真核生物域前体MRNA加工内容

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[问答题,简答题] 简述真核生物mRNA、tRNA和rRNA前体转录后加工的区别。
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静水力学法测定密度值应精确到小数点后:() ["一位","二位","三位"]
简述真核生物mRNA、tRNA和rRNA前体转录后加工的区别。
参考答案: mRNA转录后的加工:前体mRNA加工的顺序是形成5&帽子结构;内切酶去除3&端的一段序列;polyA聚合酶催化形成3&polyA尾;最后是剪接去除内含子转变为成熟的mRNA。 tRNA转录后的加工:前体tRNA的加工包括切除和碱基修饰,有些则需剪接。修饰有如下类型: ①前tRNA3&端的U由CCA取代;②嘌呤碱或核糖C2&的甲基化; ③尿苷被还原成双氢尿苷(DH)或核苷内的转位反应,成为假尿嘧啶核苷(T&); ④某些腺苷酸脱氨成为次黄嘌呤核苷酸(AMP&IMP)。 rRNA转录后的加工:前体rRNA首先与蛋白质结合,然后再切割和甲基化。
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真核生物mRNA前体完成后还要经过哪些控制
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切掉内含子,只留下外显子有的mRNA会留下内含子出细胞核加5端的帽子和3端的多聚腺苷酸尾巴有的mRNA前体会再被水解酶切成很多个mRNA成熟的mRNA出核到细胞质中翻译成蛋白质翻译后修饰,磷酸化,氧化等
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真核生物mRNA转录后的加工修饰有哪些
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1、形成5’-端帽子结构;(真核生物的mRNA前体和绝大多数的成熟mRNA的5’-端,都含有7-甲基鸟苷为末端的帽子结构,帽子是由GTP和前体mRNA5’-端三磷酸核苷酸缩合反应的产物.)2、形成3’-端的多聚核苷酸,即polyA序列,polyA序列一般长度因mRNA的种类而不同,一般为40~200nt.3、除了加冒和加尾外,某些mRNA也有少量的核苷酸被修饰.如某些腺嘌呤的C6被甲基化修饰.4、基因的拼接.即切掉内含子,拼接外显子.(摘抄自百度)
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真核生物的mRNA前体加工过程包括哪几个步骤?
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真核生物的mRNA前体加工过程包括哪几个步骤?请帮忙给出正确答案和分析,谢谢!
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徐诗如 真核生物pre-mRNA的加工1
12.1 真核生物pre-mRNA的加工 内容提要一、 剪接体剪接 二、Ⅰ、Ⅱ类内含子的自我剪接三、反式剪接四、各类剪接因子的作用 五、转录和RNA加工在细胞核内的定位 一、 pre-mRNA的剪接体剪接1、Pre-mRNA剪接位点序列1)中等保守的共同序列位于内含子剪接位点的两端 2)3’位点上游普遍存在富嘧啶区 3)分支点相对保守 2、snRNA、snRNP 在pre-mRNA剪接中的作用? snRNA(small nuclear RNA)核内小RNA长约107~210bp,富含U的五种snRNA (U1、U2、U4、U5和U6),参与pre-mRNA剪接。 ? snRNP(small nuclear ribonucleo-protein) 每个核内小核糖核蛋白含一个snRNA和多个蛋白。 snRNA的作用?pre-mRNA 内含子5'剪接位点和U1 snRNA 5'端的碱基配对是 RNA剪接所必需的。 ?U2 snRNA和pre-mRNA分支点序列之间的配对在剪接中很关键。 ?其它的snRNA在剪接过程中也发生碱基配对。 ①体外实验表明,人工合成的的寡核苷酸与U1snRNA的5'末端区的杂交阻碍RNA剪接。②体内实验表明,pre-mRNA的5'剪接位点的突变(破坏碱基配对)阻碍RNA剪接,但这种剪接可以通过U1snRNA基因的补偿突变(这种突变使pre-mRNA5'剪接位点恢复碱基配对)得到恢复。结论:snRNA参与核蛋白复合体的构建,通过与靶位点RNA或snRNA之间的碱基配对来执行剪接功能。 