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Recombinant Human Keratinocyte Growth Factor (KGF) Certificate of Analysis and Data Sheet
Source: E.Coli
Catalog No. CYT-219
Background:
KGF is a potent specific mitogen for many epithelial cells but not for fibroblasts and endothelial cells. KGF is thought to play an important role in the paracrine growth control of normal epithelial cells. KGF stimulates the proliferation of primary and secondary human keratinocytes to the same extent as .
Description :
Recombinant Human KGF-1 (FGF-7) produced in E.Coli is a single, non-glycosylated, polypeptide chain containing 164 amino acids and having a molecular mass of 18995 Dalton. Recombinant KGF is purified by proprietary chromatographic techniques.
Physical Appearance:
Sterile Filtered White lyophilized (freeze-dried) powder.
Formulation:
Recombinant KGF was lyophilized from a concentrated (1mg/ml) solution with no additives.
Solubility:
It is recommended to reconstitute the lyophilized KGF in sterile 18Mω-cm H2O not less than 100&g/ml, which can then be further diluted to other aqueous solutions.
Stability:
Lyophilized KGF although stable at room temperature for 3 weeks, should be stored desiccated below -18 C. Upon reconstitution KGF should be stored at 4 C between 2-7 days and for future use below -18 C. For long term storage it is recommended to add a carrier protein (0.1% HSA or BSA). Please avoid freeze-thaw cycles.
Greater than 98.0% as determined by: (a) Analysis by RP-HPLC. (b) Anion-exchange FPLC. (c) Analysis by reducing and non-reducing SDS-PAGE Silver Stained gel.
Amino acid sequence:
The sequence of the first five N-terminal amino acids was determined and was found to be Met-Cys-Asn-Asp-Met.
Dimers and aggregates:
Less than 1% as determined by silver-stained SDS-PAGE gel analysis.
Biological Activity:
ProSpec's KGF is fully biologically active when compared to standards. The ED50, calculated by the dose-dependant stimulation of KGF-responsive BaF3 indicator cells (measured by 3H-thymidine uptake) is & 10ng/ml corresponding to a specific activity of 10 Units/mg. ProSpec's rHuKGF biological activity was measured by the KGF's mitogenic activity on BaF3 cells expressing the KGF receptor.
Endotoxin:
Less than 0.1 ng/&g (IEU/&g) of KGF.
Protein content:
Protein quantitation was carried out by two independent methods: 1. UV spectroscopy at 280 nm using the absorbency value of 0.9 as the extinction coefficient for a 0.1% (1mg/ml) solution. This value is calculated by the PC GENE computer analysis program of protein sequences (IntelliGenetics). 2. Analysis by RP-HPLC, using a calibrated solution of KGF as a Reference Standard.
Prospec's products are furnished for LABORATORY RESEARCH USE ONLY. The product may not be used as drugs, agricultural or pesticidal products, food additives or household chemicals.
Name:FGF7Synonyms:KGF
Protein synonyms/aliases:
Keratinocyte growth factor precursor (KGF)&&&&(Fibroblast growth factor7)&&&&(FGF-7)&&&&(HBGF-7).
