革兰氏染色结果的影响因素及原因分析75
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革兰氏染色结果的影响因素及原因分析75
CN12-1352/N；实验室科学LABORATORYSCIENCE第1；革兰氏染色结果的影响因素及原因分析；王芳,宋瑛琳,田明；(山东农业大学生命科学学院,山东泰安271018；摘要:研究了菌龄、涂片厚度、媒染时间、,在进行革；Relatedfactorsandreasona；WANGFang,SONGYing-lin,TI；(CollegeofLifeS
　CN12-1352/N实　　验　　室　　科　　学LABORATORY　SCIENCE第1期　2009年2月No.1　Feb.2009革兰氏染色结果的影响因素及原因分析王　芳,宋瑛琳,田　明(山东农业大学生命科学学院,山东泰安　271018)摘　要:研究了菌龄、涂片厚度、媒染时间、,在进行革兰氏染色时,25,媒染时间以30～60s为宜。乙醇脱色程度是革兰氏染色的关键,s养时间不宜超过16小时,媒染时间以30～,30s以内。关键词:革兰氏染色;;中图分类号::文章编号:09)01-0104-03RelatedfactorsandreasonanalysisonresultofGram’sdyeWANGFang,SONGYing-lin,TIANMing(CollegeofLifeScience,ShandongAgriculturalUniversity,Taian271018,China)Abstract:Theinfluencesofbacteriumage,theeventhicknessofsmear,mordantagenttime,thede2greeofethanoldecolourationandotherrelatedfactorsontheresultofGram’sdyeofbacteriumarestud2ied.TheresultshowsthatE.coliinthenutrientagarculturetimeshouldnotmorethan25hoursinGram’sdyeing.Smearshouldbeevenandthin.Themordantdyeingtimetakes30～60sassuitable.Thedegreeofethanoldecolourationiskeytoexperimentandthetimeofdecolourationisstrictlycon2trolledbetween20～30s.WhilethecultivationtimeofBacillusshouldnotmorethan16hours,themordantdyeingtimetakes60～90sassuitable.Thedecolorizationtimeshouldbestrictlycontrolledin30s.Keywords:Gram’influencefactors　　革兰氏染色法是细菌学中一个重要的鉴别染色法,学生通过这个实验,可初步对细菌学有一个总体上的认识,提高其学习微生物学的兴趣。但是革兰氏染色的结果,受许多因素的影响,但其中最重要和关键的是菌龄和乙醇脱色时间对染色结果的影响。因为操作不当会带来完全相反的结果。因此,了解影响革兰氏染色结果的各种因素,提高染色结果的准确性,就显得特别重要。期。此时菌体的细胞壁成分和结构最为典型,经革兰氏染色液处理后,能正确地反映染色的结果。若菌体细胞未成熟或已经老化,染色结果可能会出现完全相反的情况。大肠杆菌的活跃生长期为24h左右,枯草芽孢杆菌活跃生长期为在14～16h,故选择从18～32h的范围,分10个时间段进行涂片染色,实验结果见表1。由表1可以看出,培养时间在23～25h的大肠杆菌和培养时间在14～16h的枯草芽孢杆菌均能得到正确的染色结果,但培养时间超过25h后,有1　菌龄对染色结果的影响革兰氏染色要求菌种被染色时处于活跃生长王芳,等:革兰氏染色结果的影响因素及原因分析105一半以上枯草芽孢杆菌出现阴性反应。出现阴性反应的枯草芽孢杆菌发现其有很多菌体已不呈典型杆状,显然由于培养时间过长,菌体已经死亡或部分自行溶解,造成细胞壁通透性增大而呈假阴性。由表2结果显示,涂片浓厚时,菌体明显堆积在一起,因大肠杆菌密集不易脱色或脱色不完全而呈G反应;而枯草芽孢杆菌涂片浓厚时,以至残留大量结晶紫,经番红复染后观察不到典型的蓝紫色而常常呈现紫色。因而无论大肠杆菌还是枯草芽孢杆菌涂片时均匀分散才能得到正确的结果。+2　涂片质量对细菌的堆积密度染色结果的影响用直径3mm的接种环分别挑起培养24h的大肠杆菌和培养15h的枯草芽孢杆菌满环、半环、甚至更少量涂片,使细菌在一滴纯净水中涂成直径为12～15mm的片状,作革兰氏染色后观察。每种情3　媒染时间对染色结果的影响将培养24h的大肠杆菌和培养15h左右的枯草芽孢杆菌染色,用碘液作媒染剂,覆盖时间分别为30s、60s、90s、120s。各涂片20张,实验结果见况涂片20张,作革兰氏染色观察,如表2所示。表3。　　由表3可以看出,媒染时间过短,不利于初染液结晶紫与细胞之间的结合,因而可能造成阳性菌呈阴性结果;反之,媒染时间过长,容易使阴性菌呈假阳性。