3、剪接体剪接的过程1) 剪接体(spliceosome) 的组装剪接体是由5种snRNP和部分pre-mRNA组成的60S核糖核蛋白复合体.组装过程:①U1snRNA和U2snRNP与pre-mRNA的结合。 ②U4snRNA和U6 snRNP碱基配对形成与U5snRNP相连的复合物。③U4/U5/U6复合体与之前形成的U1/U2/pre-mRNA复合体相结合形成剪接体。 2)U1 和U4 snRNP的释放配对的snRNA和pre-mRNA的大量重排。3)第一次转酯反应pre-mRNA分支点A 2' COH和内含子5'末 端的磷酸基团形成2',5' C 磷酸二酯键。4)第二次转酯反应3', 5' C 磷酸二酯键连接两个外显子,同时 释放与 snRNP 结合的套索状内含子。5)内含子的降解脱支酶和其它核内RNase快速降解被 切除的内含子。 二、Ⅰ、Ⅱ类内含子的自我剪接(self-splicing)1、自我剪接内含子的发现在没有任何其它蛋白质的体外条件下一些纯RNA转录制剂能慢慢剪切内含子。这一观察认识到内含子的自我剪 接。 定义:内含子本身具有催化活性,内含子的切除不需要酶和 蛋白质参与,其形成特殊结构进行剪接,无需借助于 形成剪接体。包括Ⅰ类和Ⅱ类内含子。2、Ⅰ、Ⅱ类内含子Ⅰ类内含子主要存在于原生动物核rRNA基因中。 Ⅱ类内含子主要存在于植物和真菌的线粒体和叶绿体的 rRNA和tRNA 基因中。 3、特殊内含子pre-mRNA的剪接位点没有标准共有序列的内含子。这类内含子起始于AU和结束于AC,并不遵循正常的GUCAG 法则。除了4种特殊的、低丰度的snRNP和正常的U5 snRNP相互作用外,这种特殊内含子的剪接似乎是通过与剪接体相似的剪接循环来完成的。 4、Ⅰ类内含子的自我剪接 5、Ⅱ类内含子与snRNA的关系特征:所有Ⅱ类内含子折叠成一个保守 的二级茎环结构 。snRNA与pre- mRNA 5'和3'剪接位点之 间的配对以及snRNA之间的作用产生一个三维的RNA结构 。假说:Ⅱ类内含子自我剪接机制与pre-mRNA 剪接体剪接机制的相似性导致形成 snRNA与 Ⅱ类内含子功能类似的假说。 6、该假说的拓展早期真核生物的pre-mRNA内含子由内部RNA结构逐步丧失的Ⅱ类 内含子进化而来,它们同时演变成执行相同功能的反式作用snRNA。 支持该演化模型的证据:?突变的Ⅱ类内含子V区和部分Ⅰ区被删除。其RNA转录产物不能自我 剪接,但添加被删除了的RNA分子区域后,就能恢复自我剪接。这一 发现表明,Ⅱ类内含子中的这些区域可以反式作用,这与snRNA相似。 ?Ⅱ类内含子自我剪接机制与pre-mRNA的剪接体剪接机制的相似性也表 明,催化剪接反应的是snRNA而不是组成剪接体的蛋白质。 ?成熟酶可以稳定催化两次转酯反应的Ⅱ内含子RNA的三维结构,使 RNA快速剪接。由此类推,剪接体中的snRNP蛋白能稳定snRNA和premRNA中待剪接的内含子的精密几何结构。 三、反式剪接(trans-splicing ) ―一种mRNA的选择性剪接定义:把分别位于不同pre-mRNA中的外显子切下来后拼接为成 熟mRNA的过程 。常见于锥虫和眼虫 。 秀丽隐杆线虫10%~15%mRNA是用这种方法合成的。 反式剪接由snRNP加工完成,这种加工与单一pre-mRNA外显 子的剪接相似。 四、各类剪接因子的作用1、U2AF (U2-associated factor)? U2相关因子65 kD的亚基结合到内含子3'端附近富嘧啶区,并与U2 snRNP结合。 ? U2AF 35 kD的亚基结合到内含子3'端的AG二核苷酸上,也与邻近的 U2AF亚基相互作用。这两个U2AF亚基相互作用(通过促进U2 snRNP与分支点的相互作用)可以确定3'剪接位点。 2、SR蛋白人类基因组中,长内含子5'和3'剪接位点以及分支点的序列具有很大的简并 性,大量拷贝很可能随机发生。所以在具有长内含子的高等生物中需要附加 序列信息去界定需要剪接在一起的外显子。SR蛋白和外显子剪接增强子(exonic splicing enhancer,ESE)? ESE富含嘌呤核苷酸,位于其所调节的剪接位点附近 ,有助于吸引剪接因子结合到剪接位点上 ,是一种顺式调控元件。变更其位置可使剪接活性发 生很大改变,甚至使其转变成为负调控元件。 ?SR蛋白有一个或多个RNA结合域(RRM)和富含Ser、Arg残基的蛋白质相 互作用域,这些区域介导了 SR 蛋白与RNA、蛋白质之间的相互作用。在选 择 性 剪 接 中, SR 蛋 白 结 合 到 E SE 上, 促 进 U2 AF结 合 至 3' 剪 接位 点 或 U1snRNP结合至5'剪接位点。 