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&&&详谈该如何选购液相色谱仪
　HPLC系统一般由输液泵、进样器、色谱柱、检测器、数据记录及处理装置等组成。其中输液泵、色谱柱、检测器是关键部件。有的仪器还有梯度洗脱装置、在线脱气机、自动进样器、预柱或保护柱、柱温控制器等，现代HPLC仪还有微机控制系统，进行自动化仪器控制和数据处理。制备型HPLC仪还备有自动馏分收集装置。
　　最早的液相色谱仪由粗糙的高压泵、低效的柱、固定波长的检测器、绘图仪，绘出的峰是通过手工测量计算峰面积。后来的高压泵精度很高并可编程进行梯度洗脱，柱填料从单一品种发展至几百种类型，检测器从单波长至可变波长检测器、可得三维色谱图的二极管阵列检测器、可确证物质结构的质谱检测器。数据处理不再用绘图仪，逐渐取而代之的是最简单的积分仪、计算机、工作站及网络处理系统。
　　目前常见的HPLC仪生产厂家国外有Waters公司、Agilent公司(原HP公司)、岛津公司等，国内有大连依利特公司、上海分析仪器厂、北京分析仪器厂等。
　　第一步：输掖泵的选择
　　输液泵是HPLC系统中最重要的部件之一。泵的性能好坏直接影响到整个系统的质量和分析结果的可*性。输液泵应具备如下性能：①流量稳定，其RSD应&0.5%，这对定性定量的准确性至关重要;②流量范围宽，分析型应在0.1~10 ml/min范围内连续可调，制备型应能达到100 ml/③输出压力高，一般应能达到150~300 kg/cm2;④液缸容积小;⑤密封性能好，耐腐蚀。
　　泵的种类很多，按输液性质可分为恒压泵和恒流泵。恒流泵按结构又可分为螺旋注射泵、柱塞往复泵和隔膜往复泵。恒压泵受柱阻影响，流量不稳定;螺旋泵缸体太大，这两种泵已被淘汰。目前应用最多的是柱塞往复泵。
　　柱塞往复泵的液缸容积小，可至0.1ml，因此易于清洗和更换流动相，特别适合于再循环和梯度洗脱;改变电机转速能方便地调节流量，流量不受柱阻影响;泵压可达400 kg/cm2。其主要缺点是输出的脉冲性较大，现多采用双泵系统来克服。双泵按连接方式可分为并联式和串联式，一般说来并联泵的流量重现性较好(RSD为0.1%左右，串联泵为0.2~0.3%)，但出故障的机会较多(因多一单向阀)，价格也较贵。
　　第二步：进样器的选择
　　早期使用隔膜和停流进样器，装在色谱柱入口处。现在大都使用六通进样阀或自动进样器。进样装置要求：密封性好，死体积小，重复性好，保证中心进样，进样时对色谱系统的压力、流量影响小。HPLC进样方式可分为：隔膜进样、停流进样、阀进样、自动进样。
　　1.隔膜进样。用微量注射器将样品注入专门设计的与色谱柱相连的进样头内，可把样品直接送到柱头填充床的中心，死体积几乎等于零，可以获得最佳的柱效，且价格便宜，操作方便。但不能在高压下使用(如10MPa以上);此外隔膜容易吸附样品产生记忆效应，使进样重复性只能达到1~2%;加之能耐各种溶剂的橡皮不易找到，常规分析使用受到限制。
　　2.停流进样。可避免在高压下进样。但在HPLC中由于隔膜的污染，停泵或重新启动时往往会出现&鬼峰&;另一缺点是保留时间不准。在以峰的始末信号控制馏分收集的制备色谱中，效果较好。
　　3.阀进样。一般HPLC分析常用六通进样阀(以美国Rheodyne公司的i型最常见)，其关键部件由圆形密封垫(转子)和固定底座(定子)组成。由于阀接头和连接管死体积的存在，柱效率低于隔膜进样(约下降5~10%左右)，但耐高压(35~40MPa)，进样量准确，重复性好(0.5%)，操作方便。
