病毒转染原理及步骤
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载体质粒图谱和多克隆位点信息
pAcGFP1-1 4150 bp
DEFINITION
Location/Qualifiers
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/label=&f1_origin&
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/label=&pBABE_3_primer&
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/label=&ORF frame 3&
terminator
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/label=&pBR322_origin&
1 TAGTTATTAC TAGCGCTACC GGACTCAGAT CTCGAGCTCA AGCTTCGAAT TCTGCAGTCG
61 ACGGTACCGC GGGCCCGGGA TCCACCGGTC GCCACCATGG TGAGCAAGGG CGCCGAGCTG
121 TTCACCGGCA TCGTGCCCAT CCTGATCGAG CTGAATGGCG ATGTGAATGG CCACAAGTTC
181 AGCGTGAGCG GCGAGGGCGA GGGCGATGCC ACCTACGGCA AGCTGACCCT GAAGTTCATC
241 TGCACCACCG GCAAGCTGCC TGTGCCCTGG CCCACCCTGG TGACCACCCT GAGCTACGGC
301 GTGCAGTGCT TCTCACGCTA CCCCGATCAC ATGAAGCAGC ACGACTTCTT CAAGAGCGCC
361 ATGCCTGAGG GCTACATCCA GGAGCGCACC ATCTTCTTCG AGGATGACGG CAACTACAAG
421 TCGCGCGCCG AGGTGAAGTT CGAGGGCGAT ACCCTGGTGA ATCGCATCGA GCTGACCGGC
481 ACCGATTTCA AGGAGGATGG CAACATCCTG GGCAATAAGA TGGAGTACAA CTACAACGCC
541 CACAATGTGT ACATCATGAC CGACAAGGCC AAGAATGGCA TCAAGGTGAA CTTCAAGATC
601 CGCCACAACA TCGAGGATGG CAGCGTGCAG CTGGCCGACC ACTACCAGCA GAATACCCCC
661 ATCGGCGATG GCCCTGTGCT GCTGCCCGAT AACCACTACC TGTCCACCCA GAGCGCCCTG
721 TCCAAGGACC CCAACGAGAA GCGCGATCAC ATGATCTACT TCGGCTTCGT GACCGCCGCC
781 GCCATCACCC ACGGCATGGA TGAGCTGTAC AAGTGAGCGG CCGCGACTCT AGATCATAAT
841 CAGCCATACC ACATTTGTAG AGGTTTTACT TGCTTTAAAA AACCTCCCAC ACCTCCCCCT
901 GAACCTGAAA CATAAAATGA ATGCAATTGT TGTTGTTAAC TTGTTTATTG CAGCTTATAA
961 TGGTTACAAA TAAAGCAATA GCATCACAAA TTTCACAAAT AAAGCATTTT TTTCACTGCA
1021 TTCTAGTTGT GGTTTGTCCA AACTCATCAA TGTATCTTAA GGCGTAAATT GTAAGCGTTA
1081 ATATTTTGTT AAAATTCGCG TTAAATTTTT GTTAAATCAG CTCATTTTTT AACCAATAGG
1141 CCGAAATCGG CAAAATCCCT TATAAATCAA AAGAATAGAC CGAGATAGGG TTGAGTGTTG
1201 TTCCAGTTTG GAACAAGAGT CCACTATTAA AGAACGTGGA CTCCAACGTC AAAGGGCGAA
1261 AAACCGTCTA TCAGGGCGAT GGCCCACTAC GTGAACCATC ACCCTAATCA AGTTTTTTGG
1321 GGTCGAGGTG CCGTAAAGCA CTAAATCGGA ACCCTAAAGG GAGCCCCCGA TTTAGAGCTT
1381 GACGGGGAAA GCCGGCGAAC GTGGCGAGAA AGGAAGGGAA GAAAGCGAAA GGAGCGGGCG
1441 CTAGGGCGCT GGCAAGTGTA GCGGTCACGC TGCGCGTAAC CACCACACCC GCCGCGCTTA
1501 ATGCGCCGCT ACAGGGCGCG TCAGGTGGCA CTTTTCGGGG AAATGTGCGC GGAACCCCTA
1561 TTTGTTTATT TTTCTAAATA CATTCAAATA TGTATCCGCT CATGAGACAA TAACCCTGAT
1621 AAATGCTTCA ATAATATTGA AAAAGGAAGA GTCCTGAGGC GGAAAGAACC AGCTGTGGAA
