广州粤晨生物科技有限公司
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广州粤晨生物科技有限公司是一家主要向各科研单位实验室提供高品质产品和提供技术支持等方面的服务，能满足医院、疾病预防控制、检验检疫、高校和工业等科研实验室的要求。主营国内外标准分析测试试剂、生物化学试剂、细胞和微生物菌种、化工原料以及仪器设备的企业，公司销售的产品主要有美国标准菌种保藏中心（ATCC）的微生物菌种、细胞和培养基，Sigma品牌下的各种试剂和耗材、德国DR.Ehrenstorfer的标准品，Amresco、OXOID各种成品培养基，以及HyClone、Gibco大包装进口血清。
质控菌种管理规定
微生物实验用菌种是进行新产品研发和生产质量控制的标准物质。为了保证微生物实验的准确灵敏和人员及环境的卫生安全，特制定以下规定：
1. 菌种采集。实验室用菌种一是到国家法定机构采购，二是购买ATCC菌种，三是科研中菌种交流。不管是哪种来源，均由公司统一采集。采集中严格按照规范执行。要求包装可靠，采集迅速，不泄漏不污染。保证菌种合格和环境安全。采集中要有菌种传代标识。
2.菌种的活化：购买的标准菌种必须要求是冻干粉，科研中菌种交流可以为斜面或液体。
菌种的首次活化最好是在非选择性琼脂培养基上，除非特殊情况或特别推荐，一般不用液体培养基。
具体使用培养基的情况如下表，详细菌种使用方法见附表：
胰蛋白胨大豆琼脂(TSA)，非选择性羊血琼脂，PCA或营养琼脂，35℃正常环境培养24-48小时。
非选择性羊血琼脂，35℃正常环境培养24-48小时。
巧克力琼脂平板，35℃5-10%CO2环境培养24-48小时。
CDC厌氧血琼脂35℃厌氧培养48-72小时；
沙堡氏葡萄糖Emmons琼脂25-28℃培养3-7天；也可用PDA琼脂。
巧克力琼脂平板，35℃微需氧环境培养48-72小时。
改良罗氏琼脂35℃5-10%CO2或正常环境培养7天。
缓冲活性碳酵母提取物琼脂，35℃正常环境培养3-5天。
巧克力琼脂平板，35℃5-10%CO2环境培养48小时。
先用脑心浸出液肉汤增菌培养18-24小时，再划线至TSA琼脂35℃正常环境培养24-48小时。
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使用更方便哦！购买的冻干菌种为什么首次活化不能用液体培养基？
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稍微加点bhi或者肉汤溶解干粉涂布就好了啊
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根据您的描述，配套了液体复苏液，肯定不是ATCC的原种(真空冷冻干燥管)，应该是商业派生菌株。
如何区分是 ...
虽然菌种证明文件上没有代数说明，但我觉得应该是您说的这种情况
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我刚买的冻干菌种，按程序应该活化 ，验收，鉴定是所想买的菌种且是纯的菌种才行，那么具体应该怎么做呢？我首先是以 营养琼脂斜面活化，那么鉴定和保存的顺序应该是怎么安排呢？要先鉴定后再保存吗？这样的话，已经活化 在营养琼脂斜面的菌种就得暂时放4度冰箱保存，直至鉴定完之后再做下一步扩大培养和保存啊？这样对菌种的活力会有影响吗?
