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绿色荧光蛋白结构
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定量检测绿色荧光蛋白（rAcGFP1）
定量检测绿色荧光蛋白（rAcGFP1）
来源：互联网
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1. 应用说明
AcGFP1是从水母（Aequorea coerulescens）中分离出来的荧光蛋白，是EGFP的优良的代替品。AcGFP1的特性与EGFP相似，AcGFP1的激发波峰为475nm，发射波峰为505nm。此外，AcGFP1与EGFP在核酸水平上有94%的同源性。AcGFP1的特点是具有进行了人类密码子优化的开放阅读框。这不仅提高了AcGFP1 mRNA的转化效率同时也提高了它在高等哺乳动物细胞中的表达水平。另外，AcGFP1蛋白很稳定，可以对它在长时间范围内进行荧光检测。这种载色体成熟的很迅速，转染后8-12小时就可以进行检测。因此AcGFP1可被用来实时检测蛋白质的转运。
多功能检测仪可以检测到低至5pg/ul的重组AcGFP1。
2. 实验准备
多功能检测仪
or ）；Blue荧光模块（P/N ）；微量适配器（P/N ）；纯化的rAcGFP1蛋白；（Clontech，NO.632502）；200ul加样器与20ul加样器；TE Buffer（10 mM Tris-HCl，1 mM EDTA，pH 8.0）；1.5ml离心管
3. 仪器准备
3.1 关闭Modulus的电源，为Modulus插入BLUE荧光检测模块。
3.2 打开Modulus的电源，仪器预热1min
3.3 按照说明插入微量适配器
4. 制备标准曲线
4.1 按照下表系列稀释rAcGFP1：
表 1. rAcGFP1 稀释：使用适当体积的rAcGFP1和TE Buffer进行系列稀释。
4.2 在微量比色杯中加入100ul的rAcGFP1稀释后溶液。注意：避免在微量比色杯中出现气泡，负责会引起检测误差。
4.3 将微量比色杯插入到微量适配器中，点“Measure Fluorescence Raw.”检测
4.4 记录检测结果，对其他样品重复4.2-4.3的步骤
4.5 利用荧光值（FSU）与样品浓度做出标准曲线
图 1. rAcGFP1 浓度（ ng/uL）vs.对应的rAcGFP1荧光值。 ModulusTM多功能检测仪可以检测到低至5pg/ul的重组AcGFP1。
Figure 2. rAcGFP1 浓度（ng/uL）vs.对应的rAcGFP1荧光值。 图1的 0 到 0.5 ng/uL部分的放大。
4.6 使用标准曲线来检测未知样品的浓度
5.1 使用Modulus检测未知样品前，你可以使用rAcGFP1稀释液来校准Modulus仪器
5.2 使用表1中的5个稀释液来校准Modulus。选择“ng/uL”作为测量单位，使用0 ng/uL作为空白标准；为了尽可能准确，使用接近实际样品的稀释液做其他几个点的校准。
5.3 保存校准，可供以后调用 （可选）。
5.4 使用“Measure Fluorescence.”开始检测未知样品。注意：在校准后就无需再做标准曲线。
5.5 样品浓度将直接在屏幕上显示。
(责任编辑：大汉昆仑王)
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DXY All Rights Reserved.GFP绿色荧光蛋白的检测方法有哪些？_百度知道
GFP绿色荧光蛋白的检测方法有哪些？
检测方法：1、实验准备 Modulus单管型多功能检测仪 Blue荧光模块(P/N ) 微量适配器(P/N ) 纯化的rAcGFP1蛋白（Clontech，NO.632502）&#6ul加样器与20ul加样器 TE Buffer (10 mM Tris-HCl, 1 mM EDTA, pH 8.0)&#6ml离心管2、.仪器准备 2.1 关闭Modulus的电源，为Modulus插入BLUE荧光检测模块.2.2 打开Modulus的电源，仪器预热1min2.3 按照说明插入微量适配器3.、制备标准曲线3.1 对rAcGFP1进行系列稀释3.2 在微量比色杯中加入100ul的rAcGFP1稀释后溶液。