1681 TGTGTGTCAG TTAGGGTGTG GAAAGTCCCC AGGCTCCCCA GCAGGCAGAA GTATGCAAAG
1741 CATGCATCTC AATTAGTCAG CAACCAGGTG TGGAAAGTCC CCAGGCTCCC CAGCAGGCAG
1801 AAGTATGCAA AGCATGCATC TCAATTAGTC AGCAACCATA GTCCCGCCCC TAACTCCGCC
1861 CATCCCGCCC CTAACTCCGC CCAGTTCCGC CCATTCTCCG CCCCATGGCT GACTAATTTT
1921 TTTTATTTAT GCAGAGGCCG AGGCCGCCTC GGCCTCTGAG CTATTCCAGA AGTAGTGAGG
1981 AGGCTTTTTT GGAGGCCTAG GCTTTTGCAA AGATCGATCA AGAGACAGGA TGAGGATCGT
2041 TTCGCATGAT TGAACAAGAT GGATTGCACG CAGGTTCTCC GGCCGCTTGG GTGGAGAGGC
2101 TATTCGGCTA TGACTGGGCA CAACAGACAA TCGGCTGCTC TGATGCCGCC GTGTTCCGGC
2161 TGTCAGCGCA GGGGCGCCCG GTTCTTTTTG TCAAGACCGA CCTGTCCGGT GCCCTGAATG
2221 AACTGCAAGA CGAGGCAGCG CGGCTATCGT GGCTGGCCAC GACGGGCGTT CCTTGCGCAG
2281 CTGTGCTCGA CGTTGTCACT GAAGCGGGAA GGGACTGGCT GCTATTGGGC GAAGTGCCGG
2341 GGCAGGATCT CCTGTCATCT CACCTTGCTC CTGCCGAGAA AGTATCCATC ATGGCTGATG
2401 CAATGCGGCG GCTGCATACG CTTGATCCGG CTACCTGCCC ATTCGACCAC CAAGCGAAAC
2461 ATCGCATCGA GCGAGCACGT ACTCGGATGG AAGCCGGTCT TGTCGATCAG GATGATCTGG
2521 ACGAAGAGCA TCAGGGGCTC GCGCCAGCCG AACTGTTCGC CAGGCTCAAG GCGAGCATGC
2581 CCGACGGCGA GGATCTCGTC GTGACCCATG GCGATGCCTG CTTGCCGAAT ATCATGGTGG
2641 AAAATGGCCG CTTTTCTGGA TTCATCGACT GTGGCCGGCT GGGTGTGGCG GACCGCTATC
2701 AGGACATAGC GTTGGCTACC CGTGATATTG CTGAAGAGCT TGGCGGCGAA TGGGCTGACC
2761 GCTTCCTCGT GCTTTACGGT ATCGCCGCTC CCGATTCGCA GCGCATCGCC TTCTATCGCC
2821 TTCTTGACGA GTTCTTCTGA GCGGGACTCT GGGGTTCGAA ATGACCGACC AAGCGACGCC
2881 CAACCTGCCA TCACGAGATT TCGATTCCAC CGCCGCCTTC TATGAAAGGT TGGGCTTCGG
2941 AATCGTTTTC CGGGACGCCG GCTGGATGAT CCTCCAGCGC GGGGATCTCA TGCTGGAGTT
3001 CTTCGCCCAC CCTAGGGGGA GGCTAACTGA AACACGGAAG GAGACAATAC CGGAAGGAAC
3061 CCGCGCTATG ACGGCAATAA AAAGACAGAA TAAAACGCAC GGTGTTGGGT CGTTTGTTCA
3121 TAAACGCGGG GTTCGGTCCC AGGGCTGGCA CTCTGTCGAT ACCCCACCGA GACCCCATTG
3181 GGGCCAATAC GCCCGCGTTT CTTCCTTTTC CCCACCCCAC CCCCCAAGTT CGGGTGAAGG
3241 CCCAGGGCTC GCAGCCAACG TCGGGGCGGC AGGCCCTGCC ATAGCCTCAG GTTACTCATA
3301 TATACTTTAG ATTGATTTAA AACTTCATTT TTAATTTAAA AGGATCTAGG TGAAGATCCT
3361 TTTTGATAAT CTCATGACCA AAATCCCTTA ACGTGAGTTT TCGTTCCACT GAGCGTCAGA
3421 CCCCGTAGAA AAGATCAAAG GATCTTCTTG AGATCCTTTT TTTCTGCGCG TAATCTGCTG
3481 CTTGCAAACA AAAAAACCAC CGCTACCAGC GGTGGTTTGT TTGCCGGATC AAGAGCTACC
3541 AACTCTTTTT CCGAAGGTAA CTGGCTTCAG CAGAGCGCAG ATACCAAATA CTGTCCTTCT
3601 AGTGTAGCCG TAGTTAGGCC ACCACTTCAA GAACTCTGTA GCACCGCCTA CATACCTCGC
3661 TCTGCTAATC CTGTTACCAG TGGCTGCTGC CAGTGGCGAT AAGTCGTGTC TTACCGGGTT
