新手求助鱼缸反气举的问题，老G快来
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本帖最后由 最爱李云龙 于
23:56 编辑
本人养锦鲤一年多了，今年4月份刚换的鹦鹉和地图养，因为能吃能拉，所以原来成品缸改造的上虑不够用了，所以自己DIY个反气举，75宽，50cm高的，用了一个下午发现鱼发蔫了，赶紧弄下来，打氧等，才好一些。自己总结经验，是不是因为反气举把上虑的下水口接住了，所以导致鱼缸缺氧，虽然反气举里有打氧，但是好像没有往水里打氧。不知道是不是这样的，是不是要买个双头增氧泵，一口在反气举里用，一口在鱼缸里正常打氧。老G在吗？各位高手在吗，帮忙解答。
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本帖最后由 lhmilym 于
21:42 编辑
气举的功率太小，你可以搜搜我的发的帖子，有个带水泵的底滤，你可以考虑下(^_^)Y
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反气举有融氧并和缸内是互通的，不应该缺氧，按楼上说的，换个大气泵，另外找找别的什么原因，是不是PVC管气味重？
谢谢老G，是否还要静音买个双头增氧泵，效果会更好一些。&
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GPC 发表于
反气举有融氧并和缸内是互通的，不应该缺氧，按楼上说的，换个大气泵，另外找找别的什么原因，是不是PVC管气 ...
补个问题，我的反气举能装2斤环，过滤效果咋样。加上后是不是会增加很大效果。
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祝你的鱼儿活蹦乱跳
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主题：【求助】GPC软件测分子量
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发表于： 23:12:48
请教高手：我现在在用waters 2414 示差折光检测器 美国奥泰的SEC/GPC软件，测定羟乙基淀粉130重均分子量(Mw)标准中规定是用5个重均分子量(Mw)与保留时间做标准曲线，标准品和样品浓度都是5mg/ml,然后测定样品分子量(Mw)现在的测定结果普遍偏高（与原料厂家的检验报告单相比），厂家说是能校正下标准曲线是否正确：就是做完标准曲线后再回头去处理标准品图谱，计算出来的值(Mw)与标准品的分子量比较，我照他们说的做了发现会差到2万左右，且分子量越大的部分，误差越大但是软件的工程师说是这样校正本身就是有误差的，说是用标准曲线重新计算出来的结果(Mw)是片段积分得到的，与原来的分子量会有误差要是照工程师的说法，那这个方法本身是不合理的，个人理解还是应该用峰值分子量（Mp）与保留时间做标准曲线比较合理好像国内一般用的都是用重均分子量(Mw)做标准曲线，连中检所培训的都是北京龙智达的GPC软件都说是进样浓度不参与计算，与测定分子量无关，但个人认为凝胶色谱的原理是分子孔径使分子量从大到小依次流出，如果进样浓度过大，孔径填满后，小分子物质也不能被有效保留，从而与大分子物质一起流出，应该会产生检测误差，请教一般凝胶色谱的进样浓度是多少？请问有高手也碰见过这样的情况吗？请指点下小弟，不胜感激！！！
Last edit by flyaway
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楼主说的似乎有道理，浓度应该是有一个上限的，你可以参照下药典里边用到ＧＰＣ测分子量的一些内容．
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请高手指点& 大家谁做凝胶色谱 发现测定重均分子量（Mw）误差大吗？我看坛子上有说误差在10%是可以接受的 ，但是超过限度了怎么办，我的就是超过限度大约几千到一万
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关键是你的标品与样品的浓度肯定应该接近才对
tigertooth
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国内很多用户都用的是Wyatt公司的多角度激光光散射与GPC连用测羟乙基淀粉的分子量，包括中检所。关键问题在于你用的标样与你的样品分子的构象不同，所以测试有误差。
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原文由 tigertooth 发表:国内很多用户都用的是Wyatt公司的多角度激光光散射与GPC连用测羟乙基淀粉的分子量，包括中检所。关键问题在于你用的标样与你的样品分子的构象不同，所以测试有误差。请问构象不同是什么意思？标样也是厂家提供的 是厂家自己生产的 然后再送去 用激光光散射 标定的Mw，是一样的吧& 另：我的标样和样品浓度都是 一样的&