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质控菌种管理规定
微生物实验用菌种是进行新产品研发和生产质量控制的标准物质。为了保证微生物实验的准确灵敏和人员及环境的卫生安全，特制定以下规定：
1. 菌种采集。实验室用菌种一是到国家法定机构采购，二是购买ATCC菌种，三是科研中菌种交流。不管是哪种来源，均由公司统一采集。采集中严格按照规范执行。要求包装可靠，采集迅速，不泄漏不污染。保证菌种合格和环境安全。采集中要有菌种传代标识。
2.菌种的活化：购买的标准菌种必须要求是冻干粉，科研中菌种交流可以为斜面或液体。
菌种的首次活化最好是在非选择性琼脂培养基上，除非特殊情况或特别推荐，一般不用液体培养基。具体使用培养基的情况如下表，详细菌种使用方法见附表：
方&&法& & & & 培养基
方法1& & & & 胰蛋白胨大豆琼脂(TSA)，非选择性羊血琼脂，PCA或营养琼脂，35℃正常环境培养24-48小时。
方法2& & & & 非选择性羊血琼脂，35℃正常环境培养24-48小时。
方法3& & & & 巧克力琼脂平板，35℃5-10%CO2环境培养24-48小时。
方法4& & & & CDC厌氧血琼脂35℃厌氧培养48-72小时；部分专性厌氧菌能需要5-7天，才能充分生长；对于梭菌，以下新鲜培养基也可选用：营养琼脂，TSA琼脂，PCA琼脂，需培养48-96小时。
方法5& & & & 沙堡氏葡萄糖Emmons琼脂25-28℃培养3-7天；也可用PDA琼脂。
方法6& & & & 巧克力琼脂平板，35℃微需氧环境培养48-72小时。
方法7& & & & 改良罗氏琼脂或Middlebrook琼脂，35℃5-10%CO2或正常环境培养7天。
方法8& & & & 缓冲活性碳酵母提取物琼脂，35℃正常环境培养3-5天。
方法9& & & & 巧克力琼脂平板，35℃5-10%CO2环境培养48小时。
方法10& & & & 先用脑心浸出液肉汤或TSB培养基35℃增菌培养18-24小时，再划线至TSA琼脂35℃正常环境培养24-48小时。
方法11& & & & 先接种于MRS肉汤35℃增菌培养24-48小时，再划线接种至含羊血的哥伦比亚CNA培养基35℃5%CO2环境培养24-48小时。
方法12& & & & PDA琼脂45℃正常环境培养48-72小时。
方法13& & & & 先接种于10B精氨酸肉汤，作系列梯度稀释35℃正常培养至培养基变成粉红色，接入A-8琼脂。
3.菌种保存。所有菌种均由实验室专人(双人双锁)保存于专用冰箱或其它保存方式。要建立菌种登记台帐，详细记录菌种采集、保管、制备、使用、处置情况；每一种菌种一定要有本公司的检测鉴定报告（具体的的鉴定方法见ATCC提供的菌种证书方法）；具体菌种保存方法如下：
3.1 干粉菌种：购买的干粉菌种保存于2-8℃冰箱中，可保存3-5年。
3.2 斜面菌种或液体菌种：
3.2.1 液氮罐保存方法：用于第一代菌种的长期保存，每种菌种保存5管。
（1）准备用于液氮保藏的安瓿管或菌种保存管(塑料)，要求能耐受温度突然变化而不致破裂，因此，需要采用硼硅酸盐玻璃制造的安瓿管，安瓿管的大小通常使用75×10mm的，或能容1．2mm液体的。
　　（2）加保护剂与灭菌保存细菌、酵母菌或霉菌孢子等容易分散的细胞时，则将空安瓿管塞上棉塞， 121℃灭菌15分钟：若作保存霉菌菌丝体用则需在安瓿管内预先加入保护剂如10％的甘油蒸馏水溶液或10％二甲亚砜蒸馏水溶液，加入量以能浸没以后加入的菌落圆块为限，而后再用121℃灭菌15分钟。
　　（3）接入菌种：将菌种用10％的甘油蒸馏水溶液制成菌悬液，装入已灭菌的安瓿管；霉菌菌丝体则可用灭菌打孔器，从平板内切取菌落圆块，放入含有保护剂的安瓿管内，然后用火焰熔封。浸入水中检查有无漏洞。
　　（4）冻结再将已封口的安瓿管以每分钟下降1℃的慢速冻结至-30℃。若细胞急剧冷冻，则在细胞内会形成冰的结晶，因而降低存活率。
　　（5）保藏经冻结至-30℃的安瓿管立即放入液氮冷冻保藏器的小圆筒内，然后再将小圆筒放入液氮保藏器内。液氮保藏器内的气相为-150℃，液态氮内为-196℃。
　　（6）恢复培养保藏的菌种需要用时，将安瓿管取出，立即放入38-40℃的水浴中进行急剧解冻，直到全部融化为止。再打开安瓿管，将内容物移入适宜的培养基上培养。
　　此法除适宜于一般微生物的保藏外，对一些用冷冻干燥法都难以保存的微生物如支原体、衣原体、氢细菌、难以形成孢子的霉菌、噬菌体及动物细胞均可长期保藏，而且性状不变异。