　　4.自动进样。用于大量样品的常规分析。
　　第三步：色谱柱的选择
　　色谱是一种分离分析手段，分离是核心，因此担负分离作用的色谱柱是色谱系统的心脏。对色谱柱的要求是柱效高、选择性好，分析速度快等。市售的用于HPLC的各种微粒填料如多孔硅胶以及以硅胶为基质的键合相、氧化铝、有机聚合物微球(包括离子交换树脂)、多孔碳等，其粒度一般为3,5,7,10&m等，柱效理论值可达5~16万/米。对于一般的分析只需5000塔板数的柱效;对于同系物分析，只要500即可;对于较难分离物质对则可采用高达2万的柱子，因此一般10~30cm左右的柱长就能满足复杂混合物分析的需要。
　　柱效受柱内外因素影响，为使色谱柱达到最佳效率，除柱外死体积要小外，还要有合理的柱结构(尽可能减少填充床以外的死体积)及装填技术。即使最好的装填技术，在柱中心部位和沿管壁部位的填充情况总是不一样的，*近管壁的部位比较疏松，易产生沟流，流速较快，影响冲洗剂的流形，使谱带加宽，这就是管壁效应。这种管壁区大约是从管壁向内算起30倍粒径的厚度。在一般的液相色谱系统中，柱外效应对柱效的影响远远大于管壁效应。
　　1.柱的构造
　　色谱柱由柱管、压帽、卡套(密封环)、筛板(滤片)、接头、螺丝等组成。柱管多用不锈钢制成，压力不高于70 kg/cm2 时，也可采用厚壁玻璃或石英管，管内壁要求有很高的光洁度。为提高柱效，减小管壁效应，不锈钢柱内壁多经过抛光。也有人在不锈钢柱内壁涂敷氟塑料以提高内壁的光洁度，其效果与抛光相同。还有使用熔融硅或玻璃衬里的，用于细管柱。色谱柱两端的柱接头内装有筛板，是烧结不锈钢或钛合金，孔径0.2~20&m(5~10&m)，取决于填料粒度，目的是防止填料漏出。
　　色谱柱按用途可分为分析型和制备型两类，尺寸规格也不同：①常规分析柱(常量柱)，内径2~5mm(常用4.6mm，国内有4mm和5mm)，柱长10~30②窄径柱(narrow bore，又称细管径柱、半微柱semi-microcolumn)，内径1~2mm，柱长10~20③毛细管柱(又称微柱microcolumn)，内径0.2~0.5④半制备柱，内径&5⑤实验室制备柱，内径20~40mm，柱长10~30⑥生产制备柱内径可达几十厘米。柱内径一般是根据柱长、填料粒径和折合流速来确定，目的是为了避免管壁效应。
　　2.柱的发展方向
　　因强调分析速度而发展出短柱，柱长3~10cm，填料粒径2~3&m。为提高分析灵敏度，与质谱(MS)联接，而发展出窄径柱、毛细管柱和内径小于0.2mm的微径柱(microbore)。细管径柱的优点是：①节省流动相;②灵敏度增加;③样品量少;④能使用长柱达到高分离度;⑤容易控制柱温;⑥易于实现LC-MS联用。
　　但由于柱体积越来越小，柱外效应的影响就更加显著，需要更小池体积的检测器(甚至采用柱上检测)，更小死体积的柱接头和连接部件。配套使用的设备应具备如下性能：输液泵能精密输出1~100&l/min的低流量，进样阀能准确、重复地进样微小体积的样品。且因上样量小，要求高灵敏度的检测器，电化学检测器和质谱仪在这方面具有突出优点。
　　3.柱的填充和性能评价
　　色谱柱的性能除了与固定相性能有关外，还与填充技术有关。在正常条件下，填料粒度&20&m时，干法填充制备柱较为合适;颗粒&20&m时，湿法填充较为理想。填充方法一般有4种：①高压匀浆法，多用于分析柱和小规模制备柱的填充;②径向加压法，Waters专利;③轴向加压法，主要用于装填大直径柱;④干法。柱填充的技术性很强，大多数实验室使用已填充好的商品柱。
