& 淋球菌核酸检测
淋球菌核酸检测
　　淋球菌（n. gonorrhoeae）：为严格的人体寄生菌，常存在于急性尿道炎与阴道炎的脓性分泌物的白细胞中，形态染色类似于脑膜炎球菌。形态与染色淋球菌呈卵圆形或豆形，菌体长0.6～0.8um，宽约0.5um。常成对排列，邻近面扁平或稍凹陷，像两粒豆子对在一起。无鞭毛，不形成芽孢。在急性感染的机体内，其形态较典型，多位于细胞浆内。慢性期则在细胞外。淋球菌革兰染色阴性。用碱性美蓝染色时，菌体呈蓝色。用Pappehheim Saathof染色时，菌体呈红色，背景为天蓝色，十分清晰。　　菌体结构淋球菌的致病主要与菌体外面的结构有密切关系。淋球菌外面结构为外膜，外膜的主要成分为膜蛋白、脂多糖和菌毛。膜蛋白可使淋球菌黏附于人体黏膜上，通过细胞吞噬作用进人细胞，在细胞内大量繁殖，导致细胞崩解，淋球菌扩散到黏膜下层引起感染。菌毛易黏附于子宫腔和口腔上皮细胞表面，有致病力及传染性。　　淋球菌较为娇嫩，最怕干燥，适宜在潮湿、温度为35～36℃、含2.5%～5.0%二氧化碳的条件下生长，其生长的最适pH为7.0～7.5。淋球菌有自溶现象，离开人体后，菌细胞可自行溶解，“自杀身亡”，即使不自溶也会在短时间内失去传染性。淋球菌对外界理化因素的抵抗力相当差，在完全干燥的环境中1～2h即死亡，但若附着于衣裤和被褥中，则能生存18～24h，在厚层脓液或湿润的物体上可存活数天。在50℃仅能存活5min。淋球菌对常用的黏膜杀菌剂抵抗力很弱。中科院微生所以常用的娇妍洁阴洗液作测试，淋球菌在娇妍洁阴洗液作用下1min内全部被杀灭，淋球菌对可溶性银盐也很敏感，1∶4000硝酸银溶液可使其在7min内死亡，使脓液中的淋球菌2min内死亡。1%苯酚（石炭酸）溶液能在3min内将其杀灭。除耐药菌株外，淋球菌对抗生素敏感，但抗生素的最小抑菌浓度逐渐有所提高。
分泌物、冷藏（2-8℃）
实时荧光PCR法
淋病主要通过性交传染，但是也可以通过污染的衣裤，被褥，寝具，毛巾，浴盆，马桶圈和手等间接传播。新生儿淋菌性结膜炎多在通过母亲产道时受感染。妊娠期妇女淋病，可引起羊膜腔内感染，包括胎儿感染。目前淋球菌常用PCR检测，敏感性高特异性强，能检测生殖系分泌物和尿液中的淋球菌，特别对那些慢性或无症状带菌者，更具有明显的优点。
西医治疗方法１、治疗原则：对淋病，应遵循以下原则进行治疗。　⑴尽早确诊，及时治疗：首先，患病后应尽早确立诊断，在确诊前不应随意治疗。其次，确诊后应毫不迟疑地立即治疗，切莫坐失良机。　⑵明确临床类型：判断是否为单纯型，或有合并症型，或播散型。临床分型对正确地指导治疗极其重要。　⑶明确有无耐药：明确是否耐青霉素，耐四环素等，这也有助于正确地指导治疗。　⑷明确是否合并衣原体或支原体感染：若合并衣原体或支原体感染时，应拟订联合化疗方案进行治疗。　⑸正确、足量、规则、全面治疗：应选择对淋球菌最敏感的药物进行治疗，尽可能作药敏试验，过敏试验或β-内酰胺酶测定。药量要充足，疗程要正规，用药方法要正确。应选择各种有效的方法全面治疗。　⑹严格考核疗效并追踪观察：应当严格掌握治愈标准，坚持疗效考核。只有达到治愈标准后，才能判断为痊愈，以防复发。治愈者应坚持定期复查，观察足够长的一段时期。　⑺同时检查、治疗其性伴侣：患者夫妻或性伴侣双方应同时接受检查和治疗。　2、一般疗法：　⑴性隔离：禁止性生活。　⑵休息：伴有高热，严重合并症的STD患者要适当休息，必要时应卧床休息。　⑶维持水，电解质、糖水化合物的必须与平衡，补充高糖，高蛋白饮食。　⑷用娇妍洁阴洗液清洗或灌洗阴部，消毒、抑菌。　3、全身疗法：治疗淋病的药物很多，但应以高效、安全和价格适宜为原则进行选择。　①青霉素类：通过破坏菌壁合成而起杀菌作用。此类药物适于治疗非耐青霉素酶的淋球菌（PPNG）引起的淋病，是本病的“标准疗法”。然而，在治疗前不作药敏试验，将其作为常规疗法是不适当的，当PPNG菌株的流行率大于5%时，不应采用青霉素类治疗，而应选用其他制剂。