【图文】PCR检测技术的分析前质量控制_百度文库
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PCR检测技术的分析前质量控制
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PCR诊断技术的实验条件研究
优质期刊推荐库车县人民医院检验科开展了PCR诊断技术。PCR诊断技术又叫多聚酶链式反应技术，是一种用于放大扩增特定的DNA片段的，它可看作是生物体外的特殊DNA复制，PCR技术的最大特点，是能将微量的DNA大幅增加，它采用分子技术模拟核酸在体内的复制，从而判定疾病病原的种类。
⑴PCR技术的基本原理：该技术是在模板DNA、引物和四种脱氧核糖核苷酸存在下，依赖于的酶促合成反应。DNA聚合酶以为模板，借助一小段来启动合成，通过一个或两个人工合成的引物与单链DNA模板中的一段互补序列结合，形成部分双链。在适宜的温度和环境下，DNA聚合酶将脱氧单核苷酸加到引物3?-OH末端，并以此为起始点，沿模板5?→3?方向延伸，合成一条新的DNA互补链。
PCR反应的基本成分包括：模板DNA(待扩增DNA)、引物、4种脱氧核苷酸(dNTPs)、DNA聚合酶和适宜的缓冲液。类似于DNA的天然复制过程，其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。PCR由变性--退火--延伸三个基本反应步骤构成：①模板DNA的高温变性：模板DNA经加热至93℃左右一定时间后，使模板DNA双链或经形成的双链DNA解离，使之成为单链，以便它与引物结合，为下轮反应作准备；②模板DNA与引物的低温退火(复性)：模板DNA经加热变性成单链后，温度降至55℃左右，引物与模板DNA单链的互补序列配对结合；③引物的适温延伸：DNA模板--引物结合物在的作用下，以为反应原料，靶序列为模板，按碱基配对与原理，合成一条新的与模板DNA 链互补的半保留复制链重复循环变性-退火-延伸三过程，就可获得更多的“半保留复制链”，而且这种新链又可成为下次循环的模板。每完成一个循环需2～4分钟， 2～3小时就能将待扩目的基因扩增放大几百万倍。
⑵PCR的反应动力学：PCR的三个反应步骤反复进行，使DNA扩增量呈指数上升。
⑶PCR扩增产物：可分为长产物片段和短产物片段两部分。短产物片段的长度严格地限定在两个引物链5'端之间，是需要扩增的特定片段。“短产物片段”是按指数倍数增加，而“长产物片段”则以算术倍数增加，几乎可以忽略不计，这使得PCR的反应产物不需要再纯化，就能保证足够纯DNA片段供分析与检测用。
所以从本质上来说，PCR技术是一种实验室诊断方法。目前，我院已开展了两个项目：乙肝DNA检测和HPV检测。
（陈雪莹）
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