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结核感染T细胞检测在结核病诊断中的应用价值
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　　摘要：目的 探讨结核感染T细胞检测，体外释放酶联免疫法Diagnostic Kit for T cell infected with Mycobacterium tuberculosis在结核病诊断中的应用价值。方法 选取我院2014年7月～例患者作为研究对象，采用体外释放酶联免疫法原理衡量特异性抗原介导的细胞免疫反应强度。通过结核分枝杆菌特异性重组抗原刺激结核分枝杆菌感染者特异性T淋巴细胞并使其增殖，释放IFN-γ。微孔条上预包被德IFN-γ抗体可与样品中的IFN-γ结合，再加入酶标试剂进行二次温育。当样品中存在IFN-γ时，将形成"包被抗体-IFN-γ-酶标抗体"复合物、复合物上连接的HRP催化显色剂反应，生成蓝色产物，终止反应成变成黄色。若样品中无INF-γ时，不显色。通过酶标仪检测吸光度（A值），用校准品浓度值与A值拟合乘幂曲线，计算样品中IFN-γ含量，从而判断是否感染结核分枝杆菌。结果 本组78例患者中有36例患者的IFN-γ为阳性，占总数的46.2%。因为，一个合理正规的治疗方案必然有明确的诊断、合理科学的用药剂量、足够的疗程，还要规律、早期用药，才能治愈结核病。其中早期明确诊断则是关键。结论 要想彻底治疗结核必须遵循以上五个原则、早期、联合、适量、规律、全程、才能确保查出必治、治必彻底。因此，提高结核病的早期诊断显得更为重要。 中国论文网 /1/view-6970576.htm　　关键词：结核病早期诊断；结核感染T细胞；体外释放酶联免疫法 　　结核病是结核分枝杆菌感染引起的一种传染性疾病，结核分枝杆菌属于放线菌目分枝杆菌属，主要通过空气传播，可侵犯全身各器官，但以肺结核为多见，结核病患常见发热、盗汗、疲倦乏力、精神萎靡、体重减轻、食欲不振以及咳嗽、咳痰咯血等临床症状。结核感染T细胞检测培养管含致病性结核分枝杆菌特有而卡介苗，其他分枝杆菌没有的缺失区域1（RD1）中两种基因的重组抗原，经体外全血培养，刺激全血标本中结核抗原特异性T细胞产生免疫应答。用于定量检测人全血标本经结核分枝杆菌特异性抗原体外刺激后产生的γ-干扰素（IFN-γ）的浓度，从而判断其是否具有针对结核分枝杆菌特异性的T细胞免疫反应，即结核感染T细胞检测。该方法可用于结核感染（潜伏感染或活动感染）的辅助诊断，其结果虽不能代替痰涂片、培养或影像学等其他较为经典的结核分枝杆菌感染的诊断方法，但可明显提高结核病的早期诊断。 　　1资料与方法 　　1.1一般资料 为了进一步分析结核感染T细胞检测，体外释放酶联免疫法在结核病中筛查的应用价值。选取我院2014年7月～2013年1月疑是结核病患者为试验对象。其中年龄为25～62岁，平均年龄在（42.56±3.11）岁。 　　1.2样本要求 使用无内毒素的肝素抗凝真空采血管采集的新鲜全血。采集的全血标本需在2 h内按"N"、"T"、"P"的顺序加入到三种培养管中并置37℃温箱培养。全血标本不可冰浴，冰冻，以防止细胞死亡。培养后经过离心分离得到的血浆可在2℃～8℃存放2 d，长期存储应低温冻存，冻融次数应不高于2次。 　　1.3 IFN-γ的体外释放 采用静脉穿刺术，使用肝素抗凝的真空采血管采集体积不低于4 ml的全血标本。在2 h之内将全血标本轻柔颠倒混匀3～5次后公装到"N"、"T"、"P"三种培养管中，1 ml/管。将培养管轻柔颠倒混匀5次迅速放入37℃培养22 h左右，培养过程中保持培养管直立。培养后在培养管以转/min，离心10 min，取血浆进行ELISA检测。 　　1.4 IFN-γ的定量检测 将不浓缩洗涤液用蒸馏水20倍稀释。国根据瓶签标识的体积加入注射用水，待2～3 min校准品充分溶解后，得到400 pg/ml的校准品。然后用校准品稀释液对上述校准品进行稀释。将样品对应微孔按序编号，每个受试者的3种培养血浆各1孔，校准品各双孔，空白对照1孔。分别在相应孔中加入样品稀释液20 ul，待测样品或校准品各50 ul，置37℃温育60 min，每孔加入酶标试剂50 ul。用封板膜封板后，置37℃温育60 min小心揭掉封板膜，用洗板机洗涤5遍，最后一次尽量扣干。每孔加入显色剂A，B液各50 ul混匀，37℃避光显色15 min每孔加入终止液50 ul混匀，10 min内用酶标仪波长于450 nm处，用空白孔调零点后测定各孔A值。 　　2结果 　　2.1测用封板膜封板后，置37℃温育60 min试培养管（T），含量值=T.本底对照培养管（N），含量值=N.阳性对照培养管释（P），含量值=P（单位：pg/ml）。本方法最低检出量为2 pg/ml，检测范围为2～400 pg/ml若待测标本的IFN-γ浓度高于400 pg/ml时，需用校准品稀释液稀释后重新检测，见表1。 　　2.2本院78例送检患者中，有36例患者结核感染T细胞检测结果显示阳性，占总数的46.2%，阳性率差不多达到50%。 　　3讨论 　　结核病是严重危害人类健康的慢性传染病。