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这年代只有嫌书贵的，没有嫌饭贵的，这是为什么呢？元芳你怎么看？
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碱裂解法提取质粒原理
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内容提示：碱裂解法提取质粒原理
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碱裂解法提取质粒原理
官方公共微信求基因沉默和质粒转染详细区别？ 包括两者原理、实验步骤区别联系。。 有满意回答者另有100财富奖励！！_百度知道
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提问者采纳
shRNA质粒可以做稳定转染 达到持续干扰的效果
人工合成的siRNA不能稳定转染2简略回答
不懂追问。将此双链RNA转染至细胞
能够沉默靶基因的表达shRNA质粒 转染进细胞能够表达shRNA（发卡结构）
和双链RNA差不多 只不过是发卡结构， siRNA是双链RNA：1. 基因沉默一般用siRNA或者质粒 . 转染，其中一条链与靶基因的mRNA序列互补。发卡的一条臂与靶基因mRNA互补
大哥，，，能否更详细点基因沉默与转染的区别。。实验步骤上区别谢谢
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出门在外也不愁自杀基因质粒表达载体pcDNA3.1(-)CMV.CD的构建及进行喉癌Hep-2细胞株转染研究A study on construction of plasmid pcDNA3.1(-) CMV.CD and transfection into laryngeal cancer cell Hep-2
唐瑶云,肖健云,赵素萍,冯永,张红茹
目的:构建含酵母菌自杀基因CD的质粒表达载体pcDNA3.1(-)CMV.CD,并利用该载体进行喉癌Hep2细胞株转染研究,体外实验观察前体药物5FC对稳定表达CD基因的喉癌Hep2细胞株的杀伤作用。方法:通过RTPCR从酵母菌RNA内扩增出CD基因全长CDS序列,将其定向克隆到质粒表达载体pcDNA3.1(-)CMV中,重组体质粒经XhoI/HindⅢ双酶切鉴定,并对重组体中的CD基因片段进行序列分析,将鉴定好的阳性重组质粒pcDNA3.1(-)CMV.CD运用电穿孔法转入喉癌Hep2细胞中。经300～600mg/LG418正筛选14d和10mg/L前体药物5FC负筛选,获得稳定表达CD基因的喉癌Hep2细胞株,提取该细胞株细胞的总RNA,经RTPCR鉴定CD基因的表达。四甲基偶氮唑盐(MTT)法观察不同浓度5FC对稳定表达CD基因的喉癌Hep2细胞及转染空白载体pcDNA3.1(-)CMV的对照组喉癌Hep2细胞的杀伤作用。结果:阳性重组质粒pcDNA3.1(-)CMV.CD经XhoI/HindⅢ双酶切后获得5353bp的片段及496bp的插入片段,DNA自动序列分析证明重组体质粒含完整的477bp长的CD基因CDS序列。RTPCR从转染细胞总RNA中扩出453bp的预期片段。当添加不同浓度的5FC时,表达CD基因的Hep2细胞不同程度地被杀死,而对照组的细胞几乎未受到影响,两组细胞的相对生存率差异具有统计学意义(P&0.05)。结论:成功构建了质粒表达载体pcDNA3.1(-)CMV.CD,建立了稳定表达酵母菌CD基因的喉癌Hep2细胞株,表达CD基因的Hep2细胞可以被5FC杀死。
关键词： 自杀基因;酵母菌CD基因;基因治疗;喉肿瘤
2003年国家自然科学基金资助项目(No:);;
湖南省自然科学基金资助项目(No:02JJY2039)
参考文献：
1KuriyamaS,MasuiK,SakamotoT,etal.Bystander effectcausedbycytosinedeaminasegeneand5fluoro cytosineinvitroissubstantiallymediatedbygenerated5fluorouracil.AnticancerRes,9-3406.
2KanekoY,TsukamotoA.Genetherapyofhepatoma:bystandereffectsandnon apoptoticcelldeathinduced bythymidinekinaseandganciclovir.CancerLett,-110.
3Bentires AljM,HellinAC,LechanteurC,etal.Cyto sinedeaminasesuicidegenetherapyforperitonealcarci nomatosis.CancerGeneTher,-26.
4KievitE,BershadE,NgE,etal.Superiorityofyeast overbacterialcytosinedeaminaseforenzyme/prodrug genetherapyincoloncancerxenografts.CancerRes,7-1421.
5HamstraDA,RiceDJ,FahmyS,etal.Enzyme/pro drugtherapyforheadandneckcancerusingacatalyti callysuperiorcytosinedeaminase.HumGeneTher,3-2003.
6TrinhQT,AustinEA,MurrayDM,etal.Enzyme/prodruggenetherapy:comparisonofcytosinedeami nase/5fluorocytosineversusthymidinekinase/ganci clovirenzyme/prodrugsystemsinahumancolorectal carcinomacellline.CancerRes,8-4812.
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最主要看你的实验设计是怎么要求的了，当然还可以根据具体情况引入酶切位点引物是可以设计在目的序列两端的，引物可以就是目的序列的一部分、突变等等
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其他1条回答
你的问题我都没有搞清楚，你是要从质粒上扩一小段序列出来，还是通过PCR扩增出完整的质粒并在其中引入点突变？
换一个问题 一般的PCR结果正好是目的序列么？ 还是大于目的序列（因为不可能正好设计在目的学列两端）
一般就是目的序列那么大吧，最多也就两端加个酶切位点和保护碱基，为什么不能正好设计在目的序列两端？
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