3721 GGACTCAAGA CGATAGTTAC CGGATAAGGC GCAGCGGTCG GGCTGAACGG GGGGTTCGTG
3781 CACACAGCCC AGCTTGGAGC GAACGACCTA CACCGAACTG AGATACCTAC AGCGTGAGCT
3841 ATGAGAAAGC GCCACGCTTC CCGAAGGGAG AAAGGCGGAC AGGTATCCGG TAAGCGGCAG
3901 GGTCGGAACA GGAGAGCGCA CGAGGGAGCT TCCAGGGGGA AACGCCTGGT ATCTTTATAG
3961 TCCTGTCGGG TTTCGCCACC TCTGACTTGA GCGTCGATTT TTGTGATGCT CGTCAGGGGG
4021 GCGGAGCCTA TGGAAAAACG CCAGCAACGC GGCCTTTTTA CGGTTCCTGG CCTTTTGCTG
4081 GCCTTTTGCT CACATGTTCT TTCCTGCGTT ATCCCCTGAT TCTGTGGATA ACCGTATTAC
4141 CGCCATGCAT
载体质粒图谱pdf版和相关资料下载
载体应用举例
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[Green fluorescent protein：绿色荧光蛋白（gfp）]
英文: Expression of Green Fluorescent Protein (GFP) Fused Gene in Preimplantation Embryos of Mice 中文:
绿色荧光蛋白融合基因在小鼠早期胚胎表达的研究
英文: AIM: To observe the enhanced green fluorescent protein (EGFP) gene expression and cytotoxicity in human adipose derived adult stem cells (hADSCs) by pEGFP-N1, Ad5-EGFP and rAAV-2/1-EGFP, and investigate the suitable gene-transferred vehicle. 中文:
目的:观察脂质体介导质粒pEGFP-N1、重组腺病毒Ad5-EGFP、重组腺相关病毒rAAV-2/1-EGFP基因转染人脂肪来源成体干细胞后增强型绿色荧光蛋白的表达及细胞毒性,探讨适用于脂肪来源的成体干细胞的转基因方法。
英文: Application of Green Fluorescent Protein Gene (gfp) in the Symbiosis between Mesorhizobium Huakuii and Astragalus Sinicus 中文:
绿色荧光蛋白基因gfp在华癸中生根瘤菌与紫云英共生固氮体系研究中的应用
英文: Cloning, Expression of Calmodulin Gene of Stevia Rebaudiana Bertoni and Transformation of Green Fluorescent Protein Gene to S. Rebaudiana 中文:
甜菊（Stevia rebaudiana Bertoni）钙调蛋白基因的克隆、表达及绿色荧光蛋白基因转化甜菊的研究
英文: Construction and Expression of the Murine β_2m Antisense RNA Recombinant Green Fluorescent Protein Vector 中文:
小鼠β_2m反义核酸重组荧光蛋白表达载体的构建及表达研究
1.Construction of a specific green fluorescent protein expression vector de-rived from promotor of human nucleotide-binding oligomerization do-main-2 gene
人NOD2基因启动子的绿色荧光蛋白表达载体的构建来源：
2.Expression of the Mutant Green Fluorescent Protein Gene in Insect Cells and Larvaae
突变型绿色荧光蛋白基因在昆虫细胞和幼虫中的表达
3.Study on Introduction of the Green Fluorescent Protein Gene into E.coli by Using Laser Microbeam
采用激光微束将绿色荧光蛋白基因导入大肠杆菌
4.Expression of Green Fluorescent Protein Vector by Promoter sequence of
CYP21和CYP21P基因启动子序列对绿色荧光蛋白基因表达的影响
5.Effect of green fluorescent protein transfected by lentivirus vector on relevant subpopulation of cancer stem cells of breast cancer cell lines
慢病毒转染绿色荧光蛋白对乳腺癌细胞系肿瘤干细胞相关亚群的影响
6.Expression of green fluorescent protein ( GFP) in Pseudozyma antarctica
绿色荧光蛋白(GFP)基因在Pseudozyma antarctica中的表达