加服丙磺舒的目的是减慢青霉素自肾脏排出，并减少其与血浆蛋白结合，提高血内水平，延长半衰期，以充分发挥其抗菌作用。　②β-内酰胺酶抑制剂：PPNG菌株对青霉素和一些头孢菌素耐药的原因，主要是产生了β-内酰胺酶所致。棒酸和青霉烷砜是抗菌活性很弱的化合物，与含β-内酰胺环的抗生素联合应用时，通过抑制-内酰胺酶，保护抗生素免受破坏，可抑制PPNG菌株的生长，但对非PPNG菌株则不发挥显著意义的作用。　棒酸和青霉烷砜的药代动力学特点分别与阿莫西林（羟氨苄青霉素）和氨苄西林（氨苄青霉素）相似，各适于与后者联合使用。　③氨基糖甙类和氨基环状糖醇类：主要作用为抑制菌体蛋白合成。用于治疗对青霉素耐药或过敏的患者。前一类常用者有庆大霉素（gentamycin）、卡那霉素（kanamycin）、阿米卡星（丁胺卡那霉素）和奈替米星（乙基西梭霉素）；后一类药物主要是大观霉素（淋必治），它对PPNG菌株和非PPNG菌株引起的单纯型淋病的治愈率高达98%以上，对有合并症型淋病也有极佳的疗效；并且，该药与青霉素和头孢菌素类不产生交叉耐药性，使用安全，是治疗淋病的最佳药物之一。　目前，在一些地区已出现了耐大观霉素的淋球菌菌株。其换代产品trospectomycin的抗菌谱较大观霉素宽，包括Gram阳性菌、阴性菌、厌氧菌和衣原体，并且，它的组织内浓度更高，半衰期更长，因此对淋病效果更好，还对衣原体性尿道炎有较好的疗效。　④头孢菌素类：具有破坏菌壁和抑制菌体蛋白合成的作用。虽也属于含β-内酰胺环的抗生素，但它们对β-内酰胺酶比较稳定或十分稳定，因此，对PPNG菌株和染色体介导的耐药菌株所致的淋病，常能有效地取代青霉素类。大观霉素耐药菌株的出现使它们成为可行性代用品。　常用的头孢菌素有头孢唑林（cefazolin）、头孢西丁（cefoxitin）、头孢呋辛（西力欣）、头孢噻肟（cefotaxime）、头孢哌酮（先锋必）、头孢唑肟（益保世灵）、头孢他啶（复达欣）和头孢曲松（头孢三嗪）。其中以头孢曲松（头孢三嗪）和头孢他啶疗效较佳。拉氧头孢（氧杂头霉唑）在脑脊液中浓度很高，很适于治疗淋菌性脑膜炎。　⑤氟喹诺酮类：通过抑制DNA旋转酶而抑制菌体DNA及蛋白合成。治疗淋病常用的制剂有诺氟沙星（氟哌酸）、依诺沙星（氟啶酸）、氧氟沙星（氟嗪酸）和环丙沙星（环丙氟哌酸）等。在体外试验中，它们对PPNG菌株和非PPNG菌株均有良好的抗菌作用。据报告，诺氟沙星（氟哌酸）对单纯型淋病的治愈率为97%，依诺沙星（氟啶酸）、氧氟沙星（氟嗪酸）和环丙沙星（环丙氟哌酸）治疗淋病的效果很好，对衣原体感染也有一定的疗效。　近年，用娇妍洁阴洗液清洗或灌洗阴部，消毒、抑菌配合口服药治疗效果尚佳。⑥四环素类：通过抑制菌体蛋白的生物合成而发挥作用。对淋病也有较好的疗效，但不作为一线用药。常用的有四环素（tetracycline）、多西环素（强力霉素）和米诺环素(美满霉素)等。　⑦大环内酯类：抑制菌体蛋白的生物合成。不作为一线用药，主要用作四环素类的替代品。近来报告，阿奇霉素（azithromycin）单剂量1.0g对无合并症淋病的治愈率为96.4%，对同时合并衣原体感染的治愈率为100%。　⑧氯霉素类：抑制菌体蛋白的生物合成。常用甲砜霉素（将克）单剂量2.5g，对无合并症淋病的治愈率为93%。　⑨林可霉素类：在体内组织浓度高，低毒，安全，对厌氧菌有良效。常用克林霉素（氯洁霉素）治疗盆腔炎。　⑩利福霉素类：对Gram阴性和阳性菌的作用均很强，且对麻风杆菌、病毒、衣原体感染有效。常用药物有利福平（rifampin）和利福定（rifamdin）等。　(11)磺胺类：对Gram阴性和阳性菌均有较强的抑制作用。常用的药物有磺胺甲恶唑（新诺明）、磺胺甲恶唑/甲氧苄啶（复方新诺明）及丙磺舒等。　4、局部疗法局部疗法仅作为抗菌疗法辅助措施，起清洁、去除分泌物等作用。　