注意：避免在微量比色杯中出现气泡，负责会引起检测误差。.3.3 将微量比色杯插入到微量适配器中，点&Measure Fluorescence Raw.&检测3.4 记录检测结果，对其他样品重复4.2-4.3的步骤3.5 利用荧光值（FSU）与样品浓度做出标准曲线4、 校准4.1 使用Modulus检测未知样品前，你可以使用rAcGFP1稀释液来校准Modulus仪器4.2 使用表1中的5个稀释液来校准Modulus。选择&ng/µL&作为测量单位，使用0 ng/µL 作为空白标准；为了尽可能准确，使用接近实际样品的稀释液做其他几个点的校准。4.3 保存校准，可供以后调用 (可选).4.4 使用&Measure Fluorescence.&开始检测未知样品。注意：在校准后就无需再做标准曲线。4.5 样品浓度将直接在屏幕上显示.简介：
绿色荧光蛋白(Green fluorescent protein，GFP)是一类存在于腔肠动物体内的生物发光蛋白。1962年Shimomura等首先从多管水母(Aequoria victoria)中分离出一种分子量为20kD的称为Aequorin的蛋白。由于水母整体荧光及提取的蛋白质颗粒荧光都呈绿色，因此，人们将这种蛋白命名为绿色荧光蛋白。
GFP具有多种优点：易于检测，灵敏度高；荧光性质稳定，耐受性强；易于表达，无细胞毒性；可用于活细胞检测。因此，GFP可作为报告基因用于检测基因表达或调控，或作为融合标签来检测蛋白质分子的定位、迁移、构象变化以及分子间的相互作用，或者靶向标记某些细胞器
采纳率：64%
来自团队：
荧光显微镜下观察GFP的绿色荧光；2.利用GFP的抗体1
若无荧光显微镜，只有荧光光谱仪，要怎么检测呢？
荧光光谱仪，这个仪器我没有了解。我是从事植物研究的，我们这倒是经常用到GFP荧光，而且大多是用荧光显微镜。参照下面链接里的回答，似乎荧光光谱仪可以分析出发光的物质，但是我确实不太了解这个仪器。
参考资料：
好的，谢谢！我是学微生物的，最近快被我的质粒搞疯了，就是不产荧光，而且还找不出原因……
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荧光显微镜下观察GFP的绿色荧光；2.利用GFP的抗体1
我知道的，目前有两种：1.荧光光度计，2.流式细胞仪。详细步骤可查阅文献
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绿色荧光蛋白GFP能在蓝光或紫外光的激发下发出荧光，这样借助GFP发出的荧光就可以跟踪蛋白质在细胞内部的移动情况，帮助推断蛋白质的功能。下图为我国首例绿色荧光蛋白（GFP）转基因克隆猪的培育过程示意图，据图回答：
（1）若限制酶Ⅰ的识别序列和切点是—G↓GATCC—，限制酶Ⅱ的识别序列和切点是—↓GATC—，在质粒上有酶Ⅰ的一个切点，在目的基因的两侧各有1个酶Ⅱ的切点，在DNA连接酶的作用下，上述两种不同限制酶切割后形成的黏性末端能否连接起来__________，理由是： ___________________________________________。
（2）过程③将重组质粒导入猪胎儿成纤维细胞时，采用最多的方法是______________________。
（3）获得转基因猪的关键步骤是_____（填序号），GFP基因的作用是作为_______。抑制小猪抗原表达的基因要插入到启动子和_________之间。获得的转基因克隆猪，可以解决的医学难题是可以避免 &&& _____________________。
（4）目前科学家们通过蛋白质工程制造出了蓝色荧光蛋白，黄色荧光蛋白等，采用蛋白质工程技术制造出蓝色荧光蛋白过程的正确顺序是：_____________________（用数字表示）。
①推测蓝色荧光蛋白的氨基酸序列和基因的核苷酸
②蓝色荧光蛋白的功能分析和结构设计序列
③蓝色荧光蛋白基因的修饰（合成）&&
④表达出蓝色荧光蛋白。
（1）可以连接(1分) 因为由两种不同限制酶切割后形成的黏性末端是相同的（或是可以互补的）
（2）显微注射技术
（3）②&&&&
作为标记基因 ^cooco.n< cooco因你而专业>&&&& 终止子&&&&&
器官移植时发生免疫排斥反应
（4）②①③④
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