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姜黄素对缺血再灌注大鼠脑组织SOD，MDA和亚硝酸盐含量的影响
　　第二军医大学学报1999年第20卷第6期
石晶　陶沂　胡晋红　田亚平
　　摘　要　目的：通过观察姜黄素对脑缺血再灌注时脑组织中丙二醛（MDA）、亚硝酸盐、超氧化物歧化酶（SOD）含量的影响，探讨其对再灌注损伤保护作用的机制。方法：选用大鼠4血管结扎缺血再灌注模型(缺血30min，再灌注15min),用化学发光法测定大鼠脑组织中SOD的活性，用比色法测定MDA和亚硝酸盐的含量。姜黄素（20和40mg/kg）于缺血前30min腹腔注射给予。结果：缺血30min再灌注15min后，模型组的动物脑组织中MDA和亚硝酸盐的含量明显升高。姜黄素可抑制这种升高，且呈一定的剂量依赖关系。姜黄素还可使缺血再灌注时脑组织的SOD活性提高。结论：姜黄素对脑缺血再灌注的保护作用可能与其抑制自由基的生成和促进自由基的清除有关。
　　关键词：姜黄素　脑缺血　再灌注损伤　脂质过氧化物　一氧化氮　超氧化物歧化酶
　　能否有效保护神经细胞是缺血性脑血管病救治的关键。植物姜黄中提取的色素成分姜黄素（curcumin）已被实验证明具有多种药理活性，尤其是细胞保护作用。我们已观察到姜黄素对小鼠和大鼠的脑缺血和缺氧有保护作用［1］。本实验通过大鼠脑缺血再灌注模型，观察姜黄素对脑组织中脂质过氧化物(LPO)、亚硝酸盐和超氧化物歧化酶(SOD)等的影响，以进一步探讨其保护作用的可能机制。
　　1　材料和方法
　　1.1　动物　雄性Wistar大鼠，体质量(224±27)g，由本校实验动物中心提供。
　　[HTK〗1.2　药品　姜黄素，购自北京怀柔生化研究所。
　　1.3　大鼠4血管结扎脑缺血再灌注模型　大鼠经水合氯醛350mg/kg腹腔麻醉后，双侧椎动脉热凝，术后24h分离双侧颈总动脉，用动脉钳夹闭双侧颈总动脉，用RM-6200型四道生理记录仪(成都仪器厂)监测脑电图，以脑电图成一平线为全脑缺血模型成功标志。缺血30min后松开动脉钳，开放血流，行再灌注。再灌15min后处死动物，迅速取出大脑半球，液氮速冻后-70℃冰箱保存。
　　1.4　动物的分组及给药　大鼠随机分为4组：假手术组、模型组、姜黄素20mg/kg组、姜黄素40mg/kg组。假手术组不给药，除不夹闭颈总动脉外，手术过程同上，其他各组在夹闭颈总动脉前30min分别ip给予生理盐水和姜黄素。
　　1.5　脑组织样品的处理及测定　取冰冻保存的脑组织样品，在冰浴中用0.1mol/LpH7.4的磷酸盐缓冲液制成1∶10的匀浆，用低温离心机在4℃的条件下12000×g离心20min，取上清液备测。脑匀浆中的MDA含量用硫代巴比妥酸比色法测定；SOD活力用化学发光法［2］测定；NO代谢产物亚硝酸盐的含量用比色法［3］测定，以亚硝酸钠为标准品。
　　1.6　统计学处理　数据以±s表示，用方差分析。
　　2　结　果
　　各组大鼠全脑缺血再灌注后脑组织匀浆中SOD活性，MDA和亚硝酸盐含量的变化见表1。
表1　大鼠缺血再灌注后脑组织SOD，MDA和亚硝酸盐的含量Tab 1　Contents of SOD ，MDA and nitrite in brains of ischemia reperfusion in rats　　(±s)
SOD［(z/m)/U·mg－1］
MDA(mB/nmol·g－1)
Nitrite(wB/ng·mg－1)
Sham-operation
11.04±1.08
281.8±84.2
16.53±3.93
11.84±1.44
452.1±63.1**
23.01±3.94**
Curcumin20mg/kg
13.41±0.94**△
428.2±37.7**
20.64±3.77
Curcumin40mg/kg
13.89±0.93**△△
392.5±21.7**△
16.41±4.15△
　　**P＜0.01 vs sham-operation group；△P＜0.05; △△P＜0.01 vs model group 　　结果显示，大鼠缺血再灌注后脑组织中MDA和亚硝酸盐的含量均较模型组明显升高，给予姜黄素后这种升高的程度被抑制，以姜黄素40mg/kg组作用明显，与模型组比较有显著差异。此外，姜黄素组大鼠脑组织中的SOD活性有所提高，与模型组和假手术组比较，差异均具有显著性意义。
　　3　讨　论
　　脑组织缺血再灌注损伤的主要机制是自由基的作用，有效抑制自由基的生成或及时清除自由基，有可能减轻再灌注损伤。我们已观察到姜黄素对脑缺血有保护作用［1］。从体外研究结果分析，姜黄素有可能通过多个途径抑制自由基的生成,从而达到保护缺血脑细胞的目的。有报道，姜黄素体外可抑制脂氧酶和环氧酶活性［4］，减少从花生四烯酸途径生成的自由基；抑制黄嘌呤氧化酶活性［5］，减少腺苷代谢途径形成的自由基；抑制一氧化氮合酶活性［6］，减少由精氨酸代谢途径产生的NO所诱导的自由基的生成；抑制中性粒细胞炎症反应［7］，减少白细胞呼吸爆发产生的自由基。本研究通过整体给药观察到，大鼠脑缺血再灌注时，姜黄素可抑制脑组织中LPO和NO代谢产物亚硝酸盐含量的升高，提示姜黄素可减少此时自由基的生成。此外，姜黄素还具有提高动物体内SOD活性和清除自由基的效应［8］，本实验亦观察到，姜黄素组大鼠脑组织内的SOD活性有所提高。因此，姜黄素对缺血及再灌注损伤的保护作用主要与其抗自由基效应有关，作用机制可能包括多个环节上的抑制自由基生成和促进自由基的清除。
