将为临床检验解决一个重大难题。目前国内也有公司进行这方面的研究,但是都不尽人意,只是停留在起步阶段。这就决定了开发配套国产试剂及其相关缓冲液具有巨大的市场前景,填补了国产试剂的空缺,可以推动国内临床检验技术的发展进步。鉴于临床上对特定蛋白检测的必要性以及目前检测手段的局限性,我们的研究目的是研制出能应用于散射免疫比浊技术的国产相关检测试剂和缓冲液,满足国内市场的需求,并为广大临床患者带去福音。
本实验室采用的是动态定时散射比浊法(Fixed-Time Nephelometric AssayFTNA),该方法的原理:由于免疫沉淀反应是在抗原抗体相遇后立即开始,在极短时间内反应介质中散射信号变动很大,此时计算峰值信号会产生一定误差。故在抗原抗体反应时留出预反应时间,即散射光信号第一次读数在开始反应7.5s~2min内,大多数情况下2min以后测第二次读数,并从第二次读数中扣除第一次读数,最后转换为待测抗原浓度。抗原、抗体剂量-反应曲线是由Heidelberger首次发现,在抗体过量阶段,沉淀物的量随着抗原浓度成比例增加,当抗原浓度的增加不再增强信号时,就达到了平衡点。进一步增加抗原的量会导致沉淀物总量减少。当抗原浓度远远超过所有抗体结合容量时,就会产生可溶性物质,接着互相交联形成的沉淀物无法检测。在抗原过量区域,所有具有较大病理学浓度范围的人体蛋白,都受到这种现象的影响。Green等根据反应曲线的形状提出了“钩状效应(Hook Effect)”的名称。目前钩状效应主要针对抗原过剩而言,我们运用的BN Prospec特种蛋白仪方法学上较其他仪器具有明显的优势:动态定时散射比浊、前向全散射的光收集和乳胶增强试剂使灵敏度提高十倍。此外,仪器还具有抗原过剩的自动稀释检测功能,间接抗原过量检测,避免了高剂量Hook效应造成的假阴性结果,检测的范围也更宽广。本研究应用抗原抗体反应原理利用动态定时散射比浊分析技术监测人血清中的免疫球蛋白系统类相关蛋白的含量,以此来评价临床疾病的发生、发展、转归以及预后。评价该方法的精密度、灵敏度、稳定性、正常参考值范围等指标,并与与Dadebehring公司的同类试剂进行了临床血清标本检测结果的相关性比较。结果显示:(1)进口原装反应液和稀释缓冲液与本实验室研制反应液和稀释液同样条件下对30份正常人标本进行对比测定结果相关性好,r=0.991,P<0.01,线性方程为Y(自制试剂)=—0.1 1+1.012X(德灵试剂),结果有显著统计学意义,重复性高,稳定性好,37℃条件下一年内保存均稳定有效。(2)IgA、IgG、IgM研制试剂:最低检测限分别为0.028g·L~(-1)、0.72g·L~(-1)、0.022 g·L~(-1);批内精密度2.1%~4.9%、1.6%~3.5%、3.5%~5.0%,批间精密度2.0%~3.1%、3.0%~4.5%、2.6%~4.1%:IgA样本中的游离血红蛋白、胆红素、甘油三酯等干扰物浓度分别达到10 g·L~(-1)、600mg·L~(-1)、9.9 g·L~(-1)时对检测结果无显著性影响,IgG样本中的游离血红蛋白、胆红素、甘油三酯等干扰物浓度分别达到10 g·L~(-1)、600mg·L~(-1)、19 g·L~(-1)时对检测结果无显著性影响,IgM样本中的游离血红蛋白、胆红素、甘油三酯等干扰物浓度分别达到10 g·L~(-1)、600mg·L~(-1)、4.6g·L~(-1)时对检测结果无显著性影响:测定54份临床血清标本计算与进口同类试剂测得结果显示两种试剂相关性好,结果有显著统计学意义:IgA线性方程为Y(自制试剂)=1.101+0.881X(德灵试剂),相关系数为0.980;IgG线性方程为Y(自制试剂)=0.148+0.901X(德灵试剂),相关系数为0.979;IgM线性方程为Y(自制试剂)=1.045-0.075X(德灵试剂),相关系数为0.967。