5mg/ml谢谢了！
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tigertooth
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我们一般所说的GPC又叫SEC-尺寸排阻色谱，顾名思意，靠分子尺寸分离样品，是相对方法，结果对标样和仪器的系统依赖很大。GPC测试的主要问题是样品在溶液中的构象也就是尺寸，样品在溶液中的构象大致可以用三种类型区分：棒状-刚性；无规线团和球状。相同分子量下，棒状的分子在溶液中排阻体积最大，最早出来，球状的最小最晚出来。所以用GPC要想算的准，首先就是标样问题，你们用得是什么标样？是中检所的多糖标样如右旋糖苷，还是用激光标过的羟乙基淀粉做标样？
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原文由 tigertooth 发表:我们一般所说的GPC又叫SEC-尺寸排阻色谱，顾名思意，靠分子尺寸分离样品，是相对方法，结果对标样和仪器的系统依赖很大。GPC测试的主要问题是样品在溶液中的构象也就是尺寸，样品在溶液中的构象大致可以用三种类型区分：棒状-刚性；无规线团和球状。相同分子量下，棒状的分子在溶液中排阻体积最大，最早出来，球状的最小最晚出来。所以用GPC要想算的准，首先就是标样问题，你们用得是什么标样？是中检所的多糖标样如右旋糖苷，还是用激光标过的羟乙基淀粉做标样？果然是高手！！！我们用的的是激光标过的羟乙基淀粉，是Mw分子量,现在发现误差特别大,而且是测出来的值普遍偏高,中检所的多糖标样能用来测羟乙基淀粉吗?
tigertooth
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ID：tigertooth
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中检所的多糖标样好像误会差更大，所以他们也不用普通GPC法。你用激光标过的羟乙基淀粉作为参照时，你用的是哪个值，平均Mw吗？你用了几个羟乙基淀粉参照？多用几个不同分子量的试试。另让提供数据的厂家给你峰尖（示差信号）分子量作为参考。
viscotektegent
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ID：viscotektegent
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你的标准样品可能有问题。对于传统标定法GPC来说，在做标准曲线时，应该采用单分布的标准样品，也就是说，其重均分子量与数均分子量的比值应该是1，或者是1.0几，这样可以近似认为是1。此时，标准样品的色谱峰很窄，峰值分子量Mp近似与重均、数均相等，再用其峰值分子量做成标准曲线，然后再进样分析你的样品。如果你的样品分布较宽，那么软件算出来的分子量当然是积分出来的！此时，你可以看一下峰形是否对称、有无拖尾现象，并且可以用峰值分子量Mp值来大致看一下分子量情况。如果峰形很好，很对称、前面没有“鼓包”后面拖尾现象，那么说明色谱柱上的分离可能还是不错的，此时也可以用峰值分子量大致作参考。另外，我了解的情况是，中检所那边的光散射好像是一些较低档次的产品吧？既不是真正的脱机的大型的光散射仪，也不是好的与GPC联机使用的光散射检测器，属于“展示品”，所以只能对分子量小于5万、10万的样品测一测还凑合，分子量越大，误差越大。超过1百万Dalton，多角外推法激光散射技术就不太适用了，小角激光就是优势明显了。对于传统GPC，误差在10%以内其实是可以容忍的。本来就因为影响因素太多，近似于“瞎做”，您还能要求什么呢？呵呵，不过也别灰心，如果样品比较固定，就是那么一种或者几种，也比较干净，流动相/溶剂也比较好，那么重现性还是可以的。当然，这与操作者的实际操作水平有关。
tigertooth
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1，楼上的那位说这么多一点也没有意义。多糖根本就没有单分散标样。2，请先搞清楚高分子的角度依赖性和Zimm图再说小角好还是多角好。小角的能做Zimm图吗？小角检测器加池前过滤，经过过滤还能做多大分子量的样品？剪切作用后样品分子量降低了，那还是样品真正的分子量吗？3，中检所的是18角的。24小时热门版块排行榜&&&&
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求助 如何做好GPC标准曲线？
新手上路，又无人指导，在国外，盼高手不吝指教。
GPC仪器是岛津，
分析条件; 溶剂THF， 流速1.0ml/min，有四根柱子。
标样的浓度是20 mg/ml，有5个，， ， 17000。
每次进样5ul.
