请问 realtime 的结果怎么表示要不要统计
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[请问 realtime 的结果怎么表示要不要统计] realtime的结果怎么表示？要不要统计？有没有相关的文献参考？谢谢做过的同道指点！ 关键词:[]…
realtime的结果怎么表示？要不要统计？有没有相关的文献参考？谢谢做过的同道指点！
回复realtime PCR 的结果有两种，即相对定量和绝对定量。相对定量：假设目的基因为A，内参为B，阴性对照组为X（目的基因含量假定为1），实验组为YδCt = average Ct(A) - average Ct( δδCt (Y) = δCt(Y) - δCt(X)relative quantitation of Y = 2的 δδCt (Y) 次方绝对定量：已知阴性对照组目的基因含量，依上述方法计算，实验组目的基因绝对含量则为：阴性对照组目的基因含量 X 实验组目的基因相对含量实验结果需要统计学检验，一般用柱状图表示。回复能不能给个参考？或一片典型的文章？先谢过了！回复
我给你提供一些荧光实时PCR的文献，你可以参考一下：菜豆细菌性萎蔫病菌16SrDNA基因克隆及TaqMan探针实时荧光PCR检测，漆艳香、朱水芳、肖启明，仲恺农业技术学院学报，2004Vol.17No.4严重急性呼吸综合征实验室的安全管理，黄芳、刘海林、韩莉莉、石伟先，中华预防医学杂志，2004Vol.38No.5PCR基因芯片上荧光PCR反应的研究，郝麟、朱平、于晓梅、张大成、赵新生、欧阳贱华，中国优生与遗传杂志，2004Vol.12No.5 口蹄疫(foot and mouth disease)病毒群特异性荧光PCR检测方法研究，杨素、吴小伦、花群义、徐自忠、周晓黎、贾建军、薄清如、潘文波，中国畜牧兽医，2004Vol.31No.11人TNF-αmRNA实时荧光定量PCR检测标准的构建，郑晓群、邹立林、吕建新，中国免疫学杂志，2004Vol.20No.11实时荧光PCR检测乙肝病毒(hepatitis B virus)YMDD变异的临床应用，杨志钊、罗燕香、何洁冰、卫敏，实用医技杂志，2004Vol.11No.20PCR相关技术方法在植物病害检测中的应用(综述)，王娜、马雅军、王喆之、代光辉，上海农业学报，2004Vol.20No.4人脐静脉内皮细胞表达CD137分子及其功能的初步研究，肖宇宏、白云、黄钢、熊家祥，免疫学杂志，2004Vol.20No.6乙肝病毒(hepatitis B virus)DNA与乙肝病毒(hepatitis B virus)血清标志物的相关性，徐立文、王福经，临床荟萃，2004Vol.19No.23应用实时荧光PCR技术检测HBVYMDD变异，季秀玲、沈雪芳、陈宇明、关明，医学分子学杂志，2004Vol.1No.5含内标的荧光PCR--荧光，朱文斯、黄茜华、黄艳兰、李世花、王关清、于洁，中国医药导刊，2001Vol.3No.4三峡库区炭疽墓群的卫生清理及评价方法研究，贾庆良、汪新丽、梅浙川、吴国辉、廖和平、李秀安，中国公共卫生，2004Vol.20No.10复方861对人肝星状细胞α-平滑肌肌动蛋白mRNA表达的调节作用，王琳、王宝恩、肖培根、汪建、乔延江、谈学海，中草药，2004Vol.35No.10用实时荧光PCR方法鉴定转基因玉米T14/T25，曹际娟、覃文、朱水芳、曹远银，遗传，2004Vol.26No.5高脂饮食大鼠肝脏硬脂酰辅酶A去饱和酶表达及罗格列酮的干预作用，陆元善、范建高、方继伟、杨兆瑞，肝脏，2004Vol.9No.3荧光链反应技术在乙型肝炎病毒基因分型中的应用，朱冰、周荣、许文娟，实用儿科临床杂志，2004Vol.19No.9慢乙肝病毒(hepatitis B virus)携带者抗病毒治疗的临床疗效观察，廖丹、张秀兰、王淦、张玲、梁汉玲，广西中医学院学报，2004Vol.7No.3人端粒酶催化亚单位mRNA的实时荧光RT-PCR定量检测，郭颖、刘军、薛采芳、吴静、宋天保，细胞与分子免疫学杂志，2004Vol.20No.5荧光PCR技术在检测人乳头瘤病毒6,11型感染中的应用，朱蓉、季洪斌，江苏大学学报（医学版），2004Vol.14No.3
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频道本月排行& [精华]】RealTimePCR问题专贴--请先看P1的问题汇总
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[精华]】RealTimePCR问题专贴--请先看P1的问题汇总
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我从未接触过RT-PCR，目前要进行此类实验。有几个问题请教。
在文献中找到了目的基因的引物，和对照actin的引物。但没有提供PCR的条件，如各循环的温度及时间。
我想在NCBI上找到这两个目的基因的长度，及所提供的引物将扩增片段的长度，但没有找到。是在nucleic 中寻找么。我输入了引物 的序列，没法找到相同的序列。
另外，文献中所给出的actin没有提及是alfa还是beta，我不知道什么条件。
我如果能查到这两个片段的长度，是不是就可以决定是否应该放在一个PCR体系中进行吧？
我是新手，万分感谢！
