ECL发光液_百度文库
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&&ECL发光液为普通的ECL发光液,比DAB显色灵敏度高数百倍以上,比Amersham的ECL发光液灵敏度高几十倍以上。可允许30min~12h曝光以检测目的条带。ECL敏发光液衰减较慢,15min内荧光几无减弱,检测时产生的非特异背景非常低,也可节省抗体和待测样品的用量,该试剂可用于PVDF膜和NC膜(硝酸纤维素膜)的Western blot免疫印迹等印迹发光显色
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ECL发光液使用说明
ECL 显色原理：鲁米诺在免疫测定中既可用作标记物，也可用作过氧化物酶的底物。在Ecl底物中，含有H2O2和鲁米诺，在HRP（辣根过氧化物酶）的作用下，发出荧光来。产品描述：ECL化学发光超敏显色试剂盒用于检测直接或间接标记辣根过氧化物酶（HRP）的抗体及其关联的抗原。其原理是，蛋白质或核酸在电泳后转移到印迹膜上，以一抗及HRP标记的二抗结合膜上的目的蛋白，或以HRP标记的探针直接或间接结合膜上的核酸。洗膜后用本产品配制的ECL工作液，室温孵育膜数分钟，将印迹膜用保鲜膜包被粘贴固定于X光片曝光暗盒。然后转入暗室将X光胶片压在膜上曝光数秒到数小时，显影定影后蛋白质或核酸条带可清晰显示在X光胶片上。采用独特的发光底物系统，降低曝光背景的同时引入新型的氧化剂，大大提高试剂盒的稳定性，使其在室温能稳定放置一年。除用于X光片，还可直接使用荧光CCD扫描，主要用于WB检测以及化学发光免疫检测系统。优势:& &● 极高灵敏度：可检测低至10-100pg级的抗原& &● 极高信噪比：优化配方，背景很低& &● 极高性价比：节省一抗和二抗，缩短实验周期，降低经济和时间成本& &● 极高稳定性：持续发光时间长，4℃条件下保存时间可达6个月以上& &● 可对X光胶片曝光，也可直接进行luminometer检测或者荧光CCD扫描。试验步骤：& &1.&执行常规电泳、转膜、HRP标记抗体或者HRP标记核酸探针孵育、洗膜。常温操作即可。& &【注】：ECL发光液是HRP的显色底物，因此检测系统最终必须基于HRP酶标记抗体或者核酸探针。& &2. 最后一次洗膜的同时，新鲜配制发光工作液：分别取等体积的A液和B液1：1混合，混匀后，室温放置备用。& &【注】：取A液和B液一定要用不同的枪头；另建议立即使用工作液，室温放置数小时后仍可使用但灵敏度略有降低。（100~200&l发光工作液/cm2膜）& &3. 用平头镊取出膜，膜的下缘轻触在滤纸上除去多余洗液（勿使膜完全干燥）。将膜完全浸入发光工作液中，与发光工作液充分接触。室温孵育1-3分钟，准备立即压片曝光。& &【注】：孵育时间过长不会增加灵敏度，有时还会导致曝光条带异常。发光过程的本质是酶促反应，使用过少的发光工作液不利反应进行，也会导致膜上条带曝光不均和明显降低灵敏度。为达节约目的可将膜剪小，但勿降低发光液使用比例。& &4. 用平头镊子夹起膜，膜的下缘轻轻接触吸水纸，去除膜上多余的液体，留下少量工作液，不可让膜完全干燥。& &5.将膜迅速包裹于洁净的保鲜膜里，去除气泡和皱褶，用滤纸吸去多余的发光工作液。用胶带将覆盖印迹膜的保鲜膜固定在暗盒内，蛋白带面向上。& &6. 暗房内取一张X光胶片至于包裹的膜上，压片，分别曝光不同的时间，如数秒到数分钟，定影显影冲洗。& &【注】：曝光时间需根据曝光强度做相应的调整。若是背景过高，可使用两张X光胶片同时压片。注意事项：& &1）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。& &2）步骤1～5可在日光灯下操作；但发光液曝露于强光下时间过久灵敏度可能略有降低，移到暗房操作可避免。戴手套可以避免在膜上留下手印，保持膜的干净。& &3）长时间曝光或蛋白过量，将加深背景并使条带强弱变化失去线性关系。曝光不足则条带模糊。& &4）发光工作液孵育约3分钟后膜上的条带发光。强条带发光在暗房中肉眼可见，低丰度蛋白条带发光较弱甚至肉眼不可见但可使X光胶片曝光。不能简单以肉眼观察判断条带发光时间。肉眼不可见的荧光实际上可持续数小时并使X光胶片感光，因此弱带可曝光1-10小时。如果曝光后条带不佳，可用洗膜缓冲液洗膜，重新孵育二抗，然后重新用ECL发光和曝光。& &5）由于发光液灵敏度高，抗体浓度过高将造成高背景或没有条带，导致失败，所以要适度优化抗体浓度。& &6）某些保鲜膜包裹印迹膜时可能会淬灭荧光，应选择高质量保鲜膜。& &7）避免将多张膜置于同一个洗膜盒内洗膜，相互吸附或摩擦可能造成很深的背景。& &8）使用肉眼可见的预染色蛋白Marker和荧光-放射自显影曝光标签可精确确定胶片上条带的位置和大小。& &9）使用生物素-亲和素系统，避免使用牛奶封闭，可能会导致背景过高。& &10）金属氧化物颗粒可能会造成膜上出现颗粒状斑点，避免使用带有锈迹的剪刀以及镊子，建议使用塑料的平头镊子。& &11）叠氮化钠（NaN3）能抑制HRP活性，若回收HRP标记探针或者抗体应避免使用NaN3，如必需使用勿超过0.01%。& &12）本品无特殊毒性，按普通化学品处理。&货号产品名称规格abs920超敏ECL化学发光检测试剂盒2*25mlabs921超敏ECL化学发光检测试剂盒2*50mlabs920B-500超敏ECL化学发光检测试剂盒2*250ml&爱必信特色产品线：生化试剂（60万种）、抗体（10万种）、细胞因子、二抗、ECL发光液、蛋白marker、激动剂、抑制剂、凋亡试剂盒、BSA、动植物提取物、蛋白酶K...&
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最好的ECL发光液，灵敏度高，发光持续时间长，100%不淬灭
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超敏ECL发光液
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3秒自动关闭窗口实验室需要用大量ECL发光液，有谁知道哪家的价格低些，效果也要差不多的_百度知道
实验室需要用大量ECL发光液，有谁知道哪家的价格低些，效果也要差不多的
我有更好的答案
我们实验室用engreen的ECL发光液，敏感度高，背景低，，感觉还可以，我们是老客户价格也可以，不知道新客户价格。希望帮助到你
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