Protein Family:
Belongs to the heparin-binding growth factors family
&& 北京启维益成科技有限公司(Beijing QiWei YiCheng Tech.,Ltd.(Qwbio))成立于2005年12月,由从事生物领域多年销售经验人士创立。目前我公司已经与几十家著名的试剂供应商建立了长期稳定的合作关系,已成为众多国际知名品牌的中国总代理或一级代理商;并且为满足国内客户的最新需求,我们也与时俱进地不断与世界上更多的知名品牌洽谈合作代理事宜;企业的主要目标是把国外有特点的生物前沿产品引进中国,让国内科学研究机构和制药企业尽早使用上最新型的科研产品。
&&&&我们代理的产品覆盖细胞生物学、植物学、分子生物学、免疫学、生物化学、蛋白组学。生物制药与诊断试剂研发生产等领域。
细胞生物学包含细胞培养,细胞迁移,细胞信号转导等。
植物学包含植物抗体,植物抗生素,植物组织培养试剂等。
分子生物学包含表观遗传试剂盒,核酸提取,转染试剂等。
免疫学包含抗体,各类检测试剂盒等。
生物化学包含各类生化试剂,化学小分子,常规试剂等。
蛋白组学包含不同种属的重组蛋白,天然提取蛋白,细胞因子等。
生物制药与诊断试剂研发方面的试剂包含各类蛋白抑制剂,酶类等。
&&&&在公司全体员工的共同努力和国外生产商的支持下,在业务上实现了迅猛发展,相继在上海、武汉、广州、长春、石家庄、哈尔滨等重点城市建立了分支机构或授权服务商,并以专业和优质的服务成为多家世界500强企业的中国区产品供应商,以及中国科学院科研采购平台的中标供货商。2008年以后业务的迅猛发展促进了启维益成内部组织架构的不断优化,我们建立了自己的网络销售平台,业务代表销售平台,针对科研客户与企业客户的不同需求,综合网络平台和业务代表平台的优点,启维益成创建了科研用户与工业客户两支独立的营销团队,分别配备不同的专业技术支持和客服人员,通过网络和业务代表,力求为不同类型的客户提供前沿专业的解决方案。
&&& 公司客户遍布中国生命科学基础研究、开发应用、制药、疾病诊断与控制、商品检验检疫、生物技术公司、食品安全以及农林畜牧业等诸多领域。
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& &&放眼未来,公司将努力实现更大的突破,将国外优秀产品不断引进国内,同时积极推动国内的产品销往世界各地
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表皮细胞生长因子英文名:
Recombinant Human Epidermal Growth Factor
英文缩写:
EGF、rhEGF、rhuEGF、rh-EGF、rhu-EGF、Epidermal Growth Factor
,重组人表皮生长因子,表皮生长因子,
重组人表皮生长因子(EGF)是由53个氨基酸组成的相对分子量为6222的小分子多肽。采用基因工程技术和独特的色谱技术分离纯化、冻干制备。EGF作为一种强有力的细胞分裂因子,具有多种生物活性。
外观:白色疏松状冻干粉。
纯度:&95% ,采用反相-高效液相(RP-HPLC)方法测定。
纯度:&95% ,采用非还原性聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE),银染检测。
生物活性:5&105 IU/mg.
0.1mg、1mg、2 mg、10mg、1g/西林瓶,粉状冻干品密封包装。
储存:在室温下可存放180天;建议在2-8℃的冷柜中避光、密封保存,三年其生物活性不改变。
用途:(EGF)作为一种强有力的细胞分裂因子,具有多种生物活性,EGF具有修复表皮、抗衰老、淡化色斑、平复皱纹、滋润之功效,人体中EGF的含量多少直接决定着皮肤的年轻程度,EGF因此又被誉为&美丽因子&,主要表现为:
1)在体内刺激皮肤组织、角膜和气管上皮组织的生长繁殖。
2)促进细胞再生和组织修复:EGF有促进皮肤和黏膜创伤面的愈合作用,并减少疤痕挛缩和皮肤畸形增生,加速角膜、皮肤等表皮创伤的修复。用于治疗疤痕,尤其是痤疮后留下的疤痕、疙瘩疗效较好。
3)嫩肤护肤作用:EGF能促进皮肤细胞对营养物质的吸收,加速细胞的新陈代谢,促进皮肤细胞的分裂和增长,促进透明质酸和糖蛋白的合成。