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大家做实验，PCR的条件都是摸索出来的。不知道你是自己配的试剂还是买公司的产品？如果是自己配的，你就用前面我的回帖中提到的条件先做一下，一般退火温度都在55－60之间，你做个梯度就知道了。延伸时间30秒左右就可以，因为再长就容易有非特异性反应了。如果是买公司的产品，你就先用说明书上推荐的反应条件试下先。
注意：管家基因与目的基因一定要用相同的反应条件。
至于管家基因的选择，你一定要确认这个管家基因是被认可的，即它的表达是不受你各种处理方式所影响的。这点很重要。我遇到过一个人选错了管家基因，被退修。她都郁闷死了。目前，homo、rat、mus三个物种GAPDH、Actb使用的多一些。&&
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我想你扩增的比较靠后的曲线（CT值在30左右），不是特异性的扩增。当模板浓度过低时，引物二聚体及非特异性的扩增对结果会有很明显的影响。建议您下次做的时候设一个阴性对照，就是不加模板。我估计你用现有的条件阴性对照也会在30个偱环左右出峰。建议你将引物浓度降低，将退火温度提高等高规方法应该可以得以改善。&&
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我是做real-time PCR的新手，现在一直在用普通PCR测试引物，但是一直都有很亮的引物二聚体，但是使用的内参基因ACTIN3 ,是没有二聚体的；重新合成了引物后，做普通PCR测试时，发现ACTIN3也有了，用的是同样的模板，不知道是什么问题？请指教！在现有的引物条件下，如何消除引物二聚体？
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我是做real-time PCR的新手，现在一直在用普通PCR测试引物，但是一直都有很亮的引物二聚体，但是使用的内参基因ACTIN3 ,是没有二聚体的；重新合成了引物后，做普通PCR测试时，发现ACTIN3也有了，用的是同样的模板，不知道是什么问题？请指教！在现有的引物条件下，如何消除引物二聚体？
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请问怎样操作可以减少SYBR法中复孔之间的差异啊，请问cDNA能用振荡器混匀吗？我总觉得加样的时候模板没有混匀
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2-ΔΔCt法的前提是目的基因和看家基因一致或近似的扩增效率，我的实验使用的是罗氏的lightcyler480做real-time rt-pcr，现机器自动测得标准品目的基因的E为2.366，看家基因的E为2.034，我在网上搜扩增效率80～120％是比较好的，请问扩增效率是1还是2是理想状态呢？还有我的目的基因和看家基因的E能用么？&&
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你好！我想问一下做相对定量如果是比较基因在两种不同处理的表达差异，可不可以就用目的基因和内参的ΔCt，即 2-ΔCt值来比较，而不算出两种处理的比值。有没有相关的文献呢？另外做相对定量要不要做目的基因和内参基因的扩增效率呢，我问了ABI技术支持他们都说现在基本都不做了，而是默认它们的扩增效率是1，大家有什么意见阿？
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刚刚入门，想请教2个简单的问题：
1.在NCBI上如何查找引物序列呢？试了一下选Probe，出来一大堆，也不知道该如何筛选？
2.查找文献上的引物，为什么找了几篇文献碱基序列都不一样呢？是正常的吗？
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请问：我做的SYBRGree RealtimePCR Ct值是不是和目的基因成简单的反比关系呢？也就是说，目的基因的起始拷贝数多，Ct值在PCR仪器上读取的数值就低呢？急！！！！！！！！在线等答复了，等着分析数据呢，谢谢了ABI Real Time PCR八连管盖4323032-八连管盖4323032-ABI 4323032
北京明阳科华生物科技有限公司
主营：美国Kimble微量电动匀浆器、线粒体提取杜恩斯玻璃组织匀浆器，美国Wheaton低速磁力搅拌器、双侧壁悬浮细胞培养瓶，美国ABI荧光定量 PCR耗材，美国W.S.Tyler筛分仪
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ABI Real Time PCR八连管盖4323032
&R1 套￥1344.00
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&品牌：ABI &型号：4323032 &加工定制：是 &&工作温度：25 &包装方式：300 &用途：Real Time PCR &
北京ABI荧光定量PCR光学八联盖4323032& MicroAmp Optical 8-Cap Strip
Applied Biosystems& MicroAmp& 联排管盖设计适用于 MicroAmp& 反应管、联排反应管和96孔反应板。有透明及红色、橙色、蓝色和绿色的彩色 8 联和 12 联管盖可供选择。MicroAmp& 光学8联排管盖适用于实时荧光定量PCR应用领域。
& 不影响样本信号读取
& 密封严密，将蒸发降至最低
& 易于盖上和取下
使蒸发降至最低
使用 MicroAmp& 联排管盖密封装有珍贵样本的反应管。这样可以降低样本间交叉污染的可能性，助您获得可靠的结果。
