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【求助】4%多聚甲醛固定液如何配置呀，网上的配法真多，真心混乱呀，还有溶解问题？求解，多多交流
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这个帖子发布于3年零92天前，其中的信息可能已发生改变或有所发展。
4%多聚甲醛固定液如何配置呀，网上的说法太多了，有点混乱，求解，谢谢大家
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丁香园助理版主
分别都有哪些说法？通常就是PFA粉末PBS进行稀释即可。
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推荐用0.1m/l的PBS加上多聚甲醛粉末，先将PBS溶解后加入多聚甲醛粉末加热至60度搅拌溶解这个时间要蛮久，我们一般直接在烘箱里面过夜，溶解后调PH值，然后定容即可。
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甲醛粉末加进去后，滴加几滴NaOH，60度，磁力搅拌器搅拌，大概1个多小时即全部溶解。（部分国产的要稍慢，进口的不到1小时）。再加pbs，调pH值，定容。略偏碱可促进甲醛溶解。做去吧。lml利 wrote 推荐用0.1m/l的PBS加上多聚甲醛粉末，先将PBS溶解后加入多聚甲醛粉末加热至60度搅拌溶解这个时间要蛮久，我们一般直接在烘箱里面过夜，溶解后调PH值，然后定容即可。
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&【求助/交流】4%的多聚甲醛固定液（Ph 8—9）怎么配
【求助/交流】4%的多聚甲醛固定液（Ph 8—9）怎么配
作者 woodymm
各位大虾们：
& && & 我在做公鸡的联会复合体实验，其中需要用4%的多聚甲醛进行固定，在文献中有看到鸡需要的是Ph 8-9的4%多聚甲醛，我不知道怎么配，希望大家不吝赐教哈。
PS：4%多聚甲醛用于固定的PH值大概都在多少啊？我有看到很多文献中不指出PH值的，是不是按照配方配后值都一样的啊？若有PH值7.3的配方，我要PH 8的，是不是光用NaOH调一下就可以了啊？
& && & 跪谢各位了。
PBS(pH 8-9)：140 mM NaCI, 2.7 mM KCI, 10 mM Na2HPO4 ,
1.8 mM KH2PO4
& && && && & ( Boehringer Mannheim in situ manual, Page 128 )
& && &&&10×PBS 1000ml&&配方：
& && && && && && && &&&NaCI& && && & 81.8 g
& && && && && && && &&&KCI& && && &&&2.0 g
& && && && && && && &&&Na2HPO4&#O& &26.81 g
& && && && && && && &&&KH2PO4& && && && && && & 2.45 g
& & 800mlddH2O溶解后pH 值6.8，用10N NaOH 调整至pH8-9。定容，过滤，高压灭菌。室温保存。
⑵ 4% 多聚甲醛：300 ml配方
& && && && &10×PBS& && && && &30 ml
H2O& && && && && &&&270 ml
固体NaOH& && && & 0.18 g
& && && && &Triton X-100& && & 300μl （ 终浓度为0.1%，可选项）
三角瓶中加入300 ml的 1×PBS，然后置天平上称取固体NaOH，摇动溶解，微波炉加热（600W, 2分钟，一般为60℃）。三角瓶复置于天平上称取多聚甲醛12 g，加入300μl triton（可选），封口，摇至清澈*，冰上冷却至室温，加浓硫酸 调pH至8-9，
引用回帖:Originally posted by lixg at
⑴ PBS(pH 8-9)：140 mM NaCI, 2.7 mM KCI, 10 mM Na2HPO4 ,
1.8 mM KH2PO4
& && && && & ( Boehringer Mannheim in situ manual, Page 128 )
& && &&&10×PBS 1000ml&&配方：
& && && && && && && &&&NaCI&&... 谢谢啦。那调整PH的时候可不可以用别的酸，比如盐酸什么的啊？这个应该没有影响的吧？
引用回帖:Originally posted by lixg at
⑴ PBS(pH 8-9)：140 mM NaCI, 2.7 mM KCI, 10 mM Na2HPO4 ,
1.8 mM KH2PO4
& && && && & ( Boehringer Mannheim in situ manual, Page 128 )
& && &&&10×PBS 1000ml&&配方：
& && && && && && && &&&NaCI&&... 我还想问下，步骤中加入NaOH加热溶解，再加多聚甲醛的时候还是继续在60度中加热溶解吗？另外， Triton X-100 在这个实验中的作用是什么？谢谢了哈。