3.2.2 液体石蜡保存法：将液体石蜡分装于三角烧瓶内，塞上棉塞，并用牛皮纸包扎， 121℃灭菌30分钟，然后放在40℃温箱中，使水汽蒸发掉，备用。将需要保藏的菌种，在最适宜的斜面培养基中培养，使得到健壮的菌体或孢子。用灭菌吸管吸取灭菌的液体石蜡，注入已长好菌的斜面上，其用量以高出斜面顶端1cm为准，使菌种与空气隔绝。将试管直立，置低温或室温下保存（有的微生物在室温下比冰箱中保存的时间还要长）。
1）大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、假单胞杆菌属、沙门氏菌属、副伤寒沙门氏菌、李斯特氏菌属、蜡样芽胞杆菌、八叠球菌、短芽孢杆菌、大肠杆菌HB101、大肠杆菌DH5a、猪肺疫、禽多杀性巴氏杆菌（禽霍乱）、猪丹毒、大肠杆菌O157、大肠菌群、产气肠杆菌、志贺氏菌属；接种于半固体培养基上，36±1℃培养18-24小时，加入无菌石蜡油覆盖，保存于2-8℃冰箱或室温中。可保存1-2年。
注：副溶血性弧菌接种于含盐的半固体培养基上，36±1℃培养18-24小时，加入无菌石蜡油覆盖，保存于室温。
2）产气荚膜梭菌、梭杆菌属、拟杆菌属等厌氧菌、厌氧消化链球菌：接种于CDC厌氧菌琼脂中，培养18-24小时，加入无菌石蜡油覆盖，保存于2-8℃冰箱或室温中。可保存1-2年。
3）酵母菌：接种于YPD培养基中，28℃培养24-48小时，加入无菌石蜡油覆盖，保存于2-8℃冰箱或室温中。可保存1-2年。
4）霉菌、白色念珠球菌：接种于PDA培养基中，28℃培养24-48小时，加入无菌石蜡油覆盖，保存于2-8℃冰箱或室温中。可保存1-2年。
5）链球菌属：接种于羊血琼脂，36±1℃培养24-48小时，加入无菌石蜡油覆盖，保存于2-8℃冰箱或室温中。可保存1-2年。
6)副嗜血杆菌、淋病奈瑟菌(需5-10%CO2环境)、脑膜炎奈瑟菌(需5-10%CO2环境)、流感嗜血杆菌接种于巧克力琼脂，36±1℃培养24-48小时，加入无菌石蜡油覆盖，保存于2-8℃冰箱或室温中。可保存1-2年。
7）分枝杆菌属：接种于改良罗氏琼脂或Middlebrook琼脂36±1℃培养7天，加入无菌石蜡油覆盖，保存于2-8℃冰箱或室温中。可保存1-2年。
4.菌种制备。菌种制备按照批准的制备计划执行。制备中要按规范要求操作，同时做好工作记录。记录内容包括：菌种名称，传代标识、制备数量。在制备容器上作出明确表示。 具体菌种制备方法如下：可以麦氏比浊管计数每ml菌液的菌数
1）大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、假单胞杆菌属、沙门氏菌属、副伤寒沙门氏菌、李斯特氏菌属、蜡样芽胞杆菌、八叠球菌、短芽孢杆菌、大肠杆菌HB101、大肠杆菌DH5a、猪肺疫、禽多杀性巴氏杆菌（禽霍乱）、猪丹毒、大肠杆菌O157、大肠菌群、产气肠杆菌、志贺氏菌属；把各种细菌菌种划线接种于营养琼脂平板上，36±1℃培养18-24小时，挑取单菌落接种于10ml营养肉汤中，36±1℃培养18-24小时，计数出每ml营养肉汤中的细菌数。把菌液保存于2-8℃，此菌液可保存7-10天，每10天重新挑取单菌落接种于10ml营养肉汤中， 36±1℃培养18-24小时，用生理盐水稀释到10-7，计数出10-6/0.1ml、10-7/0.1ml营养肉汤中的细菌数。
2）产气荚膜梭菌、梭杆菌属、拟杆菌属等厌氧菌、厌氧消化链球菌等厌氧菌直接接种于10ml液体硫乙醇酸盐培养基中，36±1℃培养18-24小时，计数出每ml液体硫乙醇酸盐培养基中的细菌数（在厌氧条件下培养）。
3）酵母菌、霉菌和白色念珠球菌：接种于PDA培养基中，28℃培养24-48小时，挑取单菌落接种于10ml葡萄糖蛋白胨培养基中，28℃培养24-48小时，用YPD琼脂计数出每ml葡萄糖蛋白胨培养基中的菌落。把菌液保存于2-8℃，此菌液可保存7-10天，每10天重新挑取单菌落接种于10ml葡萄糖蛋白胨培养基中，28℃培养24-48小时，用生理盐水稀释到10-7，计数出10-6/0.1ml、10-7/0.1ml葡萄糖蛋白胨培养基中的菌数。
4）链球菌属：接种于脑心浸液中36±1℃培养18-24小时，计数出每ml脑心浸液中的细菌数。把菌液保存于2-8℃，此菌液可保存7-10天，每10天重新挑取单菌落接种于10ml脑心浸液中， 36±1℃培养18-24小时，用生理盐水稀释到10-7，计数出10-6/0.1ml、10-7/0.1ml脑心浸液中的细菌数。
5）副嗜血杆菌、淋病奈瑟菌(需5-10%CO2环境)、脑膜炎奈瑟菌(需5-10%CO2环境)、流感嗜血杆菌接种于巧克力琼脂，36±1℃培养18-24小时，用0.9%无菌氯化钠溶液稀释，经比浊后制成每1ml含菌数约相当于100～1000cfu的菌悬液。