使用 MicroAmp& 上盖工具将盖子按下以达到严密密封。当其他制备工作做好之后，您只需利用工具末端的拉扣揭开盖子即可。
不同颜色 便于组织
这些盖子有不同的颜色可供选择，帮助您在Assay制备过程中记录您的反应管。
光学盖已进行重新设计，具有新的特点。新设计包括改进的密封几何学特征，保留了卓越的光学清晰度，荧光背景低。
SimpliAmp& Thermal Cycler,&ViiA& 7 Fast System,&Veriti& Dx Thermal Cycler,&ProFlex& PCR System,&QuantStudio& Dx,&ViiA& 7 Dx Fast System,&Veriti& Fast Thermal Cycler,&QuantStudio&,&2720 Thermal Cycler,&7300 System,&7000 System,&7500 System,&7500 Fast System,&GeneAmp& 9700,&Veriti& Thermal Cycler,&ViiA& 7 System,&StepOnePlus&,&ViiA& 7 Dx System,&7500 Fast Dx System
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Cap or Strip Type:
8-Cap Strip
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300 strips
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货号 产品描述
4309849 光学384反应孔板,带编码(50块/盒)
4326270 光学384反应孔板,带编码(10x 4309849)
4343814 光学384反应孔板,带编码(1000块/盒)
4343370 光学384反应孔板,带编码
4346907 快速96孔反应板 (0.1ml)
4346906 快速光学96孔反应板,带编码 (0.1ml)
N8010560 光学96孔反应板
4306737 光学96孔反应板, 带编码块
4313663 光学贴膜组 966/20片
4316813 光学96孔反应板 500块
4314320 光学96孔反应 (带编码)和光学贴膜 7500型
403012 光学96孔反应板 (带编码)和光学盖
N联盖 200排
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N联盖, 彩色
4358293 快速8联管(0.1ml)
N联管(0.2ml)
N联管,彩色(0.2ml)
N联盖,彩色
4323032 光学8联盖
N8010540 带盖反应管(0.2ml)
4358297 带盖快速反应管(0.1nl)
N8010840 带盖反应管,彩色(0.2ml)
N8010533 无盖反应管(0.2ml)
N8010612 带盖反应管,高压灭菌(0.2ml)
N8010833 无盖反应管,彩色(0.2ml)
N8010180 平盖PCR反应管(0.5ml)
N8010933 无盖光学反应管 (0.2ml)
N8010737 平盖薄壁反应管(0.5ml)
N8010611 凸盖薄壁反应管,高压灭菌(0.5ml)
N8010537 凸盖薄壁反应管(0.5ml) 孔反应管/托盘/支座组套(0.2ml）
4306311 透明贴膜 4360954 光学贴膜
4311971 光学贴膜100片
N孔整板胶盖 孔托盘/支座组
4358305 快速96孔托盘 N孔托盘
4312063 免溅底托 N孔底托
序号 货 号 品 名
&4368813 Kit, High Capacity cDNA RT (1000 Rxns)
&4368814 Kit, High Capacity cDNA RT (200 Rxns)
4374966 TF,HIGH CAP cDNA REV TRANS KIT(200 Rxn
4374967 TF,HIGH CAP cDNA REV TRANS KIT(1000 RX
4352042 FG,TaqMan FAST UNIVERSAL PCR MASTER MIX
4310179 TF,SYBR GREEN RT-PCR REAGENTS
4304437 FG,TAQMAN PCR MASTER MIX,MNL 4304449
4309155 FG,SYBR GREEN PCR MASTER MIX
4367659 FG,POWER SYBR GREEN PCR MASTER MIX
1 N8010560 光学96孔板 10块
2 4316813 光学96孔板 500块
3 4306737 带条形码96孔光学板 20块
4 4326659 带条形码96孔光学板 500块
5 个96孔板和300个8联管的盖子
6 个96孔板和100个光学膜
7 排8联管,1000个管
10 G,OPTICAL ADHESIVE COVERS STARTER KIT
11 个光学膜
4367659 FG,POWER SYBR GREEN PCR MASTER MIX
4368814 Kit, High Capacity cDNA RT (200 Rxns)
4304437 FG,TAQMAN PCR MASTER MIX,MNL 4304449
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【求助】real-time PCR 空水作模板,怎么30循环后也有曲线?