　　必须指出，高效液相色谱柱的获得，装填技术是重要环节，但根本问题还在于填料本身性能的优劣，以及配套的色谱仪系统的的结构是否合理。
　　无论是自己装填的还是购买的色谱柱，使用前都要对其性能进行考察，使用期间或放置一段时间后也要重新检查。柱性能指标包括在一定实验条件下(样品、流动相、流速、温度)下的柱压、理论塔板高度和塔板数、对称因子、容量因子和选择性因子的重复性，或分离度。一般说来容量因子和选择性因子的重复性在&5%或&10%以内。进行柱效比较时，还要注意柱外效应是否有变化。
　　一份合格的色谱柱评价报告应给出柱的基本参数，如柱长、内径、填料的种类、粒度、色谱柱的柱效、不对称度和柱压降等。
　　第四步：检测器的选择
　　检测器是HPLC仪的三大关键部件之一。其作用是把洗脱液中组分的量转变为电信号。HPLC的检测器要求灵敏度高、噪音低(即对温度、流量等外界变化不敏感)、线性范围宽、重复性好和适用范围广。
　　1.分类
　　1)按原理可分为光学检测器(如紫外、荧光、示差折光、蒸发光散射)、热学检测器(如吸附热)、电化学检测器(如极谱、库仑、安培)、电学检测器(电导、介电常数、压电石英频率)、放射性检测器(闪烁计数、电子捕获、氦离子化)以及氢火焰离子化检测器。
　　2)按测量性质可分为通用型和专属型(又称选择性)。通用型检测器测量的是一般物质均具有的性质，它对溶剂和溶质组分均有反应，如示差折光、蒸发光散射检测器。通用型的灵敏度一般比专属型的低。专属型检测器只能检测某些组分的某一性质，如紫外、荧光检测器，它们只对有紫外吸收或荧光发射的组分有响应。
　　3)按检测方式分为浓度型和质量型。浓度型检测器的响应与流动相中组分的浓度有关，质量型检测器的响应与单位时间内通过检测器的组分的量有关。
　　4)检测器还可分为破坏样品和不破坏样品的两种。
　　2.性能指标
　　1)噪音和漂移：在仪器稳定之后，记录基线1小时，基线带宽为噪音，基线在1小时内的变化为漂移。它们反映检测器电子元件的稳定性，及其受温度和电源变化的影响，如果有流动相从色谱柱流入检测器，那么它们还反映流速(泵的脉动)和溶剂(纯度、含有气泡、固定相流失)的影响。噪音和漂移都会影响测定的准确度，应尽量减小。
　　2)灵敏度(sensitivity)：表示一定量的样品物质通过检测器时所给出的信号大小。对浓度型检测器，它表示单位浓度的样品所产生的电信号的大小，单位为mV&ml/g。对质量型检测器，它表示在单位时间内通过检测器的单位质量的样品所产生的电信号的大小，单位为mV&s/g。
　　3)检测限(detection limit)
　　检测器灵敏度的高低，并不等于它检测最小样品量或最低样品浓度能力的高低，因为在定义灵敏度时，没有考虑噪声的大小，而检测限与噪声的大小是直接有关的。
　　检测限指恰好产生可辨别的信号(通常用2倍或3倍噪音表示)时进入检测器的某组分的量(对浓度型检测器指在流动相中的浓度&&注意与分析方法检测限的区别，单位g/ml或mg/对质量型检测器指的是单位时间内进入检测器的量，单位g/s或mg/s)。又称为敏感度(detectability)。D=2N/S，式中N为噪声，S为灵敏度。通常是把一个已知量的标准溶液注入到检测器中来测定其检测限的大小。
　　检测限是检测器的一个主要性能指标，其数值越小，检测器性能越好。值得注意的是，分析方法的检测限除了与检测器的噪声和灵敏度有关外，还与色谱条件、色谱柱和泵的稳定性及各种柱外因素引起的峰展宽有关。