7.Construction of Human PENK and Green Fluorescent Protein Eukaryotic Vector
人前脑啡肽原绿色荧光蛋白真核表达载体的构建
8.siRNA suppresses the green fluorescent protein (GFP) gene expression in human umbilical vein endothelial cells
用小双链RNA抑制转化入HUVEC中绿色荧光蛋白基因的表达
9.Fusion of HBV e Gene with Green Fluorescent Protein Gene and Its Expression in E. coli Cells
乙型肝炎病毒e抗原基因与绿色荧光蛋白基因的融合及其表达
10.Construction of Green Fluorescent Protein Expression Vector pXS75-GFP and Application in Tetrahymena thermophila
绿色荧光蛋白表达载体pXS75-GFP的构建及在嗜热四膜虫中的应用
11.Expression of Green Fluorescent Protein(ZsGreen)in Ulva linza
绿色荧光蛋白(ZsGreen)基因在长石莼细胞中的表达
12.Transduction efficiency of green fluorescent protein gene in leukemia cells K562
绿色荧光蛋白基因在白血病细胞K562中的转导效率
13.Expression of green fluorescent protein gene in rat chondrocytes mediated by lentiviral vector
慢病毒介导绿色荧光蛋白基因转染大鼠软骨细胞表达的研究
14.The Distribution and Green Fluorescent Protein Expression of Transfected Chicken DT40 Cells after Transplanted into Early Chicken Embryos
转基因DT40细胞导入早期鸡胚后的分布及绿色荧光蛋白表达的研究
15.Study of a Novel Report Gene and Green Fluorescent Protein
新型报导基因及绿色荧光蛋白发光特性的研究
16.Construction and Expression of Green Fluorescent Protein Reporter Plasmid Regulated by Quorum-Sensing
群体感应调控的GFP报告质粒构建与表达
17.Expression of Green Fluorescent Protein Gene in Fission Yeast
绿色荧光蛋白基因在裂殖酵母中的表达
18.Integation and Expression of Green Fluorescent Protein Gene Goldfish
绿色荧光蛋白基因在转基因金鱼中的整合与表达
19.Green Fluorescent Proteins MiCy and Citrine as a Novel Donor/Acceptor Pair for Fluorescence Resonance Energy Transfer
荧光蛋白MiCy、Citrine作为FRET传能对的研究
20.Co-expression of both green fluorescent protein and myogenic regulatory factors in bone marrow-derived mesenchymal stem cells
绿色荧光蛋白和成肌调节因子在骨髓基质干细胞中的共表达
21.Transformation of Green Fluorescent Protein Gene into the Carrot Tissue and Expression of the Gene
绿色荧光蛋白基因导入胡萝卜愈伤组织并获得表达
22.Expression of fused protein A-green fluorescent protein (PA-GFP)
蛋白A-绿色荧光蛋白融合蛋白的构建与表达
23.Use of Green Fluorescent Protein Gene to Label Bacillus subtilis Strains
绿色荧光蛋白基因对枯草芽胞杆菌的标记
24.SURVIVAL
AND STABILITY OF GREEN FLUORESCENT PROTEIN
MARKED (GFP-MARKED) AEROMONAS HYDROPHILA IN WARM WATER
绿色荧光蛋白标记的嗜水气单胞菌在温暖水体的存活及稳定性
25.Use of Green Fluorescent Protein to Study the Relationship between Legionella pneumophila and Its Protozoan Host
用绿色荧光蛋白研究军团菌与寄主的相互关系
26.Transdermal delivery of fusion green fluorescent protein mediated by covalently associated TD1 peptide
TD1修饰绿色荧光蛋白透皮功能的研究(英文)