我做了2管SRY基因扩增(1和2号),2管HBB基因扩增(3和4号),1管SRY引物空水对照(5号),结果:1号和5号一模一样,都有曲线,2号空白,3、4号一致108bp，
接着又做了2管SRY引物空水对照(5和6号)（跟上面5号管一模一样），2管HBB基因空水对照（7和8号）, 结果：4个管子均有曲线，5、6号跑出50bp左右条带（一致），大概引物二聚体，7、8号跑出108bp条带（一致）。
7和8号加不加模板，怎么一个样？3、4、7号real-time曲线一致，8号曲线明显很低，5、6号曲线比1号曲线低，但是所有曲线都在30循环后，我用的是SYBY GREEN法！清高手指点！谢谢！你说了这么多,也不知道是你的体系污染了,还是引物二聚体产生的荧光强度,建议你帖扩增曲线图和熔解曲线图上来看看啊,我觉得你用SYBY GREEN法做后,如果你有引物二聚体的产生,看多少循环后有扩增是不准确的啊,因为每一循环都会产生引物二聚体SYBY GREEN同样会结合到其中,也会产生荧光,所以这个时候建议你最好用熔解曲线,看看有没有产物,通过产物的TM值和引物二聚体的TM值不一样,来看看有没有扩增啊,谢谢Modify的解答,我用的商品化用水,出现了smear,后改用临床注射用水,安剖装的,每次取了几十微升,剩下的丢弃掉,会不会注射用水里面也有微量的污染,主要搞不懂的是HBB基因扩增(3和4号)与2管HBB基因空水对照（7和8号）,结果一模一样,real-time 曲线一致,跑的电泳也是一致,怎么加不加模板,结果会是一样的呢?有没有战友做SYBY Green也碰到类似情况?PCR用水,最好能用去离子水,然后高压一下就能用了啊 !你说的跑的电泳是一致,是指都有产物,还是都没有产物啊,如果是都有产物,肯定是试剂污染了,如果都没有产物,那肯定是你的模板不行啊,real-time 曲线一致那如果都没有产物,也可能是引物二聚体产生的啊,都有产物,相同亮度!我是临床的医生,在临床拿的注射用水做的,每做一次开一支安剖,严格无菌操作,问了几个人,他们都说SYBY Green30循环后出现扩增曲线很正常,引物用不掉也会自我扩增,但是关键的的是加不加模板,跑出来的产物亮度\片段大小均一致,不好解释,哎 郁闷中…………如果阴性对照的溶解曲线与目的片段一致、跑胶片段长度也一致，可以考虑是污染。可以肯定你是污染了啊,试剂换了,水用自己高压的,换个实验室(说不定实验室污染了),再做一次试一下啊除了试剂和水外，移液枪也要换的，或者用带滤心的吸头，房间要灭菌或更换，标本处理最好有单独的房间，还要有生命安全柜是最好的。重新分装了一下引物，结果对了，但是偶尔出现标本的副管也出现空白，新的问题诞生了，但是溶解曲线不是太好．Hold out!!!
您的位置： &&RT-PCR 和RealtimePCR为什么好多文献中作信号通路是否介导蛋白表达是都用RealtimePCR
为什么不用目的基因和内参基因做个比值 然后模型组和抑制剂组比较不可以吗
这样为什么说明不了问题吗_百度作业帮
RT-PCR 和RealtimePCR为什么好多文献中作信号通路是否介导蛋白表达是都用RealtimePCR
为什么不用目的基因和内参基因做个比值 然后模型组和抑制剂组比较不可以吗
这样为什么说明不了问题吗
RT-PCR 和RealtimePCR为什么好多文献中作信号通路是否介导蛋白表达是都用RealtimePCR
为什么不用目的基因和内参基因做个比值 然后模型组和抑制剂组比较不可以吗
这样为什么说明不了问题吗
你的意思是说为什么要用real time PCR的结果，不用WB的结果么？因为real time PCR鉴定的是mRNA水平的定量，信号通路被激活才引起通路中目标蛋白的转录，mRNA水平上可以看到明显的变化。而且real time本身就是定量的，数值更准确。但是如果通过蛋白水平定量的话，涉及到蛋白半衰期和表达周期的问题，选择样品的点不一定是蛋白表达的最高点，所以用蛋白的量去比较...
我觉得你说的大概就是类似于半定量的一个rt-pcr，以前这个是可以的，也是能说明问题的，特别是相差特别大，还是很明显的。不过后来由于需要更精确，所以用了realtimepcr。你用来研究表达可能还是用的相对定量吧。这个只是不是一个简单的比值。而是用双标准曲线法等方法使结果看上去更科学、可信。不知道我有没有理解对你的意思。。。嘿嘿...}