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【求助】做抗体与乳胶颗粒偶联，加了EDC后乳胶颗粒无法离心下来怎么办？？？
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这个帖子发布于5年零20天前，其中的信息可能已发生改变或有所发展。
做抗体与乳胶颗粒偶联实验，用EDC活化乳胶颗粒后需要先离心去除EDC，然后用MES洗，但是发现加了EDC后的乳胶颗粒悬浊液始终无法很好的离心分离出乳胶颗粒，总是悬浊液状态，请问大家这该怎么办呢？怎么才能离心的干净一点呢？在论坛内没有找到别人的经验和答案，因此急求解答！谢谢大家！！！
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请问你的离心速度是多少
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我的离心速度从3000一直提高到6000都离心不完全……难道还要提高吗？太高了对乳球颗粒会有影响的吧？
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麻烦大家帮忙支支招啊~~~~~(&_&)~~~~
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选择小粒径的乳胶颗粒的话，离心根本不能沉降下来。用EDC活化并不一定要洗涤，注意调整EDC的量就可以了，有的文献还介绍一步法的，就是加入抗体后再加入EDC的。
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fxx717 选择小粒径的乳胶颗粒的话，离心根本不能沉降下来。用EDC活化并不一定要洗涤，注意调整EDC的量就可以了，有的文献还介绍一步法的，就是加入抗体后再加入EDC的。请问fxx717战友，能否提供我一篇这方面的文献？因为公司下文献不方便……不胜感激！
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fxx717 选择小粒径的乳胶颗粒的话，离心根本不能沉降下来。用EDC活化并不一定要洗涤，注意调整EDC的量就可以了，有的文献还介绍一步法的，就是加入抗体后再加入EDC的。还有一个问题，请问fxx717战友，EDC的量怎么调整呢？降低一半的话，对偶联效率有多大影响呢？这个条件怎么优化？
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zxyshuiling 请问fxx717战友，能否提供我一篇这方面的文献？因为公司下文献不方便……不胜感激！
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谢谢分享！
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非常感谢！！！
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我们用的速度，你可以试试
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2011开水 我们用的速度，你可以试试好的，谢谢~
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您好，最近我也在做乳胶交联实验，有很多问题想请教您，qq：，大家互相交流
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我觉得可能是你活化的问题，乳胶颗粒活化好后，会呈絮状的沉淀，多摸索一下活化的条件吧，主要就是PH。还有我们离心都是10000RPM-12000PRM 6min 左右。
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恩，离心速度太低了，至少1w以上~
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我做60nm微球活化，离心17000rpm 40min，就可以离心下来了。
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是离心速度太低了，我们都是用20000rmp， 30min，对颗粒不会有影响的
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100纳米以下微粒很难离心，20000rmp要很长时间，还不彻底115纳米 20000rmp
一般1.5h***:
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谢谢，正在查找相关资料
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QQ:（ 胶乳试剂技术群）欢迎从事体外诊断试剂的同仁沟通交流，本人从事体外诊断试剂 八年，从生产，质检到研发项目负责人，对体外诊断试剂这一块有一大致了解。另本人长期提供生化仪，血凝仪清洗液，覆盖国内主流仪器，日立7020比色杯。