　　4)线性范围(linear range)：指检测器的响应信号与组分量成直线关系的范围，即在固定灵敏度下，最大与最小进样量(浓度型检测器为组分在流动相中的浓度)之比。也可用响应信号的最大与最小的范围表示，例如Waters 996 PDA检测器的线性范围是-0.1~2.0A。
　　定量分析的准确与否，关键在于检测器所产生的信号是否与被测样品的量始终呈一定的函数关系。输出信号与样品量最好呈线性关系，这样进行定量测定时既准确又方便。但实际上没有一台检测器能在任何范围内呈线性响应。通常A=BCx，B为响应因子，当x=1时，为线性响应。对大多数检测器来说，x只在一定范围内才接近于1，实际上通常只要x=0.98~1.02就认为它是呈线性的。
　　线性范围一般可通过实验确定。我们希望检测器的线性范围尽可能大些，能同时测定主成分和痕量成分。此外还要求池体积小，受温度和流速的影响小，能适合梯度洗脱检测等。
　　5)池体积：除制备色谱外，大多数HPLC检测器的池体积都小于10&l。在使用细管径柱时，池体积应减少到1~2&l甚至更低，不然检测系统带来的峰扩张问题就会很严重。而且这时池体、检测器与色谱柱的连接、接头等都要精心设计，否则会严重影响柱效和灵敏度。
　　第五步：数据处理和计算机控制系统
　　早期的HPLC仪器是用记录仪记录检测信号，再手工测量计算。其后，使用积分仪计算并打印出峰高、峰面积和保留时间等参数。80年代后，计算机技术的广泛应用使HPLC操作更加快速、简便、准确、精密和自动化，现在已可在互联网上远程处理数据。计算机的用途包括三个方面：①采集、处理和分析数据;②控制仪器;③色谱系统优化和专家系统。
　　第六步：恒温装置
　　在HPLC仪中色谱柱及某些检测器都要求能准确地控制工作环境温度，柱子的恒温精度要求在&0.1~0.5℃之间，检测器的恒温要求则更高。
　　温度对溶剂的溶解能力、色谱柱的性能、流动相的粘度都有影响。一般来说，温度升高，可提高溶质在流动相中的溶解度，从而降低其分配系数K，但对分离选择性影响不大;还可使流动相的粘度降低，从而改善传质过程并降低柱压。但温度太高易使流动相产生气泡。
　　色谱柱的不同工作温度对保留时间、相对保留时间都有影响。在凝胶色谱中使用软填料时温度会引起填料结构的变化，对分离有影响;但如使用硬质填料则影响不大。
　　总的说来，在液固吸附色谱法和化学键合相色谱法中，温度对分离的影响并不显著，通常实验在室温下进行操作。在液固色谱中有时将极性物质(如缓冲剂)加入流动相中以调节其分配系数，这时温度对保留值的影响很大。
　　不同的检测器对温度的敏感度不一样。紫外检测器一般在温度波动超过&0.5℃时，就会造成基线漂移起伏。示差折光检测器的灵敏度和最小检出量常取决于温度控制精度，因此需控制在&0.001℃左右，微吸附热检测器也要求在&0.001℃以内。
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时间： 14:44:53　　如何选择液相色谱仪？一台品质优良的液相色谱系统应从以下四个方面，本文详细为大家介绍如何选择液相色谱仪。　　何选择液相色谱仪　　如何选择液相色谱仪？一台品质优良的液相色谱系统应从以下几个方面考虑：　　一.主要技术指标优异　　如何选择液相色谱仪？首先是如何看指标。液相色谱仪的指标很多，有泵的、检测器的、色谱柱等等。我们认为要看主要技术指标，根据国家标准，仪器的主要指标有噪音，漂移，最小检测浓度，定性定量重复性等。