风湿三项 - 检验医学讨论版 - 爱爱医医学论坛
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c反应蛋白（crp）
c反应蛋白（crp）是一种能与肺炎双球菌c多糖体反应的急性期反应蛋白，能激活补体，促进吞噬和其他的免疫调控作用。它广泛分布于人体，胸水、腹水、心包液、血液等处。在炎症、组织损伤时常迅速升高。crp能激活补体、促进粒细胞和巨噬细胞的运动与吞噬，有调理素样作用，并具有其他的免疫调控作用；能促进测定正常人末稍血单核细胞对黑色素瘤细胞的破坏作用；能影响淋巴细胞对促细胞分裂物质的反应性，与部分t淋巴细胞结合，抑制其功能；能抑制混合淋巴细胞反应；抑制血小板第3因子活化和内源性adp与5—羟色胺释放，对血小板凝集和血块收缩有抑制作用。
一、测定方法：
c反应蛋白（crp）目前主要用免疫化学法，如单向免疫扩散、火箭免疫电泳和胶乳凝集法、elisa法等。其原理都是利用特异抗crp抗体与检样中crp反应，根据形成的沉淀环直径、沉淀峰高度、凝集程度或呈色程度，判定检样中crp含量。
二、胶乳凝集法：
用纯化的抗人crp抗体致敏的胶乳试剂，能和患者血清中的crp起专一性反应，数分钟内呈现清晰的凝集颗粒。其检出crp的敏感度为1.0—1.5ug/ml，患者血清6倍稀释后测定，阳性结果表示患者血清crp含量＞10ug/ml。
②操作方法：
1、血清样品1份用蒸馏水2份稀释，56℃30分钟灭活。
2、在反应板格子内滴加稀释血清1滴（约50ul），再滴加缓冲液1滴，摇匀。3、滴加crp胶乳试剂1滴，轻轻摇动5分钟，有清晰凝集者为阳性，表示血清样品crp浓度大于10ug/ml。不出现清晰凝集者为阴性。
③干扰因素：
1、类风湿因子（rf）干扰本试验，产生假阳性结果，故类风湿患者欲用本试验判断其疾病是否活动，应先对其血清样品进行预处理，以破坏rf。
2、血清样品不宜用生理盐水稀释。
3、胶乳试剂不可冰冻，应保存于2—8℃。
4、在使用前要充分摇匀。
5、室温如低于20℃，加胶乳试剂后应延长摇动时间2分钟。
三、elisa法：
1、参考值：
血清中crp含量与年龄相关。新生儿0.1—0.6mg/l；幼儿0.15—1.6mg/l；学龄儿童0.17—2.2mg/l；成人0.42—5.2mg/l；孕妇血清crp含量甚高，可达4.4—4.68mg/l。
四、临床意义：
⑴crp是一种急性期蛋白，在各种急性和慢性感染、组织损伤、恶性肿瘤、心肌梗塞、手术创伤、放射线损伤等时，crp在病后数小时迅速升高，病变好转时又迅速降至正常。此反应不受放疗、化疗、皮质激素治疗影响。
⑵各种化脓性炎症、组织坏死（心肌梗塞、严重创伤、烧伤等）、恶性肿瘤、风湿性疾病等，血清crp含量增高。
⑶风湿热急性期及活动时，crp含量可高达200mg/l。病情好转逐渐下降到正常。
a族溶血性链球菌（a链）在生长过程中可产生多种毒素和酶，如链球菌溶血素o（slo）、脱氧核糖核酸酶、链激酶、透明质酸酶等。a簇溶血性链球菌的重要代谢产物之一为链球菌溶血素“o”，具有一定抗原性，能刺激机体产生相应抗体。链球菌溶血素“o”是具有溶血性的蛋白质，能溶解人类和一些动物的红细胞。按此原理可在被检病人血清倍比稀释后，加入一定量的链球菌溶血素“o”，如病人血清中含有抗体（抗链球菌溶血素“o”），则链球菌溶血素“o”失去溶血能力，不溶血的管数越多表示抗链球菌溶血素“o”的效价越高。检测血清中的相应抗体，有利于a族溶血性链球菌感染的诊断。其中以抗链球菌溶血素o（aso）抗体应用最广泛。
一、原理：
被测血清中如有抗链球菌溶血素o（aso），在与抗链球菌溶血素o（aso）胶乳试剂反应时，可引起后者凝集。预先用2.5结合单位/ml slo中和时，不出现凝集者说明血清中的aso＜250u，仍出现凝集者，说明aso＞250u。
二、试剂：
1、aso胶乳试剂：将羧化聚苯乙烯胶乳与纯化的链球菌溶血素o（slo）用碳化二亚胺交联，离心洗涤后，用ph7.6磷酸盐缓冲液配成1%悬液，加1.0g/l nan3防腐。
2、2.5结合单位/ml链球菌溶血素o（slo）：用生理盐水将液体链球菌溶血素o（slo）稀释到2.5结合单位/ml（标定方法按常用todd溶血法，滴度为250u的被测血清，1：50稀释后，与等体积2.5结合单位/ml slo混合，其抗链球菌溶血素o（aso）恰被中和）。
三、操作：
1、被测血清用生理盐水作1：50稀释，56℃30分钟灭活。
2、于方格涂黑玻璃板上，滴加灭活的稀释待测血清1滴，再滴加2.5结合单位/ml链球菌溶血素o（slo）1滴，摇动玻片2—3分钟，使血清与链球菌溶血素o（slo）充分混匀。
3、滴加抗链球菌溶血素o（aso）胶乳试剂1滴，轻轻摇动玻片8分钟，观察结果。
四、结果判断：
无凝集者为阴性，有明显凝集者为阳性。阳性血清应复试。将中和用的溶血素o改为5.0结合单位/ml，再按上法检测，如结果仍为阳性，则报告为强阳性。
五、注意事项：
1、血清溶血、黄疸、高胆固醇和血清污染长菌者皆可使aso升高；