27.Green fluorescent protein in Candida albicans-related studies
绿色荧光蛋白在白念珠菌研究中的应用
28.Expression Levels of Green Fluorescent Protein in Dicistronic Plasmids in Escherichia coli
大肠杆菌双顺反子表达载体中绿色荧光蛋白表达水平的研究
29.Expression of Green Fluorescent Protein Gene in
Pseudosciaena crocea
绿色荧光蛋白基因在大黄鱼体内的表达
30.Expression of Green Fluorescent Protein Using an Infectious cDNA Clone of Infectious Bronchitis Virus
表达绿色荧光蛋白的重组鸡传染性支气管炎病毒的构建
31.New Applications of Green Fluorescent Protein in Tumor In Vivo Optical Imaging
绿色荧光蛋白在肿瘤活体光学成像中的应用新进展
32.Green fluorescent protein of the jellyfish Aequorea macrodactyla
大型多管水母的绿色荧光蛋白
33.Applications of green fluorescent protein in plant pathology
绿色荧光蛋白在植物病理学研究中的应用
34.Construction of green fluorescent protein retroviral vector and its expression in various cell types
绿色荧光蛋白逆转录病毒载体的构建及其表达
35.Enhanced green fluorescent protein labeling technology in monitoring the formation of tissue-engineered bone
增强型绿色荧光蛋白标记技术示踪组织工程化骨形成
36.Green fluorescent protein and its application in production of transgenic animals
绿荧光蛋白及其在转基因动物研究中的应用
37.APPLICATION OF ENHANCED GREEN FLUORESCENT PROTEIN LABELING TECHNOLOGY TO MONITORING MARROW MESENCHYMAL STEM CELLS MIGRATION AFTER BONE FRACTURE
增强型绿色荧光蛋白标记技术对骨折后骨髓间充质干细胞的迁移示踪
38.Green fluorescent protein as a marker of neural stem cells
绿色荧光蛋白作为神经干细胞示踪标记的实验研究
39.Fluorescence of Green Fluorescent Protein was Disappeared in Cells Fixed with Methanol
甲醇固定导致绿色荧光蛋白的荧光消失
40.The expression of green fluorescent protein regulated by estrogen hormone in yeast cell
雌激素调控的绿色荧光蛋白在酵母细胞中的表达
Fluorescent Proteins as a Visible Molecular Signal for Rapid Quantification of Bioprocesses: Potential and Challenges
荧光蛋白作为生物过程快速定量的可视化分子信号:潜力和挑战(英文)
Green fluorescent protein and its application in production of transgenic animals
绿荧光蛋白及其在转基因动物研究中的应用
Green Fluorescent Protein and Its Application
in Cell Analysis
绿色荧光蛋白在细胞分析中的应用
Applications of Green Fluorescent Protein in Transgenic Research
绿色荧光蛋白在转基因研究中的应用
Progress on Green Fluorescent Protein Research
绿荧光蛋白(GFP)研究进展
Application of Green Fluorescent Protein(GFP) in Molecular Biology Research
绿色荧光蛋白及其在分子生物学上的应用
GREEN FLUORESCENT PROTEIN AND ITS
APPLICATION IN PLANT RESEARCH
绿色荧光蛋白及其在植物研究中的应用
CLONE AND SEQUENCE OF MAJOR CAPSID PROTEIN IN COCCOLITHOPHORID EMILIANIA HUXLEYI VIRUS
海洋球石藻Emiliania huxleyi(Prymnesiophyceae)病毒主要外壳蛋白基因的克隆与序列分析
Construction and identification of lentiviral expression vector containing human Synoviolin gene and enhanced green fluorescent protein gene
