[转载]SDS-PAGE相关溶液的配方（10%过硫酸铵、5&电泳缓冲液
10%（W/V, g/ml）过硫酸铵（APs）的配制：（1 ml）
1. 称取0.1 g过硫酸铵；
2. 加入1 ml的去离子水，将固体粉末彻底溶解；
3. 贮存于4℃。
注意：10%过硫酸铵最好现配现用，配好的溶液在4℃保存可使用2周左右，过期会失去催化效果。
5&Tris-Glycine电泳缓冲液的配制：（1 L）
1. 称取Tris粉末15.1 g、Glycine（甘氨酸）94 g、SDS 5.0 g；
2. 加入约800 ml的去离子水，搅拌溶解；
3. 加去离子水定容至1 L，室温保存。
注意：加水时应让水延着壁缓缓流下，以避免由于SDS的原因产生很多泡沫。
5&SDS-PAGE Loading Buffer的配制（方案一）：（5 ml）
（本方案摘自Takara网站）
组分：Tris-HCl& pH6.8（250 mM）；SDS
（10%）；溴酚兰（0.5%）；甘油（50%）；β-巯基乙醇（5%）
配制过程：
1. 量取1M Tris-HCl （pH6.8） 1.25 ml；甘油2.5 ml；称取SDS固体粉末0.5 g；溴酚兰25
2. 加入去离子水溶解后定容至5 ml；
3. 小份（500 μl）分装后，于室温保存。
4. 使用前将25 μl的β-巯基乙醇加入到每小份中去。
5. 加入β-巯基乙醇的上样Buffer可以在室温下保存一个月左右。
5&SDS-PAGE Loading Buffer的配制（方案二）：（10 ml）
（本方案摘自《蛋白质技术手册》汪家政、范明）
组分：Tris-HCl& pH6.8（60 mM）；SDS
（2%）；溴酚兰（0.1%）；甘油（25%）；β-巯基乙醇（14.4 mM）
配制过程：
1. 量取1M Tris-HCl （pH6.8） 0.6 ml；50%的甘油5 ml；10%的SDS溶液2 ml；1%的溴酚兰1
2. 加入去离子水定容至10 ml；
4. 在4℃可保存数周，-20℃可保存数月之久。
以上两种上样Buffer的配方不太一样，你还可以参考下面这个配方
2&SDS凝胶加样缓冲液& 组分（摘自《分子克隆》第三版）
Tris-HCl& pH6.8（100 mM）；SDS
（4%）；溴酚兰（0.2%）；甘油（20%）；β-巯基乙醇或二硫苏糖醇（200 mM）
不含硫代试剂的加样Buffer可在室温保存。β-巯基乙醇或二硫苏糖醇临用前加入。
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硫酸亚铁铵的制备及组成测定
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硫酸亚铁铵的制备及组成测定
官方公共微信[发明专利]一种单组份TMB显色液的终止液及其制备方法有效
申请/专利权人：
公开/公告号：CNA
发明/设计人：;;;;;;;;;;
公开/公告日：
主分类号：
搜索关键词：
【说明书】：
技术领域本发明涉及生物体外诊断试剂,特别是涉及一种单组份TMB显色液的终止液及其制备方法。背景技术体外诊断试剂领域的酶联免疫法(ELISA)检测技术中，常使用TMB(3,3',5,5’-四甲基联苯胺)作为HRP(辣根过氧化物酶)显色底物。相对其它显色底物而言，TMB以显色高效、无毒、不致癌、稳定性好等特点成为ELISA检测的主流显色剂。在ELISA检测时，HRP酶催化过氧化物释放出氧使TMB被氧化成蓝色的产物，加入酸性的终止液终止反应后，蓝色溶液变成橙黄色，在450nm波长有最大吸收峰。