自己的样品大约在左右。
自己制作了几次标准曲线，怎么总是有相差呢？请指教哪些地方操作不对！
附上刚做的标样图谱。
0801-2.jpg
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引用回帖:: Originally posted by
你好，我最近也刚好在使用岛津的GPC仪器。看了你的疑问，我也说说我的看法，大家互相探讨探讨嘛。第一，你的样品浓度是不是太大了啊？我标样浓度一般都是在1 mg/mL左右的，但是进样量比你的大（30 uL），峰强度也有 ... 非常感谢你提出的宝贵建议。
我做了如下的尝试；标样一套有12个，我取了前10个，每个配成2mg/ml的溶液，然后分成两组，1，3，5，7，9为一组，2，4，6，8，10为一组，这样分开测，锋能得到完全分开。进样量为80ul, 最大锋高能到15mV，然后作出标准曲线，另外我也用进样量为40ul来检测锋的重现性。这样做出来的标准曲线，我自己也能相信它了。以前老板总是问我得出的数据有没有信誉度。
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引用回帖:: Originally posted by koukaidei at
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0801-2.png 检测器是RDI
(知名作家)
散金: 3502
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注册: 专业: 应用高分子化学与物理
【答案】应助回帖
★ 感谢参与，应助指数 +1紫百合LYL: 金币+1, 感谢应助
图不是很清楚。作标准曲线需要找到每个标样的峰值淋洗体积（时间），然后用logMp对淋洗体积作图，用多项式进行拟合，得到的多项式即是GPC标准曲线。其中，Mp为标样峰值分子量是Mn乘Mw开根号。
南无阿弥陀佛！
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主题：[求助]大家的GPC图横坐标用的是什么？
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ID：phillis
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发表于： 11:21:00
保留时间？保留体积？还是分子质量？
Last edit by lxdongzi2003
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保留时间或体积！
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ID：phillis
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谁家GPC曲线横坐标采用分子质量？为什么多数GPC软件，横坐标都是保留时间？为什么不是分子质量？请名家指点迷津。谢谢
tianru的爸爸
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ID：lxdongzi2003
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用保留时间/体积，加上从检测器上得到信号，可以直接得到谱图。如果要换成分子量的横坐标，先要用标准品换算一次时间/体积，然后再测试。而要矫正标准曲线时，整个横坐标都要变，肯定不方便。如果先编一套软件，就比较简单了，你的要求就可以达到了。
Last edit by mcds
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一般都是保留时间
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Agilent GPC软件的横坐标是分子量。
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ID：flyaway
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ID：qinxj1980
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Agilent的软件横坐标是流出体积，纵坐标是强度。当流速是1.0ml/min时，横坐标液可以说是保留时间了，分子量的根据流出时间的长短来判断分子量的高低，分子量大的物质先流出。
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ID：tina_sz
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怎么好像说什么的都呢?那位专业人士给个统一的正确的回答?我看到的Empower的GPC横坐标是时间,纵坐标是Mv.
viscotektegent
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是真的吗？Agilent的GPC只是传统的示差折光检测器GPC，一般用传统的标准曲线法测定相对分子量，是用样品的峰值分子量在标准曲线上找对应的点，即为其分子量，有什么必要把横坐标转换成分子量呢？在标准曲线上找不是更简单吗？而且也不可能这样转换吧？否则，分子量分布怎么表示啊？特别是宽分布样品。一般地，横坐标都是保留时间/体积，光散射法是纵坐标表示分子量大小，普适标定法是横、纵坐标结合来计算分子量的。
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&&色谱新手求助，外标法测定标准曲线取绝对面积为纵坐标，如果出现平头峰可以吗？
色谱新手求助，外标法测定标准曲线取绝对面积为纵坐标，如果出现平头峰可以吗？
如题，本人最近在做的检测，可是用外标法做标准曲线时，所得图有平头峰，就想用绝对峰面积为纵坐标，不知道这样是否可行呢？听人说出现平头峰的话做定量不准确？
可是平头峰是溶剂峰，这个也会有影响吗？
那就是说如果说在图中出现了平头峰就不能用来做定量吗，
哦，关于这个您很确定吗？因为这可能会影响我后续的实验过程，所以想再确认一下，没有别的意思，见谅！
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