这些指标都要放在系统，回路里去看，去比较。就是需要把各单元装置都要联接好，如接好色谱柱，进样阀，并且要通上流动相。因为您在分析中也都是联接好以后才可以进行分析的，而不是单单用个检测器或是泵的。　　然后在这个基础上，我们再去比较这些主要指标。　　1.噪音　　是指由仪器的电器元件、温度波动、电压的线性脉冲以及其他非溶质作用产生的高频噪声和基线的无规则波动。噪音的大小直接关系到仪器的检测灵敏度，噪音越大，检测的灵敏度就越低。对于检测低含量的样品就要求仪器的噪音越小越好，否则噪音过大将会导致基线不稳，甚至影响分析结果。　　2.最小检测浓度(最小检测限)　　是 反映仪器灵敏度的重要参数。CL=2×Nd×C/H(CL：最小检测浓度 Nd：噪音 C：样品浓度最小检测浓度 H：样品峰高)由上式可见，最小检测浓度是和噪音成正比的，噪音越大，最小检测浓度就越大，灵敏度就越低。某些厂家回避了这个指标，说明他们不愿在最小检测浓度的基础上去比较噪音。　　3.漂移　　是指仪器稳定后一段时间内基线漂离原点的距离，通常用来衡量仪器稳定快慢。高品质的仪器能在较短的时间内达到稳定，从而在一定程度上提高了分析效率。　　4.定性定量重复性　　主要是考核仪器稳定性的指标，这对于分析样品来说是非常重要的。好的仪器其稳定性应该是十分优秀的，这就要求多次进样保留时间及含量的一致性，这样做出来的结果才能使人信服。　　有的朋友会认为这些指标好像都是检测器的。对的，但是就前面所说条件是要放在整个回路和系统里去看去比较。例如：泵的脉动会直接影响噪音指标，泵的流量准确度、精确度指标，以及密封性不好也会影响相关指标。所以要系统地看指标。例如：某些公司在公布的指标中，噪音和漂移指标写的条件是空池或有的干脆不写。这个指标只考核了UV检测器光学和电气的特性，与实际情况相差甚远，并没有考验泵的压力脉动，液流回路的阻尼和UV检测器流通池的性能。所以我们认为从以上的主要指标中可以反应出仪器的一些真实水平。　　二.操作方便　　操作方便性无论是对新手还是成熟的用户都是很重要的。操作越简单，有利于提高分析效率，也为以后分析方法的拓展提供有力的帮助。上海伍丰科学仪器有限公司的WS-100工作站软件实现了真正的智能化操作。它摒弃了以往工作站软件只能起到数据处理的理念，率先在国内推出了集控制与后处理于一身的软件，在操作使用上给用户带来了极大的方便。　　三.系统的，整体开发　　这里指的是仪器的整体开发，是一个完整的系统。目前市场上有这个现象，说我的泵是进口的，或者是检测器怎么好，用了什么很多的进口件组装等等。其实这是个误区。液相色谱是个复杂的系统，不是整体开发的，各项指标之间、软件和硬件、硬件和硬件等都不匹配，整体水平不会高到哪里去，而且在售后服务方面对用户也是不负责任的。　　整体开发的主要优点有：各项技术指标统一、仪器各单元的通信协调、能够建立一个整体的数字化评价系统、体现了企业的科技及开发实力。　　国外知名的仪器生产厂家的产品也是整体开发的，所以能够保证仪器的整体水平。　　四.稳定可靠，故障率低　　这个大家都知道，小编就不多说了。下一篇：上一篇：编辑推荐：相关阅读：分享到：全球首创3D网络展览平台突破传统展会时间、空间的局限性完整商务功能新型展览平台全自定义装修，轻松实现3D效果广泛兼容第三方网络应用系统高效液相色谱技术的应用[摘要]高效液柏色谱技术具有高选择性高
--《大众科学》2007年第16期