终止的原理：以硫酸为主要成分的终止液为例，加入终止液后，一方面，硫酸破坏了HRP酶的活性，使酶的催化功能丧失；另一方面，由于pH降低，可使蓝色的阳离子根转变为黄色的联苯醌，联苯醌在波长450nm处有最大消光系数。如不及时终止反应，本底会同时加深，进而影响结果的正确判断，故终止对ELISA具有重要意义。目前ELISA试剂盒中，TMB的终止液主要有酸和碱两类：酸类主要为盐酸及硫酸，而碱类则为NaOH及SDS(十二烷基硫酸钠)。NaOH由于易与空气中的二氧化碳反应产生变质，而较少应用；至于1％SDS(十二烷基硫酸钠)虽有论文进行过研究，但由于其终止后有较强的褪色作用，结果不稳定，基本仅停留于实验室使用。对于酸类中的盐酸，浓度多为1％或2M(即mol/l，下同)，终止效果尚可，但由于盐酸易挥发，多次开盖会使溶质减少，进而影响终止液的终止效果及检测精密度，故商品化应用不多。硫酸作为终止液的主要成分，由于稳定、易获取、廉价等优点逐渐成为主流。其所配制的硫酸浓度各异，包括最高达2M，最低为0.2M。而终止液的具体加量：一般双组份TMB底物液各加A与B液50μl后，再加2M的终止液50μl；而对于单组份TMB底物液，则多采用0.2-0.8M的更低浓度硫酸作为终止液，而与TMB加量相同，例如100μl的TMB底物液，加入100μl的终止液。对于传统的2mol/l的硫酸终止液，多用于双组份TMB，较少应用于单组份TMB中。原因有：(1)单组份TMB中的TMB含量较双组份中的低，故不需高达2M的硫酸来终止，过量的硫酸反而会使本底加深，导致阴阳性对比度较差，最终读数不稳定。(2)2M的硫酸有较强的腐蚀性，对操作者易造成伤害。(3)使用剩余的终止液对环境产生了危害。故现在更多是使用低浓度的硫酸作为终止液，如0.2-0.8M。基于低浓度的硫酸即稀硫酸在常温条件下可稳定保存，故其可直接保存于常温，在冬季时，特别是广东、海南及台湾省以外的省份，冬季实验室保存或运输时多在0℃以下，易使室温保存的终止液产生冻结；此外，在控温不稳的冰箱冷藏层，终止液也可能出现冻结。冻结的终止液有以下缺点：解冻需要耗费时间；如未完全融化、不均匀会导致硫酸的浓度产生变化，影响实验精密度。单组份TMB显色液日趋成为商品化ELISA试剂盒主流，目前很少有专门针对单组份TMB显色液的终止液。发明内容本发明要解决的技术问题是提供一种专门针对单组份TMB显色液的终止液，其作用高效且可稳定的保存于四季室温。本发明提供了一种单组份TMB显色液的终止液，包括硫酸和二乙二醇。所述硫酸的浓度为0.3-0.5mol/L，所述二乙二醇的重量体积比为3-5％。所述硫酸的浓度为0.4mol/L，所述二乙二醇的重量体积比为3％。本发明还提供了一种含有硫酸和二乙二醇的组合物的用途，用于单组份TMB显色液的终止液的制备。组合物中所述硫酸的浓度为0.3-0.5mol/L，所述二乙二醇的重量体积比为3-5％。组合物中所述硫酸的浓度为0.4mol/L，所述二乙二醇的重量体积比为3％。本发明相比现有技术具有如下优势：(1)本发明单组份TMB显色液的终止液是专门针对单组份TMB底物液设计的，终止后不产生沉淀，1小时内读数仍稳定。(2)本发明单组份TMB显色液的终止液采用的是低浓度的硫酸，可以减少对操作者的伤害，并且可以降低对环境的危害。(3)本发明单组份TMB显色液的终止液具有防冻设计，通过其含有的特有防冻成分与低浓度的硫酸以一定比例组合使用，作用高效，且在冬季低温环境使用而不冻结，更加稳定和可靠。具体实施方式本发明提供了一种单组份TMB显色液的终止液，包括如下浓度的各组分：硫酸0.3-0.5mol/L二乙二醇3-5％(w/v)所述硫酸的浓度为0.3M及以上，可确保足量的硫酸用于终止，同时也维持一个较强的酸性环境，抑制微生物的生长。