携EGFP的人Synoviolin基因慢病毒表达载体的构建与鉴定
Analysis of the Protein Structure based on the amino acids characteristics sequences
基于氨基酸特征序列的蛋白质结构分析
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腺相关病毒包装（AAV）、慢病毒包装、腺病毒包装、细胞转染、病毒在体转染【技术答疑】（精华贴-吐血长期在线解答）战友们，点击投票助本贴上丁香园首页咯！&[精华]
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罗西小荷 楼主，请教下，我们实验目的细胞是原代分离的T细胞，我们用慢病毒和腺病毒感染都效率不高，请问有什么好的方法呢？要用离心法吗？多少转数？你有经验吗？能否传授下！多谢啦！ 原代T细胞的转染是一个大难题，悬浮，脆弱，培养条件苛刻！常规就是慢病毒或逆转录病毒，离心感染多次效果也不会太好！还需要CD3/CD28+IL-2激活！普通Ad5型腺病毒对原代T细胞没用！ 最近听汉恒的技术说他们内部好像有针对原代T细胞的特效腺病毒，也是Duang～了
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你做哪个基因啊？看看维真生物网站搜索一下，他们有一万多个腺病毒现货呢，直接就可以用，更节省了你的时间啊！
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您好，楼主，我养的是原代的肺成纤维细胞，想要做siRNA，这个细胞文献中有些用病毒转染，有些用脂质体转染，但是我前期用过国产的脂质体转染，但是不知道是不是siRNa序列的问题还是转染试剂的问题，沉默效率不好，想请问下，是不是换进口的会好些？还是要做病毒转染？原代只能用4—6代，那选择病毒转染的话，是腺病毒还是慢病毒要效果好且经济呢？
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vigene 你做哪个基因啊？看看维真生物网站搜索一下，他们有一万多个腺病毒现货呢，直接就可以用，更节省了你的时间啊！大忽悠～～
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您好 我想做胰腺癌裸鼠模型 进行RNAi 模型没考虑好 正在尝试原位癌能否成功 可否推荐下病毒选择 咨询了两个公司 给出了不同的意见 有建议慢病毒 稳转后成瘤 有建议成瘤后打腺病毒 因为实验周期大概4-8周 综合考虑下 哪个更有优势 更划算 谢谢
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gyjq 您好，楼主，我养的是原代的肺成纤维细胞，想要做siRNA，这个细胞文献中有些用病毒转染，有些用脂质体转染，但是我前期用过国产的脂质体转染，但是不知道是不是siRNa序列的问题还是转染试剂的问题，沉默效率不好，想请问下，是不是换进口的会好些？还是要做病毒转染？原代只能用4—6代，那选择病毒转染的话，是腺病毒还是慢病毒要效果好且经济呢？我建议用病毒转，原代成纤维用慢病毒转就行。
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293bbs 我建议用病毒转，原代成纤维用慢病毒转就行。 谢谢楼主~
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楼主你好，我想做腺病毒转染，目前有两种考虑：1 委托基因公司全基因合成CDS区域序列并测序；2 委托基因公司直接包装含目的基因的腺病毒；能不能分析两种方法的利弊及可行性？非常感谢
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在做慢病毒包装的时候，有说需要用无血清DMEM的，有说用无抗生素DMEM的，请问老师血清和抗生素对慢病毒包装有什么影响？
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lile1989 您好 我想做胰腺癌裸鼠模型 进行RNAi 模型没考虑好 正在尝试原位癌能否成功 可否推荐下病毒选择 咨询了两个公司 给出了不同的意见 有建议慢病毒 稳转后成瘤 有建议成瘤后打腺病毒 因为实验周期大概4-8周 综合考虑下 哪个更有优势 更划算 谢谢两种方式都可以，说明的是两个方面的问题。一个是成瘤看瘤子趋势，主要是肿瘤发展过程的问题，一个是瘤内注射，说明的是对肿瘤的杀伤作用。。
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vigene 汉恒的货期太慢了吧！有个维真生物，他们腺病毒有一万个现货，滴度也很高，价钱也很便宜！他们也有AAV呢，国内很少公司有的，滴度更高，可以注射活体的哈！能不能不在我的答疑贴里广告！还有，你做广告前能不能先改改名字～ 你的ID是vigene，我百度了下中文不就是维真～～
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cgensina 楼主你好，我想做腺病毒转染，目前有两种考虑：1 委托基因公司全基因合成CDS区域序列并测序；2 委托基因公司直接包装含目的基因的腺病毒；能不能分析两种方法的利弊及可行性？非常感谢 hello，这两种方法不是二选一的啊，要包某基因CDS区慢病毒，肯定需要先有CDS区的模板，不管是调取还是全合成。你全合成并测序成功后亚克隆到腺病毒载体上，然后行腺病毒包装。就是说，先1再2，都可行，常规操作而已。
