幽门螺旋杆菌试剂盒能消化蛋白吗

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肠道菌群与疾病的关系
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肠道菌群与疾病的关系
官方公共微信黄粉虫幼虫肠道细菌在其蛋白质消化利用中的作用研究--《西北农林科技大学》2015年硕士论文
黄粉虫幼虫肠道细菌在其蛋白质消化利用中的作用研究
【摘要】:作为一种重要的经济昆虫,黄粉虫营养丰富,蛋白质含量高,蛋白质质量优良,很有可能成为人类的蛋白供应者。黄粉虫还是重要的实验模式昆虫。关于肠道微生物在其营养供应方面的研究很少。本研究利用培养和变性梯度凝胶电泳(DGGE)方法研究了黄粉虫幼虫的肠道细菌组成与分布,并通过抗生素处理的方式探究了肠道细菌在其蛋白质利用过程中可能的作用。主要研究结果如下。通过培养获得了8个菌株,BCH,GD,ZKNR,SCH,BYZZ,PRO,BYP,LBTR,分属于5个属,包括魏斯氏菌属Weissella(BCH,GD,ZKNR)、乳球菌属Lactococcus (SCH,BYZZ)、拉恩氏菌属Rahnella(PRO)、阪崎肠杆菌属Cronobacter (BYP)以及肠球菌属Enterococcus (LBTR)。酪蛋白筛选平板实验中,魏斯式菌属和乳球菌属表现出凝乳活性,阪崎肠杆菌和拉恩式菌属表现出蛋白分解活性。在DGGE图谱上,共有19个细菌条带,通过测序发现,这些条带分属于9个类群,螺原体Spiroplasma,乳球菌属Lactococcus,乳杆菌属Lactobacillus,芽孢杆菌属Bacillus,未培养的芽孢杆菌科Bacillaceae(uncultured)未知属,纤维梭菌属Clostridium,肠杆菌属Enterobacter,泛菌属Pantoea和未知属an uncultured bacterium。这个未知属和已知的一种未培养纤维梭菌属的相似性为87%,有可能是新属。通过DGGE图谱分析可以看出,肠道的四个部分表现出明显的差异,其中后肠的细菌多样性和丰富度最大,其次是中肠后端,再次是前肠,最后是中肠前端。在主成分分析(PCA)中,肠道四个部分的菌群表现出不同,中肠前端和前肠的菌群组成较为相似,中肠后端和后肠较为相似。不同随机群体的后肠微生物组成相似,差异不大,但微生物的丰度在不同的个体间丰度不同。有趣的是,螺原体(通常被认为是昆虫病原菌或者生殖调控菌)在肠道的比例较高,并且在用无菌麦麸饲养的昆虫后肠的比例尤其高,这种菌与黄粉虫的关系值得深入研究。为了探究肠道微生物在其蛋白质利用过程的作用,通过抗生素饲喂的方式处理幼虫并比较生理生化特征的变化。主要包括蛋白分解酶活性、凝乳酶活性、虫体重量、蛋白含量及组成差异。研究结果表明,肠道蛋白分解酶活性和虫体重量没有明显变化,肠道凝乳酶活性显著上升。虫体蛋白含量略有上升,但差异不明显,而虫体蛋白组成在PAGE胶上出现了明显的差异。由此可见,肠道共生菌在黄粉虫蛋白质消化利用中可能起到一定的作用,但具体的过程是如何进行的,还有待于进一步探究。
【关键词】:
【学位授予单位】:西北农林科技大学【学位级别】:硕士【学位授予年份】:2015【分类号】:S899.9【目录】:
摘要5-6abstract6-9第一章 文献综述9-18 1.1 黄粉虫9 1.2 昆虫共生的定义及多样性9-11
1.2.1 昆虫共生的定义9-10
1.2.2 昆虫共生物之间的共生类型10
1.2.3 昆虫共生菌的生态位多样性10-11 1.3 昆虫与肠道共生菌的关系11-15
1.3.1 肠道的结构多样性11-12
1.3.2 肠道共生菌的多样性12
1.3.3 肠道共生菌的功能12-15
1.3.3.1 营养共生12-14
1.3.3.2 肠道微生物对昆虫生长发育和生理的影响14-15
1.3.3.3 肠道微生物对昆虫的保护作用15
1.3.3.4 昆虫共生苗多样性的研究方法15 1.4 微生物群落研究方法15-16
1.4.1 传统的分子生物学手段15-16
1.4.1.1 基因打靶:特异性基因扩增15
1.4.1.2 分子指纹技术15-16
1.4.2 宏基因组16 1.5 研究目的与意义16-18第二章 黄粉虫肠道微生物的组成与分布18-29 2.1 研究方法18-23
2.1.1 供试虫源18
2.1.2 肠道菌的培养及鉴定18-19
2.1.2.1 培养及筛选过程18
2.1.2.2 菌株的鉴定18-19
2.1.3 通过变性梯度凝胶电泳(DGGE)分析黄粉虫肠道共生菌组成19-23
2.1.3.1 试剂配制19-20
2.1.3.2 肠道细菌DNA的提取20
2.1.3.3 肠道细菌V3区扩增20-21
2.1.3.4 变性凝胶梯度电泳(DGGE)的操作过程21-23 2.2 实验结果与分析23-27
2.2.1 肠道可培养菌23
2.2.2 肠道细菌的DGGE分析23-27 2.3 结果讨论27-29第三章 黄粉虫幼虫肠道细菌在其蛋白质利用中的作用29-36 3.1 肠道蛋白分解菌、凝乳菌的分离29
3.1.1 培养及筛选过程29 3.2 抗生素处理后黄粉虫生理生化指标的测定29-31
3.2.1 虫体的处理29
3.2.2 生命特征参数比较29
3.2.3 肠道消化酶活性测定29-30
3.2.4 肠道蛋白表达差异分析30-31
3.2.5 虫体蛋白含量:采用考马斯亮蓝蛋白定量法31 3.3 实验结果31-35
3.3.1 功能菌株的筛选31-32
3.3.2 生命参数32-35 3.4 结果讨论35-36参考文献36-43致谢43-44个人简介44
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