正常参考值范围IgA、IgG、IgM分别为0.59~4.31g·L~(-1)、6.9~17.92g·L~(-1)、0.35~2.23 g·L~(-1)。(3)补体C3、C4研制试剂:最低检测限分别为0.022 g·L~(-1)、0.0014 g·L~(-1);批内精密度2.0%~4.9%、4.5%~5.0%,批间精密度5.4%~6.8%、3.8%~5.1%;C3样本中的游离血红蛋白、胆红素、甘油三酯等干扰物浓度分别达到10 g·L~(-1)、600mg·L~(-1)、5.7 g·L~(-1)时对检测结果无显著性影响,C4样本中的游离血红蛋白、胆红素、甘油三酯等干扰物浓度分别达到10 g·L~(-1)、600mg·L~(-1)、2.4g·L~(-1)时对检测结果无显著性影响;测定54份临床血清标本计算与进口同类试剂侧得结果显示两种试剂相关性好,结果有显著统计学意义:C3线性方程为Y(自制试剂)=-0.245+1.006X(德灵试剂),相关系数为0.974;C4线性方程为Y(自制试剂)=1.101+0.993X(德灵试剂),相关系数为0.961。正常参考值范围C3、C4分别为0.90~1.68g·L~(-1)、0.110~0.408g·L~(-1)。(4)稳定性:将免疫球蛋白类免疫比浊抗体试剂和标准品于37℃放置7天后,标准品散射光Value值有所下降,但标准曲线良好,检测范围无改变,3个阳性血清的测值与放置前接近,批内和批间精密度CV仍低于10%。我们的研究结果表明,建立的定时散射比浊分析法测定免疫球蛋白系统IgA、IgG、IgM以及C3、C4重复性好、准确度高、灵敏度高,与Dade Behring同类试剂测定结果有比较好的相关性,而且操作简单、反应时间短、检测样本量大以及可以实现自动化等优点,作为一种辅助诊断手段具有极大的临床应用潜力。本研究为进一步开发成熟的、临床用特种蛋白检测试剂奠定了坚实的基础。
【学位授予单位】:南方医科大学【学位级别】:硕士【学位授予年份】:2008【分类号】:R446.6
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【摘要】目的:评估透射免疫比浊法和速率散射比浊法检测C反应蛋白(CRP)的灵敏度和特异性.方法:用免疫透射比浊法和速率散射比浊法同时检测了80例各种患者血清中CRP浓度.结果:两种方法在8—20mg/L、20~40mg/L、40~80mg/L、80~160mg/L、160~300mg/L范围内测定C反应蛋白的相关系数是0.990、0.996、0.995、0.992、0.997.说明两种方法的相关性是良好的,而在低值1~8mg/L的测定中两方法的相关系数为0.928.结论:速率散射免疫比浊法在低值和高值测定中可以得到较为准确的CRP检测结果. 【关键词】透射免疫比浊法 散射免疫比浊法 C反应蛋白 在急性应急性疾病时如大手术、重度创伤、心肌梗死、严重感染、肿瘤等,血浆中某些蛋白浓度可明显增高或降低,这种现象称为急性时相反应,这些蛋白统称为急性时相反应蛋白.最具有代表性的急性时相蛋白首推C反应蛋白(CRP),CRP是目前临床上最有用的急性时相反应的一个敏感指标.CRP作为炎症标志物,本身尽管为非特异性的,但对于细菌感染、各种炎症过程及组织坏死与损伤及其恢复期的筛检、监测、病情评估与疗效判断,都具有重要的意义J.CRP的检测方法目前使用比较多的有胶乳凝集试验、免疫沉淀法、免疫浊度法和标记免疫测定法等,而其中的透射免疫比浊法和速率散射比浊法是目前公认为检测CRP较为精确的两种方法.为了评估两种方法的灵敏度和特异性,我们收集了80份血清,用免疫透射比浊法和速率散射比浊法分别进行CRP的检测,并作了结果比较. 一、材料与方法 1、标本来源 样本血清来源于80例本院门诊和住院病人,其中骨折病员21例,确诊的恶性肿瘤病人15例,急性肺炎病员22例,冠心病病人10例,外科手术病员12例.