6) 分枝杆菌属：接种于改良罗氏琼脂或Middlebrook琼脂36±1℃培养7天，用0.9%无菌氯化钠溶液将上述增菌培养后的质控菌种的新鲜培养物制成1.0~3.0×103CFU/ml的菌悬液，作为工作菌液。
5．菌种的标识和使用期限：
标识：菌种代数的计算为干粉菌种为第0代，转接一次斜面加一代。具体标识为：例单增李斯特氏菌ATCC19114第0代，表识为单增李斯特氏菌ATCC19114-0，第一代表识为单增李斯特氏菌ATCC19114-1；第一代有12支，则表识为单增李斯特氏菌ATCC、……、单增李斯特氏菌ATCC；
使用期限：传代次数不得超过5代，菌种已变异或生化鉴定不符合；
6.菌种使用。菌种管理员，每月领取1支第一代(或第二代、第三代)菌种。再根据以上方法制备工作菌液，分发给实际使用者，实际使用者领用前应充分考虑重复实验的需要。同一实验要选择同代菌种，保证实验的可比性。领用菌种要详细登记，领用人要签字，并注明领用时间。
7.菌种处理。实验完毕的菌种遗留物和污染物应严格按照三废处理规定执行。提供给外部的菌种必须经公司总经理批准，按规定要求包装运输。严禁私自对外提供菌种。
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所有已经走过的路都有它不得不跋涉的理由！所有尚未走过的路是否都有理想在路的那头守侯？？！！
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可是在所有的菌种买回来后不是要验证它是纯的菌种，而且要作鉴定的吗？这个步骤应该安排在整个活化保存过程的哪一步呢？
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ATCC 的都有一个生化表，你活化后要做一下是不是符合！！！建议你工作菌种的储存菌种同时做，这样可以减少传代次数，另外，如无特殊要求菌种在十代内应该是没有问题的，（像有的要求五代以内）。
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谢谢你的讲解 收获很大 嘿嘿
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对菌种的保藏和管理有了较全面的了解。
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原帖由 benben0325 于
12:54 发表
ATCC 的都有一个生化表，你活化后要做一下是不是符合！！！建议你工作菌种的储存菌种同时做，这样可以减少传代次数，另外，如无特殊要求菌种在十代内应该是没有问题的，（像有的要求五代以内）。
是直投菌吗，直投菌好象都直接用啊！！！
是继代菌吗，继代菌处理的好，几个月都没问题啊！！！？？？
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详解冻干粉标准菌株
发布时间： 15:13&|&
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【产品名称】详见各产品标签【规格】冻干粉【冷冻管开封】用浸过75%酒精的脱脂棉严格消毒冷冻管盖。【菌株复溶】无菌环境中旋开装有复溶液的滴瓶盖，吸取1ml 左右复溶液，加入到冷冻管中。轻轻振荡，使冻干菌株溶解呈悬浮状。【菌株复壮】用无菌吸管吸取菌悬液，转移到复溶液滴瓶中。做好标识，在适宜温度下培养。细菌在30-35℃培养箱中培养24-48h，真菌在23-28℃培养箱中培养24-72h（必要时，可适当延长培养时间）。【菌株传代】将得到的菌株的新鲜培养物转接到适宜的固体培养基及液体培养基中（尽量增大接种量：如用无菌吸管吸取≥50μl 新鲜培养物至固体培养基，边移动边缓慢释放），适宜温度下培养，用以菌株的保藏、传代及制备工作菌株。【注意事项】1、菌种活化前，将冷冻管保存在低温、清洁、干燥的环境中，长时间室温下放置会导致菌种衰退；2、冷冻管开封、冻干粉复溶、菌株恢复培养等操作应在无菌条件下进行；3、一些菌种经过冷冻干燥保存后，延迟期较长，部分需连续两次继代培养才能正常生长；4、苛养菌的培养需采用含特定营养成分的培养基，敬请正确选择，不清楚时来电询问；5、某些厌氧菌的培养，自开封到接种完成，均需以无氧气体充填，以保持厌氧状态；培养过程中亦要保持厌氧状态；6、某些菌种，如肺炎链球菌、流感嗜血杆菌、淋病奈瑟菌等需要5-10%CO2 促进生长；7、如发现冷冻管盖松动、复溶液浑浊等异常情况，应停止使用对应产品。8、部分菌种有致病性、扩散性，请专业人员在专业环境下有保护性操作。【保藏条件】-20℃保存（复溶液于2-8℃保存）【保藏时间】2-10 年，应根据菌种状况及时转接}