媒染时间应控制在60s左右为宜。4　乙醇脱色时间对染色结果的影响革兰氏阴性菌细胞壁疏松,脂类含量高,肽聚106糖含量低。因此用乙醇脱色时,G菌的脂类物质易被酒精溶解,致使细胞壁通透性受到影响,细胞内的结晶紫―碘复合物易被乙醇溶解脱出,使菌体无色。因此,若脱色时间过长,革兰氏阳性菌也有-可能被脱色,成为假阴性菌。同样若脱色时间不足,革兰氏阴性菌细胞壁的部分类脂质未被乙醇溶解,使结晶紫―碘复合物不能被洗脱出来,成为假阳性菌。实验结果见表4。表4　乙醇脱色时间对染色结果的影响　　表4结果显示,乙醇脱色时间不够,阴性菌可能被染成阳性菌,虽然只差10s、20s,但染色结果相差较大。因此,革兰氏染色要严格控制脱色时间,一般以30～60s为宜。控制好菌龄和脱色时间,这样才能保证染色结果的典型性和准确性。参考文献(References):[1]　石鹤.菌龄和脱色时间的改变对细菌革兰氏染色结果的影5　结果分析通过对实验结果进行分析,可以看出:菌龄、细菌密集程度、媒染时间、酒精脱色程度等会影响革兰氏染色的正确性。菌龄对革兰氏染色的结果有较大的影响,且与活跃生长期的时间差距越大,影响也越大;菌龄对革兰氏阴性菌的染色结果的影响较阳性菌大。其机理尚待研究,可能与阴性菌细胞壁结构中类脂质的生成、降解变化有关。菌龄提前较之菌龄推迟对染色结果的影响小得多。脱色时间延长只对革兰氏阳性菌的染色结果有影响,对革兰氏阴性菌影响较小。而脱色时间缩短只对革兰氏阴性菌的染色结果有影响,对革兰氏阳性菌无影响。延长脱色时间对革兰氏阳性菌染色结果的影响较大,但继续延长其影响变化不大。因此在进行革兰氏染色实验教学和科研工作中,一定要按操作规范响[J].湖北师范学院学报,-94.[2]　周爱灵,王晓琴,谢宗平.影响革兰氏染色的因素及常见错误结果分析[J].甘肃高师学报,-37.[3]　刘屹峰.革兰氏染色方法的改进[J].鞍山师范学院学报,):67-68.[4]　廖延雄.革兰氏染色与革兰氏变性[J].中国兽医科技,-74.[5]　黄元桐,崔杰.革兰氏染色三步法与质量控制[J].微生物学报,):76-78.[6]　何键民.细菌革兰氏染色辅助鉴别技术的实验研究[J].现代检验医学杂志,-39.[7]　沈萍.微生物实验(第四版)[M].北京:文采教育出版社,1999.收稿日期:作者简介:王芳(1971-),女,山东人,硕士,实验师,主要从事微生物学实验教学和管理工作。包含各类专业文献、文学作品欣赏、生活休闲娱乐、外语学习资料、高等教育、应用写作文书、专业论文、革兰氏染色结果的影响因素及原因分析75等内容。
　E.coil 的生长现象并分析其原因;(8 分) 5、试设计一个试验证明基因突变的...7、影响细菌革兰氏染色结果的因素有 -、-、-, Bacillus subtilis 属于 -细菌,... 　大肠杆菌在含有葡萄糖和乳糖的肉汤培养液中的生长曲线 三、填空题(20 分,答案写在答题纸上) 1、 影响革兰氏染色结果的因素有 、、, 革兰氏阳性菌的颜色是 色。... 　脱色时间的长短还受涂片厚薄及 乙醇用量多少等因素的影响,难以严格规定。 2、...2、分析你的染色结果是否正确?如果不正确,请说明原因。 2
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在革兰氏染色中，细菌过于密集常呈现假阳性反应，为什么？
在革兰氏染色中，细菌过于密集常呈现假阳性反应，这与什么有关呢 ？
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细胞过于紧密影响了酒精的脱色，导致脱色不完全残留了结晶紫，就会表现出阳性
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细菌过密使第一步结晶紫脱色不完全，会出现假阳性！
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出门在外也不愁革兰氏染色需要注意哪些问题 为什么_百度知道
革兰氏染色需要注意哪些问题 为什么
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1.选用活跃生长期菌种染色，老龄的革兰氏阳性细菌会被染成红色而造成假阴性。2.涂片不宜过厚，以免脱色不完全造成假阳性。3.脱色是革兰氏染色是否成功的关键，脱色不够造成假阳性，脱色过度造成假阴性。
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在实验中需要注意，经常会出现假阳性和假阴性的结果，假阳性主要是由于脱色不完全，可能是由于涂片过厚，或者是结晶紫染色过度，导致脱色不完全。假阴性可能是因为细胞固定过度，造成细胞壁通透性的改变，而出现假阴性结果；另外，细胞培养时间太长，可能已经有部分细胞发生死亡或者自溶，也导致细胞壁通透性的改变而出现假阴性结果。
注意安排G+ G- 对照 过火时候不要太久 孔雀绿不要烤糊了
需要注意颜色和脱色时间
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