跨外显子识别复合体SR蛋白通过蛋白-蛋白跨外显子的相互作用体系介导U1snRNP、5‘剪接位点和U2 snRNP与分支点的协同结合。SR蛋白、snRNP和其它的剪接因子(如U2AF)横跨外显子组装成复合体,该复合体被命 名为跨外显子识别复合体(cross-exon recognition complex),能精确界 定长pre-mRNA的外显子。 证据支持?干扰SR蛋白与ESE结合的突变尽管没有改变编码的氨基酸序 列,但能阻止跨外显子识别复合体的形成。结果,剪接时受影 响的外显子被跳过,经过加工后的mRNA中不包含该外显子。 在这种情况下产生的缩短了的mRNA要么被降解要么翻译成突 变体(异常功能的蛋白)。 ?引起人类遗传病的单碱基对突变中有15%的突变干扰了外显子 的正确界定。 ?在正常剪接位点的突变可能会干扰pre-mRNA与特定的hnRNP蛋 白结合,从而增强或抑制剪接。 3、RNA聚合酶Ⅱ的羧基末端域(carboxyl-terminal domain-CTD)?由大量的7肽重复序列构成。酵母RNA聚合酶Ⅱ的CTD充分扩展大约有 65nm长;人类的大约是其2倍。 ?超长的CTD使各种蛋白质能同时连接到单一的RNA聚合酶Ⅱ分子上。 ?RNA剪接和多聚腺苷酸化因子也与磷酸化的CTD结合。增强RNA加工的速 率和专一性。如SR蛋白。?最近研究结果表明,RNA剪接因子与磷酸化的CTD的结合促进了转录延伸。因此,链延伸与磷酸化的CTD和RNA加工因子的结合相关。这种机制可能 确保只有加工装置位于适当的位置pre-mRNA才合成。 4、核酸外切酶降解RNA被剪切的内含子、切割点下游区和多聚腺苷酸化位点均由核酸 外切酶降解,从RNA链5'或3'末端一次水解一个碱基。 外来体(exosome) 11种外切酶组成的蛋白复合体,按3'→5'水解核酸,其包括RNA 解旋酶(破坏碱基配对)。外来体似乎降解没有得到正确剪接或多聚腺苷酸化的pre-mRNA。目前尚不清楚外来体如何识别错误加工的pre-mRNA。 mRNA 自我保护机制?5'末端加帽子结构,核帽结合复合体的相互作用;?3'末端合成poly(A)尾巴; ?RNA与蛋白质相互作用。如hnRNP。 五、转录和RNA加工在细胞核内的定位转录和RNA加工主要发生在真核细核内分散的位点。实验证据 人类成纤维细胞的数字成像显微镜镜检揭示,大部分聚腺苷酸 化 RNA(即未剪接和部分剪接的pre-mRNA和核mRNA)被定位在核内的100 个 点上。红色荧光标记的poly(dT) 红色表示多聚腺苷酸RNA 蓝色DAPI荧光表示DNA绿色荧光标记的单克隆抗体 红色表示多聚腺苷酸RNA 箭头指示的是SC-35蛋白 这些数据表明,细胞核不是一个无组织的装载染色 质和执行染色体复制,转录以及RNA加工的蛋白质容 器。相反,是一个高度组织化的核基础结构。 一个知之甚少的包含多种蛋白质的纤维网络称为核基质,大部分DNA经高盐提取和消化后可在细胞核中观察到核基质。这种纤维蛋白网络可能有助于核的组 织,就像细胞骨架纤维有助于细胞质的组织。仍然需 要更多的去了解构成这个组织的分子机制和核加工后 的结果。 小结1、在真核细胞的细胞核中pre-mRNA的加工: 5‘端加帽、 3’端切 割 多聚腺苷酸化、RNA剪接等。 2、转录起始后不久,与RNA聚合酶II的磷酸化CTD相结合的加帽酶 给前体mRNA添加5'帽子。 3、大多数编码蛋白质的基因有一个保守的AAUAAA poly(A)序列 位于切割和多聚腺苷酸化的poly(A)位点的上游。位于poly(A)位 点下游富含GU或U序列有助于提高切割和多聚腺苷酸化的效率。 4、PAP的多蛋白复合体执行pre-mRNA的切割和多聚腺苷酸化。一个 核内的poly(A)结合蛋白(PABPII)刺激PAP添加A残基,增加至200-250个A残基。 小结5、通过碱基配对,5种不同的snRNP和pre-mRNA形成剪接体催化两次转酯反应,连接两个外显子和删除套索状 的内含子,随后被降解。 6、pre-mRNA加工因子与RNA聚合酶II 的CTD的结合刺激链延伸。这种偶联确保只有其加工装置准备就绪,pre-mRNA才能合成。7、与ESE结合的SR蛋白对界定高等生物pre-mRNA的外显子至关重 要。 8、snRNA是由Ⅱ类自我剪接内含子进化来的。9、切除的内含子主要由包含11个3‘ → 5’核酸外切酶以及 RNA解旋酶的多蛋白复合体,即外来体降解。外来体也降解错误加工 的pre- mRNA。
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