高效液相色谱技术的应用[摘要]高效液柏色谱技术具有高选择性高教液相色谱技术的应用前景。[关键词]高效液丰【I色谱应用研究进展中图分类号：T059文献标识码：B宋虎跃徐国栋吴勇民(中国地质大学&武汉&材料科学与化学工程学院湖北武汉4：10074)可快速、准确地实现多种元素同时测定，方法简便快速。概述了高效液相色谱在应用方面的研究进展，『司时还展掣了文章编号：(一们高效液相色谱自20世纪70年代问世以来，经过近30年的发展，在基础理论、仪器装置和色谱柱等方面的研究已趋于成熟，现在已成为化学学科中最有优势的分离分析方法之一。高效液相色谱的应用范围十分广泛，几乎能够分析所有的有机、高分子、生物样品。具估计，目前已知的化合物中，有80％的化台物需要用高效液相色谱法进行分离分析。此外，对无机物的分析也有很好的效果.特别是对生命活性物质的分离分析，有着其它分析方法不可替代的作用，己厂’泛应用于石油化工、生物化学、临床医学、食品卫生、环境监测、医药工业、商品检验、地质勘探、油田开发等领域的分离分析。一、高效渣相色膏分析原理高效液相色谱法是在高压条件下溶质在相互流动相之间进行的一种连续多次交换的过程，他借溶质在两相问分配系数、亲和力、吸附力或分子大小不同引起排阻作用的差别使不同溶质得以分离。液相色谱柱的分离度用F列公式表示。R=式中：R一液相色潜柱分离度；n柱效率，用理论塔板数来表示；a溶剂效率，是固定相对某两个混合物分离能力的表征：K一容量困子，足在平衡状态下组分在固定相与流动相中质量之比。从上面公式可见，要提高分离度，共有三条途径：I_增加n。在其他条件相同的情况下，增加n可以使色谱峰变狭.这点可以通过增加柱来实现，但增加柱长分离时间也会增加，但如果采用高效能的填充剂，不仅可提高分离度，而且能使广峰形变狭而提高检出的灵敏度。2.增加a。使后一组分相对于前一组分的保留时间增加来提高分离度。这可通过改变移动相或固定相的组成来达到最有效的方法就是改变移动相的极性，这就是高效液相色谱中通常采用连续改变移动相极性的梯度淋洗法。3.增加k。对液相色谱来讲，移动相极性增高，k减小，色谱峰向前移，分离度降低：移动相极性减小，k增加，色谱峰的流出时间增加，同时峰形变宽。分离度提高。但若k过大，不但分离时间拖得很长，而且峰形变平坦，影响分辨率和检出灵敏度，k的有效范围以a&k&5为宜。二、离效液相色膏在食品监舅中的应用(一)应用高效液相色谱技术对食品中的金属元素进行了研究以2.3二氨基萘为荧光试剂与se(Iv)生成荧光产物4.5苯并苤硒脑，再用环已烷萃取.使用高效液相色谱荧光检测系统(HPLc―FLD)测定食品中痕量硒，该法利用HPLc将杂质分离，再进行荧光检测，可减小空白值.提高测定的灵敏度和选择性。采用邻苯二胺柱前衍生，用waterssep―park―c18固相萃取微柱萃取富集大花红景天畸aSe的邻苯二胺衍生物，然后用流动相反方向洗F富集柱上富集的衍生物，再经分离柱分离，提高了方法的灵敏度；采用用4邻氯苯基卟啉(TCPP)为柱前衍生试剂，ZORBAXstableBound(4.6×50mm，18“m)快速分离柱为固定相分离镍、铜、锡、铅、镉、汞的络合物，6种重金属元素络合物的分离只需2.Omin。在HPI_c―cs阳离子分析柱上，以H2C204(1all5.24)作为淋洗液，分离了微量元素Mn2+等元素.用吡啶偶氮苯基问二：酚作显色剂，在520nm处连续测定，已用于施糖片中微量锰的测定。(二)应用高效液相色谱技术对食品中的营养成分进行了分析研究1.脂肪酸的分析。脂肪酸和丙三醇结合成脂肪，通过测定食品中脂肪酸的含量，可为食品加工、贮存及合理配比等提供必要的数据。