自上世纪80年代后期以来，受流动人口增加，流行和耐药性结核病的增多等因素的影响，结核病在全球重新蔓延，已成为全球重大公共卫生问题和社会问题。结核感染T细胞检测，体外释放酶联免疫法可明显提高结核病的早期诊断。要想彻底治疗结核必须遵循以上五个原则、早期、联合、适量、规律、全程、才能确保查出必治、治必彻底。因此，提高结核病的早期诊断显得更为重要。 　　参考文献： 　　[1]高万芹.结核感染T细胞斑点实验在结核病快速诊断中的临床应用价值[J].国际检验医学杂志，2014. 　　[2]努尔阿米娜?铁力瓦尔，迪黎静.结核感染T 细胞斑点试验在结核病诊断中的应用价值[J].新疆医学，2013. 　　[3]王立红，付秀华.结核感染T 细胞斑点试验在结核病诊断中的应用价值[J].中国防痨杂志2013. 　　[4]陶臻，曾娟.结核感染T 细胞斑点试验在结核病诊断中的应用价值[J].临床肺科杂志，2012.编辑/肖慧
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提问时间： 12:10:21
患者性别：男患者年龄：66
病情分析： 结核感染T细胞斑点试验技术用于检测结核感染后特异性T细胞分泌的7干扰素（IFN·），并据此结果判断是否感染结核,你的这个结果是阳性的意见建议：，提示可能存在活动性结核尤其是肺外结核，建议咨询一下
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提问时间： 07:21:18
患者性别：女患者年龄：44岁
指导意见：你好朋友，肺纹理增强多数出现 这种情况有可能会考虑气管有炎症或是肺部有感染的可能，您应该去医院进一步检查，明 确病因在治疗平时注意不要感冒，多喝水，不要吸烟。祝你健康。
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提问时间： 17:20:08
患者性别：女患者年龄：27岁
问题分析：肺结核的诊断要结合临床症状及影像学检查，化验结果等多方面资料，任何一个检查都不能诊断肺结核，只能提示有结核可能。要确诊必须要检测到结核杆菌或病理组织学检查。但这两个检查阳性率不高，所以临床
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提问时间： 23:09:24
患者性别：男患者年龄：31岁
你好，像这样的情况，推荐中医治疗，辩证论治，有很好的疗效，少做过量的运动，少饮食刺激性的食物，保持生活规律，情绪稳定，希望对你有帮助，
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提问时间： 14:41:57
患者性别：女患者年龄：51岁
问题分析：去省级医院感染中心住院检查，就凭你现在这一个结果不能诊断什么的！
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提问时间： 10:29:35
患者性别：女患者年龄：20岁
问题分析：您好，这样的情况考虑还是正在感染的可能比较大意见建议：有其他呼吸系统不适吗？建议还是需要进一步检查看看及时就医
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提问时间： 12:11:37
患者性别：男患者年龄：32岁
问题分析：你好：经检查结果看来，应该没有结核病，生活上注意下，不要吸烟意见建议：建议定期去医院复查，多吃点水果，不要太劳累，望早日康复
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提问时间： 17:53:16
患者性别：男患者年龄：53岁
指导意见：你好
这个要考虑因为炎症的原因导致的 以上还不是结核的。
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提问时间： 18:27:34
患者性别：男患者年龄：5岁
问题分析：是否有结核接触史，孩子是否有疲惫倦怠感，下午经常有低热吗意见建议：你应该带宝宝做结核菌素试验，看结果怎么样，之前小的时候接种过卡介苗吧，再进一步检查看看
回复医生：共1个回答
提问时间： 16:58:18
患者性别：男患者年龄：42岁
问题分析：T细胞检测为阳性是不可以诊断为肺结核的，二者没什么必然联系的。意见建议：肺结核的诊断很严谨，首先要有影像学检查支撑，其次要有痰中找到抗酸杆菌，或者抗涝治疗有效才可以诊断。
回复医生：共1个回答
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你好；这种情况可能是结核感染，这种情况建议结合临床症状，可以进一步查胸片，结核抗体，结核菌.....
您好，一般是不会的。也要结合你出现的症状及时的确诊的，是否有结核病反复引起的症状啊，及时的.....
您好，您是否有结核中毒症状，如：低热、盗汗、咳嗽、胸疼等症状，还有血沉快不快，等都需要临床.....
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