采集空腹血后及时分离血清,并置-20℃保存备用. 2、仪器 日立7170型自动生化分析仪,BeckmanArray 360特定蛋白检测系统. 3、试剂 透射免疫比浊法试剂盒及配套的校准品由上海基恩科技有限公司提供,批号为ISEP03.速率散射免疫比浊法:Beckman公司提供的C反应蛋白试剂及C反应蛋白定标卡,定标液,批号为M、方法 (1)免疫透射比浊法将标准品稀释配制成5个不同浓度的标准品--10mg/L、19mg/L、38mg/L、76mg/L、162mg/L,进行5点定标,形成标准曲线.样本为20 uL,试剂1为180 uL,试剂2为35uL,吸光度为340nm,5分钟后进行透射比浊. (2)速率散射免疫比浊法将该公司配备的定 标卡进行校准,样本量为200l,试剂量为50,0.5分钟完成比浊测定. 5、统计方法 检验结果以x±s表示,以SPSS10.0软件包中Studentt检验作统计学处理. 二、结果 不同CRP浓度同时以两种方法检测所得结果如表1所示. 三、讨论 人体CRP与相应的抗血清在液相中反应,生成抗原抗体复合物,并产生浊度,其浊度的高低与标本中的CRP浓度呈正比,根据标准曲线,即可计算出标本中的CRP的浓度,这是透射免疫比浊法的测定原理[4].速率散射免疫比浊法是一种抗原抗体结合反应的动态测定法J,将各单位时间内CRP与抗血清形成复合物的速率及复合物颗粒产生的散射信号连接在一起,即形成动态动力学的速率散射免疫比浊法. 实验结果表明,两种方法在8~20mg/L、20~40mg/L,40~80mg/L,80~160mg/L,160~300mg/L范围内测定C反应蛋白的相关系数是0.990、0.996、0.995、0.992、0.997,说明两种方法的相关性是良好的.而在低值1~8mg/L的测定中两方法的相关系数为0.928,由于在透射免疫比浊法检测中,如果抗原抗体复合物的数量太少,对光通量的影响不大,如果复合物分子太小则阻挡不了光线的通过,在低浓度的C反应蛋白血清测定中会有所影响.而速率散射免疫比浊法是以测定单位时间内抗原抗体反应复合物形成的最快时间段的信号值,产生的散射信号最强,形成最大速率散射信号峰值.理论上讲,该测定不受本底散射信号的干扰,使检测快速,灵敏度高,对检测微量的C反应蛋白比较理想[6].在高浓度的C反应蛋白测定中,由于抗原过量,透射比浊法测定时,CRP浓度明显超出了检出限上限,发生测定结果显著低于实际含量.而在速率散射免疫比浊分析中,为保证准确性和精确度,仪器设计有抗原过量检测系统,提示应将待测样本进一步稀释,重新进行检测,以获取全部抗原的真实浓度.由此看来,在比较试验中,速率散射免疫比浊法在低值和高值测定中可以得到较为准确的结果. 目前已有测定超敏CRP的免疫增强透射比浊法在日立7170A生化分析仪上的应用的报道,其检测范围在0.125~12.5mg/L,具有更高的灵敏度,可以参考推广应用. [参考文献] [1]冯仁丰.急性相和C反应蛋白[J].上海医学检验杂志,):258—259. [2]杨振修.C反应蛋白的检测[J].上海医学检验杂志,):261—262. [3]Young B,Gleeson M,Cripps AW.C-reactive protein:a critical review[J].Pathlogy,8—224. [4]杨溢.免疫比浊法测定血清C一反应蛋白(CRP)的评价[J].四川省卫生管理干部学院学报,):165—166. [5]陈晓玲.速率散射比浊法与胶乳凝集法检测血清C反应蛋白的评价[J].上海医学检验杂志,1—145. [6]陶义训.现代医学检验仪器导论[M].上海:上海科学技术出版社,. [7]胡敏.免疫增强透射比浊法测定超敏C一反应蛋白的方法学评价[J].湖南医科大学学报,):415—416.满意请采纳
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