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离心力太低了，至少1W4rpm，离心15min。乳胶直径越小，离心力就得越高。
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羟基胶乳微球偶联抗体 EDC
各位大侠，我做这个反应已经半个月了，到现在还是一无所获。请知道的了解的大侠给点意见吧，我做的反应是这样的过程：
1 微球在MES缓冲液中（PH6.1）与EDC和sulfo-NHS室温震荡15mins；（看了很多资料和帖子，想提一个问题，到底是由沉淀的反应好还是没有沉淀产生的反应好？谢谢了）
2 收集1反应生成的微球与抗体在室温反应2小时，淬灭，洗涤，悬浮；（我查了文献只看见EDC和sulfo-NHS活化羧基的，EDC和sulfo-NHS能不能活化羟基？反应2能不能发生？谢谢）
3 取2悬浮液进行分析，发现悬浮液与血清和水均有反应度。（这种情况是怎么回事？请知道的同行指点指点吧，谢谢了）
前辈有没有相关文献，如果不涉及泄密的话就请给我一篇吧，谢谢了！，不管是一步法两步法，我现在就是希望能看到产品。自己做出来的产品不是没有反应度就是和水与血清都有反应度，痛苦啊！再次感谢！
羧基聚苯乙烯微球用EDAC与NHS偶联抗体，当时没出现沉淀，但隔夜后出现沉淀是什么原因？而且沉淀量很大，上下分层
我也是有这个问题，正在各种调整，可是效果并:cry:不明显，不知道你有没有解决这个问题？？？:cry:
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【求助】羟基胶乳微球偶联抗体 EDC
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各位大侠，我做这个反应已经半个月了，到现在还是一无所获。请知道的了解的大侠给点意见吧，我做的反应是这样的过程：1 微球在MES缓冲液中（PH6.1）与EDC和sulfo-NHS室温震荡15mins；（看了很多资料和帖子，想提一个问题，到底是由沉淀的反应好还是没有沉淀产生的反应好？谢谢了）2 收集1反应生成的微球与抗体在室温反应2小时，淬灭，洗涤，悬浮；（我查了文献只看见EDC和sulfo-NHS活化羧基的，EDC和sulfo-NHS能不能活化羟基？反应2能不能发生？谢谢）3 取2悬浮液进行分析，发现悬浮液与血清和水均有反应度。（这种情况是怎么回事？请知道的同行指点指点吧，谢谢了）
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我也在做这个啊，我做了一个半月了，出现了各种问题，主要是抗体与微球反应后出现聚集尝试过各种方法都不能解决。怎么解决这个聚集问题？
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头痛啊，现在是做了一个月了。完全没有信心，内心快被摧残垮了
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booze 我也在做这个啊，我做了一个半月了，出现了各种问题，主要是抗体与微球反应后出现聚集尝试过各种方法都不能解决。怎么解决这个聚集问题？ 现在我都怀疑EDC和羧基有没有接上，就没有做成功一次，接完抗体后和抗原没有反应度，，兄弟拉我一把吧
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现在我都怀疑EDC和羧基有没有接上，就没有做成功一次，接完抗体后和抗原没有反应度，，兄弟拉我一把吧我成功过一次，但之后就再也重复不出来了。现在非常郁闷。EDC与羧基没连接上，是不是你的EDC有问题，或者你的buffer PH等原因？
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booze 我成功过一次，但之后就再也重复不出来了。现在非常郁闷。EDC与羧基没连接上，是不是你的EDC有问题，或者你的buffer PH等原因？ 我做出来的胶乳与血清和水都有反应度，你有没遇到过这种情况？buffer我测过PH的啊6.1，谢谢你
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我做出来的胶乳与血清和水都有反应度，你有没遇到过这种情况？buffer我测过PH的啊6.1，谢谢你会造成假阳的，是不是你的乳胶没封闭好或者抗体标记偶联率低？还有你的buffer的PH6.1是偶联抗体的PH还有活化乳胶时的PH？
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booze 会造成假阳的，是不是你的乳胶没封闭好或者抗体标记偶联率低？还有你的buffer的PH6.1是偶联抗体的PH还有活化乳胶时的PH？ buffer的PH6.1是活化乳胶时的PH，偶联抗体的PH是PH7.4 PBS缓冲液，我也不知道在那个环节出现了问题，一点产品都做不出来。我用的是1%BSA封闭，淬灭反应是用甘氨酸，没有用乙醇胺。现在就是盼着做出点东西来，否则日子不好过啊！谢谢您哥们！