⑴泌尿生殖器淋病：　①可用娇妍洁阴洗液清洗局部，并消毒、抑菌。　②也可用苦参30g，野菊花30g，银花20g，黄柏20g，蛇床子20g，白矾15 g，侧柏叶15g，水煎外洗患处。　⑵淋菌性眼炎：应用等渗盐水或眼科缓冲液冲洗患眼，清除分泌物，每2小时1次。冲洗后用0.5%红霉素滴眼液或1%硝酸银滴眼液点眼。　⑶淋菌性咽炎：可用ecu漱口水或溶菌酶片口含。　5、手术疗法　⑴淋菌性盆腔炎：淋菌性盆腔炎患者发生输卵管卵巢脓肿，经48～72h积极治疗无效或破裂者，应手术切除病变组织，清洗腹腔，放置引流，并尽量保留生育功能。　⑵慢性淋病：慢性淋病并发明显的尿道狭窄者，可行尿道扩张术或尿道环状切除术。　6、治愈标准与疗后观察　⑴治愈标准：在治疗结束后3周内，无性接触的情况下，符合下列标准即可判为治愈。　①临床症状和体征全部消失。　②尿液澄清透明。　③男性应在临床症状消失后2周，经前列腺按摩，并全程尿及分段尿沉渣取材，女性应在临床症状消失后1周从宫颈口或尿道口取材，分别作前列腺按摩液、尿沉渣或分泌物涂片和培养，每5～7天1次，连续2次淋球菌培养均阴性。　值得注意的是，PCR是通过检测淋球菌隐蔽质粒上的CppB基因存在而确定淋球菌有无的，部分患者治愈后，尿道在一段时间内尚存在有已杀死的含CppB基因无害性、无繁殖力的菌体及其碎片，尽管涂片和培养未检出淋球菌，但PCR可扩增CppB基因，仍可得到阳性结果。因此，PCR检测结果不能作为淋病治愈的指标。　⑵疗后观察：　①对青霉素类治疗的病例，治疗结束后3～7天仍持续有淋病表现者，要考虑可能为PPNG菌株感染。应选用针对耐药菌株的药物进行治疗。　②经上述治疗后，仍有淋病表现者，可能系对大观霉素或头孢曲松（头孢三嗪）耐药。应作药物敏感试验，改用敏感药物。　③经过治疗后，淋病又复发，则为再感染或重复感染，不一定是治疗失败。应对患者进行宣传教育，并对其性伴侣进行检查，诊断，必要时予以治疗。使用药物如（淋克净组合）　④性伴侣的处理：凡在1个月内和淋病患者有过性接触者，均应进行预防性治疗。如有淋病证据者，则应按淋病的治疗方案接受治疗。中医治疗中医中药可作为淋病治疗的辅助措施，决不可将其当作主要治疗手段，可结合用娇妍洁阴洗液清洗或灌洗阴部，消毒、抑菌。忽视抗菌治疗，否则只会贻误病情，造成本病迁延不愈。　
　　这种病菌拥有自我调节能力，能够通过变异获得抗药性，或者至少使药物的疗效下降，促使淋球菌耐药的因素：①抗生素剂量不足：使淋球菌长期处于亚治疗剂量的作用下，日久便产生对青霉素类的耐药性。②滥用抗生素进行预防：已证明，随意使用青霉素作化学预防很容易促进青霉素耐药菌株的产生。③抗生素多剂量治疗：抗生素多剂量治疗更易在体内选择出氟喹诺酮类耐药性增高的淋球菌菌株。
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淋病奈瑟氏菌二种检测方法结果比较
淋病是国内外最常见的性传播疾病之一,严重影响着人们的身心健康,越来越引起人们的广泛关注,其病原体为淋病奈瑟氏菌.目前,临床上检测淋球菌的方法有很多且各有利弊,其中主要采用的是聚合酶链反应(简称PCR)和细菌培养法两种.本文对我院于2009年6月至2011年12月采用PCR和细菌培养方法检测淋病奈瑟氏菌的结果进行比较,现报告如下.
作者单位：
浙江省三门县沙柳镇中心卫生院检验科,浙江,三门,317100
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淋病奈瑟菌 作品数：被引量：873H指数：12相关领域：医药卫生相关作者：李国明胡四海糜祖煌陈群王蓓相关机构：扬州大学南华大学广东医学院中国医学科学院北京协和医学院相关期刊：相关基金：国家自然科学基金浙江省医药卫生科学研究基金江苏省自然科学基金湖南省教育厅科研基金
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