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心沉书海 在做慢病毒包装的时候，有说需要用无血清DMEM的，有说用无抗生素DMEM的，请问老师血清和抗生素对慢病毒包装有什么影响？与其说是对慢病毒包装的影响不如说主要是对转染的影响吧。转染不好，病毒肯定包不好！转染的时候建议去血清，抗生素可以加的。
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我想做肿瘤细胞的基因敲除，p53siRNA,但是具体不太清楚呢
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我要用pmd2g,pesv-rev,pmdlg/prre加目的质粒包病毒，我想问这四种质粒的量应该各是多少（15cm的培养皿）？四种质粒之间的比例是按什么标准确定的？lipo2000说明书上有6孔板的推荐量，我要用15cm的皿，lipo2000的量应该按什么标准扩大？比如，6孔板中细胞数是10，应该加lipo2000
10ul，15cm平皿细胞数是100，所以lipo2000应该加10X10=100ul，这样算对吗？谢谢老师！
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还有一个问题，慢病毒包装对质粒的质量要求很高吗？质粒必须去内毒素吗?一般的国产小提质粒试剂盒提出来的质粒可以用来做慢病毒包装吗？要是质粒A260/A230比较低，比如1.5,，，1.6这个水平，还能用来做慢病毒包装吗？谢谢老师！
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大pp 我想做肿瘤细胞的基因敲除，p53siRNA,但是具体不太清楚呢 你是要做p53的干扰吧，不是敲除！要搞清楚你后续要检测的指标，持续的模型时间，动物实验等！
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心沉书海 还有一个问题，慢病毒包装对质粒的质量要求很高吗？质粒必须去内毒素吗?一般的国产小提质粒试剂盒提出来的质粒可以用来做慢病毒包装吗？要是质粒A260/A230比较低，比如1.5,，，1.6这个水平，还能用来做慢病毒包装吗？谢谢老师！ 病毒包装对质粒的质量要求较高，一个是转染效率，一个是细胞毒性！1.5-1.6纯度不会太高，但也能包出毒来。包毒前先跑胶看看质粒的质量，光ratio值只能看纯度，并不能真正衡量质量。
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楼主你好，我最近打算作CAR病毒包装，转染nk细胞，传统的慢病毒转染效率只有10%左右，腺病毒也不常用，请问有什么好的病毒质粒包装系统吗？谢谢！
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1万的质粒你的目标片段估计也有3000bp了，慢病毒包装这样的长度很吃力的，滴度低，上不去。你可以看看，慢病毒载体两个LTR之间近8000bp就很难包装了，且滴度呈现指数下降。这种情况下建议你用腺病毒来做，腺病毒滴度高，感染效果好，扩增又方便，且容纳量大（外源5.5kb）。 请问楼主，目的片段CDS 4kb，这种长度做稳转成功的几率大吗？我没做过转染，但据我所了解，小于3kb就很难做了！谢谢！
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楼主你好，我把你从发的第一帖一直看到最后，感谢你在将近一年里为大家分享的经验。我有几个问题想要请教，现在正在做慢病毒载体感染Vero细胞，希望筛选一株能够表达受体蛋白的细胞系。使用的病毒载体是pLVX-IRES-Puro，目的片段1500bp，包装质粒为psPAX2和pMD2.0G，使用的比例大约是1.5:1:0.5，包装细胞用的是293T，铺6孔板，质粒总量约为2.5ug。包装细胞没有问题，做过多次转染验证。因为实验室条件所限，没有超离设备，上清没有浓缩，直接在48h和72h收集上清后孵育Vero细胞，上清与培养基比例按1:1、2:1、4:1都试过，4d后固定Vero细胞做间接免疫荧光，没有看到荧光。按您的经验来看，流程是否正确，这三种质粒的组合能不能包装出病毒？
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老师，你好，我想做慢病毒的稳定表达株的构建，可以推荐一下哪家公司做的好么？如果构建好的慢病毒载体直接注射到小鼠肌肉里面，感染的效率好么？需要注意哪些问题呀？构建一次慢病毒载体可以感染几次呢？新人很多东西不懂，还请老师多多指教
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老师您好，获益匪浅啊。请教一下，我之前用MSCV加PCL-ECO包装逆转录病毒，但是这种病毒只能感染小鼠。现在有人建议我用VSVG,GAG/POL包装，可以用于感染人的细胞。请问后面这两个包装质粒有什么特殊要求么。需要逆转录病毒特殊的G/P么？请指教。谢谢。
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老师，您好，我想包腺相关病毒，从国外实验室带回来的构建好的质粒，知道哪家公司能做吗