　　作者简介：石　晶，女，1958年10月生，硕士，副研究员
　　作者单位　石　晶　胡晋红　第二军医大学长海医院药学部，上海，200433；
　　陶　沂　第二军医大学长海医院神经内科；
　　田亚平　解放军总医院生化科
　　参考文献
　　1　石　晶，陶　沂，胡晋红.姜黄素对小鼠和大鼠脑缺血、缺氧的保护作用.第二军医大学学报，):394
　　2　田亚平，沈文梅.化学发光法用于血清中总超氧化物歧化酶、血清锰和铜锌超氧化物歧化酶活力的联合测定.中华医学检验杂志，):381
　　3　陶　沂，匡培根.缺血再灌注时脑组织中NO含量的变化及腺苷的影响.卒中与神经疾病，):115
　　4　Huang MT, Lysz T, Ferraro T, et al. Inhibitory effects of curcumin on in vitro lipoxygenase and cyclooxygenase activities in mouse epidermis. Cancer Res, ):813
　　5　Lin JK, Shih CA. Inhibitory effect of curcumin on xanthine dehydro-genase /oxidase induced by phorbol-12-myristat e- 13- acetate in NIH 3T3 cells. Carcinogenesis, ):1717
　　6　Brouet I, Ohshima H. Curcumin, an antitumour promoter and anti-inflamma tory agent, inhibits induction of nitric oxide synthase in activated macro phages. Biochem Biophys Res Commun,): 533
　　7　Srivastava R. Inhibition of neutrophil response by curcumin. Agents Actions , /4): 298
　　8　石　晶，陶　沂，田亚平.姜黄素对鼠体内SOD活性和MDA含量的影响.中国药理学通报，):249
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【求助】大鼠脑组织做免疫组化取材时一定要灌流吗？
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这个帖子发布于5年零294天前，其中的信息可能已发生改变或有所发展。
各位同道，本人初次做试验，想取大鼠脑组织一部分匀浆做ELISA，一部分石蜡切片做免疫组化。计划取脑之后，冰冻一小段时间，用刀片在中线结构偏移比较厉害的区域做冠状切片，取一片，生理盐水冲洗一下，用多聚甲醛保存，剩下的称重，加入PBS做组织匀浆。因为查的文献都要求做脑组织免疫组化要先灌流固定，不知道灌流之后脑组织对ELISA检测有没有影响，所以想不灌流直接取脑之后再固定，不知道可行与否，请大家不吝赐教。谢谢。
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你是不是做的MCAO模型？取哪个部位？皮层？海马？纹状体？
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qwasd111 你是不是做的MCAO模型？取哪个部位？皮层？海马？纹状体？谢谢你的回复。我做的是MCAO模型。我打算就在大脑中动脉梗死区取样本，观察梗死区的炎症反应情况的。
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我做的也是大鼠脑梗塞的模型，现在也遇到了这个问题，我是取海马区，我要一部分做免疫组化，一部分做PCR，所以想请教高手们，不灌注的话，脑组织取出来之后放在-80℃之后怎么做免疫组化呢？谢谢
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做PCR那部分放-80℃ 冻起来，做免疫组化的那部分放多聚甲醛4℃泡两天，在转20%4℃ 蔗糖一天，再转30%4℃ 蔗糖一天，然后-80℃ 冻起来就可以了。
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我做的是关于弱视，取的是视皮层17区及外侧膝状体，要做免疫组化，是不是也必须要先灌流啊！谢谢！
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请问楼主，这个问题解决了吗？
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高压氧对大鼠脑缺血再灌注损伤脑组织基质金属蛋白酶-9表达的影响
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