而硫酸的浓度为0.5M以上时，终止后的稳定性不够，易引起读数的变化。如高值样本时，可能带来部分沉淀，故选择0.3-0.5M。所述二乙二醇，也称一缩二乙二醇、二乙二醇醚或二甘醇。能与乙醇、乙醚、丙酮和乙二醇混溶，不溶于苯和四氯化碳，溶于水。味辛辣并微甜，有吸湿性。由于部分抗冻成分易造成终止反应的干扰。故在抗冻剂的类型及其浓度上的选择上需要特别慎重，如甘油等物质量大时粘度增大，不利于终止反应的高效进行。而二乙二醇则不会对ELISA的终止造成干扰，有与甘油相当的抗冻效果，可满足常见的近零摄氏度的抗冻的情况，如-5℃至0℃；同时其安全性较好；其浓度选择为3-5％(w/v)时更有利于终止反应的高效进行。本发明还提供了上述单组份TMB显色液的终止液的制备方法，包括如下步骤：取16.0-26.8ml(即0.3-0.5mol)的硫酸，加入800ml的去离子水，再在其中加入26.9-44.8ml(即30-50g)的二乙二醇，用去离子水定容至1L，混合均匀，盛放于塑料试剂瓶中密封存于室温，即为单组份TMB显色液的终止液。实施例1本实施例提供了一种单组份TMB显色液的终止液，包括如下浓度的各组分：硫酸0.4mol/L二乙二醇3％(w/v)本实施例还提供了上述单组份TMB显色液的终止液的制备方法，包括如下步骤：取21.4ml(即0.4mol)的硫酸，加入800ml的去离子水，再在其中加入26.9ml(即30g)的二乙二醇，用去离子水定容至1L，混合均匀，盛放于塑料试剂瓶中密封存于室温，即为单组份TMB显色液的终止液。其中浓酸和二乙二醇均为国产分析纯试剂，成本较低。本实施例单组份TMB显色液的终止液在室温条件下可稳定保存1年以上。实施例2本实施例提供了一种单组份TMB显色液的终止液，包括如下浓度的各组分：硫酸0.3mol/L二乙二醇3％(w/v)本实施例还提供了上述单组份TMB显色液的终止液的制备方法，包括如下步骤：取16.1ml(即0.3mol)的硫酸，加入800ml的去离子水，再在其中加入26.9ml(即30g)的二乙二醇，用去离子水定容至1L，混合均匀，盛放于塑料试剂瓶中密封存于室温，即为单组份TMB显色液的终止液。其它皆同实施例1。实施例3本实施例提供了一种单组份TMB显色液的终止液，包括如下浓度的各组分：硫酸0.5mol/L二乙二醇5％(w/v)本实施例还提供了上述单组份TMB显色液的终止液的制备方法，包括如下步骤：取26.8ml(即0.5mol)的硫酸，加入800ml的去离子水，再在其中加入55.8ml(即50g)的二乙二醇，用去离子水定容至1L，混合均匀，盛放于塑料试剂瓶中密封存于室温，即为单组份TMB显色液的终止液。其它皆同实施例1。实施例4本实施例提供了一种单组份TMB显色液的终止液，包括如下浓度的各组分：硫酸0.4mol/L二乙二醇5％(w/v)本实施例还提供了上述单组份TMB显色液的终止液的制备方法，包括如下步骤：取21.4ml(即0.4mol)的硫酸，加入800ml的去离子水，再在其中加入55.8ml(即50g)的二乙二醇，用去离子水定容至1L，混合均匀，盛放于塑料试剂瓶中密封存于室温，即为单组份TMB显色液的终止液。其它皆同实施例1。实施例5本实施例提供了终止液在酶联免疫法试剂盒中与单组份TMB的联合使用的应用实例，其检测方法包括如下步骤：用DIA.PRO公司的“巨细胞病毒IgG抗体检测试剂盒(酶联免疫法)”检测血清或血浆标本中的巨细胞病毒IgG抗体(以下组份除另有说明，皆为该试剂盒的成份)：
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