1. 可以用盐酸
2.利用余温即可溶解多聚甲醛
3.triton x-100为表面活性剂，作用是有利于固定剂均匀展布于样品表面。
先配你需要PH值的PBS缓冲液，浓度为终浓度的两倍，配方随便Google一下就能找到。
然后配8%PFA水溶液，称取相应质量的PFA，放在水中40度水浴，向里面慢慢加入10N氢氧化纳溶液，加一滴要多震荡几次，不要加多了。直到PFA全部溶解。
将两者等比例混合。
也可以直接用一倍浓度的对应PH值的PBS去溶解PFA，40度水浴几个小时也可以溶解
引用回帖:Originally posted by lixg at
1. 可以用盐酸
2.利用余温即可溶解多聚甲醛
3.triton x-100为表面活性剂，作用是有利于固定剂均匀展布于样品表面。 谢谢你哈。
引用回帖:Originally posted by lzhwin at
先配你需要PH值的PBS缓冲液，浓度为终浓度的两倍，配方随便Google一下就能找到。
然后配8%PFA水溶液，称取相应质量的PFA，放在水中40度水浴，向里面慢慢加入10N氢氧化纳溶液，加一滴要多震荡几次，不要加多了。直 ... 谢谢你哈
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【求助】4%多聚甲醛固定神经细胞的时间，能否过夜
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原代小鼠皮层神经元培养处理以后，有几个时间点，要用免疫荧光观察。能否用4%多聚甲醛固定后放置4°冰箱保存。最后再一起进行荧光试验？固定时间过长会有什么影响，尤其是否会影响神经元的形态？
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通常固定15分足矣，放在PBS可以保存几天的！
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nogojin 通常固定15分足矣，放在PBS可以保存几天的！ 谢谢！我在园子里搜索了一下，观点大概跟你的相似。1、有园友认为，多聚甲醛长时间固定会造成抗原丢失。甲醛或多聚甲醛都会对抗原进行交联，固定时间越长，交联越多，封闭的抗原越多，导致免疫组化时假阴性，特别是细胞免疫组化，固定液直接接触细胞，细胞免疫组化固定时间一般就10分钟左右。2、还有园友认为，“一般用4%多聚甲醛固定15分钟，固定好之后凉干，4摄氏度冰箱中可以储存几个月”。关于他说的晾干，你同意吗？我们在做细胞免疫荧光的过程中，一直强调不要干片，我也不知道为什么不能干片呢？3、我自己这次做实验得到的经验是，有一组细胞，用多聚甲醛固定，冰箱保存过夜，发现不影响免疫荧光的结果。另一组细胞，多聚甲醛固定2个小时后，PBS洗干净放冰箱保存，实验结果也不受影响。但是最好的方法如你所说，还是很固定15-20分钟就好了，长时间固定可能还是会有影响吧。
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你很善于学习！给你个赞！
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【求助】多聚甲醛固定细胞 上流式 请教，谢谢！
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&求助，最近在做流式细胞检测，遇到问题了，想求助大家，谢谢！我的操作是：将所需要的细胞用抗体染色后，离心，洗涤，弃上清，直接在细胞中加了150ul的4%的多聚甲醛固定细胞，然后隔夜直接去上的流式，但是结果很差，细胞碎片很多，收集的细胞数特别少，结果不理想。1、用多聚甲醛怎么固定细胞，然后上流式检测，想知道具体步骤，谢谢!2、多聚甲醛的浓度应该是多少？3、加多聚甲醛之前用不用在悬浮细胞中加PBS
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我也用多聚甲醛固定，最好加多一点一毫升左右吧，最好不要过夜，常温避光二十分钟就好。我以前过夜过，形态一塌糊涂，四度还是常温都不行。
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我做流式的时候从来没有等到过夜才拿去上机，我每次都是染好了之后就上流式，这样会好很多，细胞状态好，用来洗细胞的buffer最好是加1%的血清，这样上流式的时候细胞还是活的，不至于死掉。
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多聚甲醛是最常用的固定剂，原理是交联后固定蛋白形态；其它的固定剂还包括戊二醛，甲醇，乙醇等。有一些结合染料会特别注明不能用多聚甲醛固定，比如PI。细胞染色，一般细胞膜表面的分子，不需要固定；如果需要染细胞内的分子，37摄氏度固定10-30分钟，4摄氏度固定1h即可。
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4%多聚甲醛固定微生物样品的原理
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