以磷酸盐甲醇溶液为流动相.pH为2.8的条件下.采用线性反相梯度洗脱，I司时分离测定出甲酸、乳酸、乙酸、琥珀酸、丙酸、丁酸、戊酸等7种短链脂肪酸。测定结果的相对标准差为1.8％，平均回收率为92％，重复性变异系数小于4％。2.蛋白质与氨基酸的分析。Maz-A眦Yust等用反向高效液相色谱法检测饲料中的色氨酸。其加标回收率为98.6％～100％。与其他的分析色氨酸的方法相比，反向高效液相色谱法在检测时问上有所减少。李东等以HyperilODs―c18色谱柱，2，4二硝基氟苯为衍生化试剂，梯度洗脱。结果表明所测氨基酸组分的浓度在0.2mg几～0.3mg／L范围内与峰面积之间具有良好的线性关系，回收率为90.4％～lOI.o％，检出限为0.12mg几～1.225mg几，测定结果的相对标准差为1.05％～5.93％。陈春晓等采用高效液相色谱仪带全自动衍生功能的自动进样器进行在线衍生，经梯度分离，再利用二极管陈列一荧光检测器串联分析。测定结果表明，17种氨基酸分离良好，线性范围为10uInol几～1000pⅢ0l／L，相关系数在0.9之间，所测液体样品同收率为90％～97％。(三)高效液相色谱在环境监测中的应用1.张梅风应用高效液相色谱技术对生物样品农药残留进行了分析研究。色谱条件：色谱柱：416×25mmCl8柱，柱温：30℃.流动相：乙腈：水(35：65)，流速210ml／min，检测器：紫外检测器，灵敏度OIOIA[』Fs，根据各组分设定合适的波长时间程序。称取510gl式样于50m]离心管中，加入苯lOml，无水硫酸钠6g，匀浆3分钟。将离心管放入离心机中以2500转／mln离心5分钟。用吸管将上清液转入20ml离心管中。残渣再用2×5ml苯提取两次，合并提取液并于50℃水浴上用氨气吹干。离心管冷却至室温，用5珈1乙酸乙酯将残渣洗入层析柱中.以2m1／mi‘ll的流速使溶液流出并弃去。用15ml洗脱液洗脱组分。洗脱液于50℃水浴上真空蒸干，用1lOml流动相溶解残渣，取上清液进样。2.崔莹应用高效液相色谱技术对环境中的磷脂进行了分析研究。用silica硅胶柱为固定相，也有用cN氰基柱、NB2氨基柱和DIOL二醇柱的报。流动相有氯仿甲醇一氨水、正己烷一异丙醇一水以及乙腈一甲醇一水，在流动相中加入离子抑制剂如85％磷酸、乙酸铵、：30％氨水、乙酸，可以有效改善峰形，抑制色谱峰拖尾磷脂在正相色谱中的分离是由于各组分分子极性大小不同.流出顺序不同，各组分得到分离。如硅胶柱上，正己烷异丙醇水为流动相时，PE极性最小，Pc极性最大，PI位于中间，故一般的流出顺序为：PE、PI、Pc，当甲醇一乙腈一磷酸为流动相洗脱时略有差别，流出顺序为PI、PE、Pc。参考文献：[1]陈立仁，蒋生祥，刘霞，侯经国.高效渡相色谱基础与实践.北京：科学出版社，2001.[2]苏新国，王宁生，蒋跃明，段俊食品中金属元素高效液相色谱检测技术研究进展[J].食品科学.2006，ll(27)：523―528。[3]黄国宏高效液相色谱技术在食品分析中的应用[J].食品工程.51.[4]MARAM.JuSTOPEDROCHE.-luIOGIROCALLE.Deter~Ilnatlonoftrypt，ophanbyHpI。cofalkalinehydr01ysateswithpectrophlotometricdetection[J].F00dChemistry，)：317320.
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