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buffer的PH6.1是活化乳胶时的PH，偶联抗体的PH是PH7.4 PBS缓冲液，我也不知道在那个环节出现了问题，一点产品都做不出来。我用的是1%BSA封闭，淬灭反应是用甘氨酸，没有用乙醇胺。现在就是盼着做出点东西来，否则日子不好过啊！谢谢您哥们！ 现在我也遇到些问题，也挺纠结的，我所用的微球跟你的不一样，可能方法存在不同。我封闭是用乙醇胺与1%BSA，但是不同的微球封闭效果都不一样的，这要靠自己摸索。我也在摸索中。。。
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如何判断EDC是否和羧基连接上了呢？微球和抗体偶联不上，到底是哪里出了问题呢？跟题主的条件基本一样的就是没加NHS，也是没结果。。。
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手太白 如何判断EDC是否和羧基连接上了呢？微球和抗体偶联不上，到底是哪里出了问题呢？跟题主的条件基本一样的就是没加NHS，也是没结果。。。 EDC只是活化剂，并不会与羧基连接，反应的是微球的羧基与蛋白的氨基。判断微球与抗体是否连接上有一个简单的办法，比如你微球在14000rpm的情况下才能离心下来，如果偶联成功，你可能用8000rpm就离心下来了。个人经验，仅供参考
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tt2019jy 各位大侠，我做这个反应已经半个月了，到现在还是一无所获。请知道的了解的大侠给点意见吧，我做的反应是这样的过程：1 微球在MES缓冲液中（PH6.1）与EDC和sulfo-NHS室温震荡15mins；（看了很多资料和帖子，想提一个问题，到底是由沉淀的反应好还是没有沉淀产生的反应好？谢谢了）2 收集1反应生成的微球与抗体在室温反应2小时，淬灭，洗涤，悬浮；（我查了文献只看见EDC和sulfo-NHS活化羧基的，EDC和sulfo-NHS能不能活化羟基？反应2能不能发生？谢谢）3 取2悬浮液进行分析，发现悬浮液与血清和水均有反应度。（这种情况是怎么回事？请知道的同行指点指点吧，谢谢了）第一个问题： 我仅用过EDC活化，没有沉淀好，有沉淀可能你的微球已经聚集，EDC过量，需要减量。第二个问题：lz是用EDC活化羟基？第三个问题：出现假阳的原因很可能是你的偶联效果不好
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EDC只是活化剂，并不会与羧基连接，反应的是微球的羧基与蛋白的氨基。判断微球与抗体是否连接上有一个简单的办法，比如你微球在14000rpm的情况下才能离心下来，如果偶联成功，你可能用8000rpm就离心下来了。个人经验，仅供参考 我没有14000rpm就拿不到沉淀，现在还是没有拿到什么好的结果
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doveyido 第一个问题： 我仅用过EDC活化，没有沉淀好，有沉淀可能你的微球已经聚集，EDC过量，需要减量。第二个问题：lz是用EDC活化羟基？第三个问题：出现假阳的原因很可能是你的偶联效果不好 是活化羧基来着，不好意思啊打错了字
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现在我也遇到些问题，也挺纠结的，我所用的微球跟你的不一样，可能方法存在不同。我封闭是用乙醇胺与1%BSA，但是不同的微球封闭效果都不一样的，这要靠自己摸索。我也在摸索中。。。 我重复了网站上的方法/bbs/thread/72064，可以做出来就是效果不好，感觉偶联上去的抗体不多
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我重复了网站上的方法/bbs/thread/72064，可以做出来就是效果不好，感觉偶联上去的抗体不多 那上面的方法可能只适合某一种的微球，不过上面说明的问题，有些还是遇到的，但是给出的解决办法，不是完全能用得上
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【求助】胶乳偶联出现絮凝
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请问大家，我在做60nm聚苯乙烯微球与抗体进行偶联时，出现絮凝，这是什么原因造成的？
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lxw99 edited on
能形容一下具体情况么？是包被过程中，还是包被完成后？包被过程中的话，是活化的时候，包被的时候，还是封闭的时候？沉淀是否在超声后分散？
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同意楼上，要看在哪一步出现凝集？
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1.降低活化剂量；2. 降低胶乳浓度；3. 减少抗体偶联时间；4. 加入表面活性剂等方法试试
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