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对AAV病毒包装转染293后病毒颗粒是多集中在培养液还是细胞中？采用何种方式浓缩？求赐教！
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楼主你好，想请教个问题。我的目的片段大约3800bp，之前构建了2个载体，一个是pcDNA3.1，另一个是老板自备的质粒，空质粒大约5kb。现在想转染乳腺癌细胞MDA-MB-231，用的慢病毒包装系统是同学的VSVG(750ng)，Pmdlg/pRRE(1.5ug)，p-Rsv-Rev(1ug)。包装293T细胞，对照的GFP还是很亮的，然后用病毒上清转染231细胞，对照组的GFP到72-96小时候大概只有3,4成亮，用免疫荧光检测转染后细胞的表达好像也没检测出来。后期准备转染后做流式分选，然后裸鼠接瘤的。不知道该怎么办，求助专家看有没有什么好的建议或者改进的地方，谢谢。
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第三代慢病毒包装系统，transfer plasmid：pMDLg/pRRE：pRSV-Rev：pMD2G，有几个比例：最无伤大雅的：1：1：1：1实际上比较好的：3：3：1：1这两个病毒包装比例都可以老师你这个比例都是摩尔比吗？这个比例的依据是什么？
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楼主你好，我要做基因的knockdown，手头有个质粒pSUPER.retro.puro，质粒说明书中说可以用于逆转录病毒转染。我想用慢病毒体系转，不止可否用这个质粒？逆转录病毒和慢病毒的transfer vector的结构上具体有什么差异呢？这是这个质粒的基因图谱。先谢谢啦！
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质粒说明书中是这么说的
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whpjecy 楼主你好，我最近打算作CAR病毒包装，转染nk细胞，传统的慢病毒转染效率只有10%左右，腺病毒也不常用，请问有什么好的病毒质粒包装系统吗？谢谢！ NK 不是太好转染的细胞，一般用慢病毒，逆转录病毒比较多，腺病毒普通的Ad5F5型不好感染，可以考虑用Ad5F35型腺病毒，效果会好很多。CAR本身比较大，慢病毒包出来滴度是个问题，最好先做前期预实验。
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绿色的地球
请问楼主，目的片段CDS 4kb，这种长度做稳转成功的几率大吗？我没做过转染，但据我所了解，小于3kb就很难做了！谢谢！ 也看细胞，不过，基本上这个，很难～慢病毒都很难出毒，如果是293细胞之类好感染的细胞，还能建，如果是难感染的细胞，就确实不好做了！另外你是否一定需要稳转？最好自己明确实验目的，有些稳转实际并无必要!
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moveleft 楼主你好，我把你从发的第一帖一直看到最后，感谢你在将近一年里为大家分享的经验。我有几个问题想要请教，现在正在做慢病毒载体感染Vero细胞，希望筛选一株能够表达受体蛋白的细胞系。使用的病毒载体是pLVX-IRES-Puro，目的片段1500bp，包装质粒为psPAX2和pMD2.0G，使用的比例大约是1.5:1:0.5，包装细胞用的是293T，铺6孔板，质粒总量约为2.5ug。包装细胞没有问题，做过多次转染验证。因为实验室条件所限，没有超离设备，上清没有浓缩，直接在48h和72h收集上清后孵育Vero细胞，上清与培养基比例按1:1、2:1、4:1都试过，4d后固定Vero细胞做间接免疫荧光，没有看到荧光。按您的经验来看，流程是否正确，这三种质粒的组合能不能包装出病毒？pLVX-IRES-Puro 本身不带荧光的……建议如下：1. 包装过程中同步加一个带GFP的慢病毒质粒，平行包，你可以用pLVX-IRES-zsgreen，一来可以看看你的包毒转染效率，二来后续平行感染可以直接看到 病毒是否包出来了；2.包毒完毕，puro和zsgreen（1中）的病毒感染vero（不同上清比例）同时，感染293T，看看病毒是否包出来，且可以预评估滴度，注意zsgreen可以直接看荧光（偏弱），puro需要加入puromycin杀一杀.注意puro杀的时候一定要设blank组（非病毒感染组），puro杀细胞以blank死光光而puro病毒组部分存活为依据；3.没有超离，也可以不超离的，呵呵~
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老师，你有使用过汉恒生物的mRF-GFP-LC3腺病毒系统吗？我是做细胞自噬方面研究的，对病毒转染这一块不是很懂，如果我购买了这个系统，我还需要插入我的目的条带和构建我的质粒吗？
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潜才 老师，你好，我想做慢病毒的稳定表达株的构建，可以推荐一下哪家公司做的好么？如果构建好的慢病毒载体直接注射到小鼠肌肉里面，感染的效率好么？需要注意哪些问题呀？构建一次慢病毒载体可以感染几次呢？新人很多东西不懂，还请老师多多指教 慢病毒感染小鼠肌肉不咋的的，建议选用腺病毒！病毒包装公司就汉恒或者吉凯咯！
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