2、加入溶血素应以旋转式轻轻摇匀，以防还原溶血素重新氧化；
3、每次试验应以已知血清滴定抗原效价，正式试验亦需有已知血清作对照。
六、临床意义：
1、溶血性链球菌感染1周后，aso即开始上升，4—6周内达高峰。风湿热病人于感染后4—6周时，80%可见aso增高，如有血沉增快及白细胞增多，应结合临床表现，考虑风湿活动。
2、高胆固醇血症、巨球蛋白血症及多发性骨髓瘤病人，aso也可增高，可能被检血清中有某种抑制溶血的物质存在。
类风湿因子（rf）测定
类风湿因子（rf）是在类风湿性关节炎（ra）病人血清中发现，是一种以变性igg为靶抗原的自身抗体，主要存在于类风湿性关节炎患者的血清和关节液中，它是一种抗变性igg的抗体，属igm型。可与iggfc段结合。ra病人和约50%的健康人体内都存在有产生rf的b细胞克隆，在变性igg（或与抗原结合的igg）或eb病毒直接作用下，可大量合成rf。健康人产生rf的细胞克隆较少，且单核细胞分泌的可溶性因子可抑制rf的产生，故一般不易测出。rf主要为igm类自身抗体，但也有igg类、iga类、igd类和ige类。各类rf临床意义有所不同。测定igg、iga、igm类rf通常用elisa间接法，即用热凝集兔igg包被反应板微孔，加入检样后，再分别加抗人igg、iga、igm酶标记抗体，使反应后再与底物呈色。为防止各ig类别rf相互干扰，酶标记抗体使用标记的抗体f（ab＇）2片段。
一、原理：
将变性igg包被于聚苯乙烯胶乳颗粒上，这种致敏胶乳在与待测血清中的rf相遇时，即发生肉眼可见的凝集，此称胶乳凝集试验。
在用热凝集变性igg包被聚苯乙烯反应板的微孔中，加入待测血清，如有rf存在，则相互结合，随后再加入酶标记热凝集变性的igg与之反应，在加入底物后即可显色。根据显色程度可判断有无rf存在及其水平，此为双抗原夹心elisa法。
二、胶乳凝集试验：
rf是一种主要发生于类风湿性关节炎患者体内的抗人变性igg抗体，可与igg的fc段结合。将变性igg包被于聚苯乙烯胶乳颗粒上，此致敏胶乳在与待测血清中的rf相遇时，即可发生肉眼可见的凝集。
三、操作：
1、56℃30分钟灭活，（灭活c1q以阻止假阳性凝集）。将待测血清用0.1mol/l ph8.2甘氨酸缓冲盐水作1：20稀释（生理盐水1ml中加血清0.05ml）。
2、取此稀释血清1滴（约0.05ml），加于黑色方格玻片的方格内，加乳胶rf试剂1滴，立即摇动反应板3分钟，使其充分混匀后，于直射光下观察。每次试验均设阳性与阴性对照。
四、参考值：
正常人1：20稀释血清为阴性。
五、结果判断：
胶乳凝集试验正常人多为阴性反应，如3分钟内出现显凝集者为阳性。阳性反应的标本应将血清进行倍比稀释测定滴度。elisa法可根据显色程度，与阳性和阴性对照参比，作出阳性或阴性的判断。
六、临床意义：
rf主要为igm类自身抗体，但也有igg类、iga类和ige类。各类rf临床意义有所不同。rf是一种以变性igg为靶抗原的自身抗体。未经治疗的类风湿性关节炎患者其阳性率为80%，且滴定度常在1：160以上。临床上动态观察滴定度多少，可作为病变活动及药物治疗后疗效的评价。其他风湿性疾病如sle阳性率为20%—25%；硬皮病与皮肌炎阳性率为10%—24%，滴定度较低。类风湿性关节炎（ra）患者和约50%的健康人体内都存在有产生rf的b细胞克隆，在变性igg（与抗原结合的igg）或eb病毒直接作用下，可大量合成rf。健康人产生rf的细胞克隆较少，且单核细胞分泌的可溶性因子可抑制rf的产生，故一般不易测出。rf有igg、iga、igm、igd和ige五类，用凝集试验法测出的主要是igm类。多数作者认为，igm类rf的含量与ra的活动性无密切关系；igg类rf的含量与ra患者的滑膜炎、血管炎和关节外症状密切相关。iga类rf见于ra、硬皮病、felty综合征和sle，是ra临床活动的一个指标。igd类rf研究甚少。ige类rf除ra患者外，也见于felty综合征和青年型ra。在ra患者，高效价的rf存在并伴有严重的关节功能受限时，常提示预后不良。在非类风湿患者中，rf的阳性率随年龄的增加而增加，但这些人以后发生ra者极少。
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基本信息：
病情描述：
血沉，风湿三项（ASO,RF,CRP1），HLA-B27
一般用于检查什么？
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病情分析：
血沉，风湿三项（ASO,RF,CRP1），HLA-B27 是检查风湿免疫病的。类风湿、风湿病的检查。另外HLA-B27 往往是强直性脊柱炎（或血清阴性脊柱关节病）的检查项目之一。
指导意见：
临床检查项目是诊断疾病的参考指标，结合临床症状和其他检查来具体判断疾病的。
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