4)增强表皮细胞的蛋白质、DNA、RNA的合成和细胞代谢等。
5)防晒作用:EGF能促进新生细胞生长,替代受紫外线照射损伤的细胞,以降低皮肤中黑色素细胞的数量。
6)EGF不仅具有促进皮肤和黏膜创伤的愈合,防治溃疡以及消炎镇痛的作用,而且能有效促进和调节表皮细胞的生长和增殖,表皮细胞生长因子对保护和疗养皮肤、黏膜具有十分独特的功效。广泛应用于治疗烧伤、烫伤、手术伤、机械伤、皮肤溃疡、激光美容等。
医药:表皮生长因子在医药领域具有重要的意义,研究表明它能促进受伤的皮肤组织生长,抑制胃酸的分泌,可促进烧伤皮肤的生长和皮肤溃疡的愈合,它将在皮肤病、胃病治疗、角膜移植手术中起重要作用。
化妆品:美国学者的研究表明,表皮生长因子具有延缓皮肤细胞衰老、促使人皮细胞的修复和生长的作用,使皮肤光滑丰润。
生化试剂: 本品可为生化试剂在科研、检测等多个领域中使用。
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角质细胞生长因子(KGF)产业技术开发
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技术编号:100574研发时间:2000年01月
所属行业:
专利所属地区:中国技术类型:实用新型
专利号/申请号:未申请专利
技术成熟度:正在研发
技术交易方式:资料待完善
一、项目特点与技术指标
  KGF是一种多功能的生长因子,其主要功能是促进上皮细胞的增生,因此它在皮肤损伤修复和器官的形态发育中具有重要作用。皮肤的损伤修复是一个复杂的过程,包括肉芽组织的形成、上皮的再形成和组织重建三个过程。这些过程需有大量的生长因子和细胞因子的介导。其中KGF在上皮的再形成过程有重要作用。另外,由于细胞生长因子因其独特的生物学活性,已被广泛地应用于医学美容化妆品上,法国一些化妆品公司利用碱性成纤维细胞生长因子作为化妆品(面霜)的添加剂,制成新一代的化妆品。国内关于角质细胞生长因子的研发报道不多见,只是在几家上市公司的招股或配股说明书中提及到未来几年内可能开发此药。因此该药在国内应属于领先水平。
  产品的技术指标:可溶性融合蛋白表达量不低于细菌总蛋白量的4.0%,纯化得率不低于50%;纯化产物促细胞增殖活性的最低浓度应不高于0.1ng/mL;小鼠(或猪)II度烫伤模型伤口愈合时间缩短3天以上。
  二、技术成熟成度
  已克隆了KGF基因并研究了该基因的表达条件,其可溶性融合蛋白表达量可达细菌总蛋白量的4.0%,比国外已有报道的表达水平高;研究了该基因表达产物的初步纯化方法、Westernblt、初步的生物学活性检测等工作,得到了较为理想的结果。
  三、应用范围
  用于烧伤或其他皮肤损伤病人的外用药,也可用于抗衰老的化妆品。
  四、投产条件和预期经济效益
  该项目目前正在进行临床前的研究。完成临床前研究后,申报国家新药。需要有经济实力和具有基因工程药物生产能力的企业,共同努力完成KGF的产业化。
  我国每年发生创伤的人数约百余万。在这些受伤者中有相当一部分需要进行不同程度的创伤修复治疗。rhu-KGF在创伤治疗中具有广阔的应用前景。同时该生长因子在溃疡型肠炎以及癌症化疗后口腔粘膜及胃肠粘膜损伤引起的炎症等治疗中也具有潜在的应用价值,还可作为化妆品由于延缓皮肤老化,对皮肤提供彻底的养护。因此该项目具有明显的社会效益和经济效益。
联系人:陈主任
所在地:福建厦门
查看联系方式前,请请确认您已
成科易网会员并处于状态。角质细胞生长因子-1((?)eratinocyte growth factor-1, KGF-1即FGF7),是目前对皮肤损伤修复最有效且特异性最好的成纤维细胞生长因子家族(FGFs)成员之一。KGF-1来源于间质细胞,通过旁分泌方式作用于不同组织来源的上皮细胞,其生理功能主要表现在上皮形态功能的发生、伤口表皮细胞的再生、毛囊的生长和器官的形态发生等方面。临床应用于放化疗后的口腔黏膜炎的治疗,以及一些潜在应用有糖尿病等代谢性疾病引起的慢性伤口愈合、早产儿的主要障碍-表面活性剂的不足和支气管肺发育不良、急性肺损伤的治疗、急性肝损伤的保护及再生等。但是由于KGF-1蛋白表达量(E. coli)(?)低且稳定性差,一直制约着KGF-1蛋白在药物上的研发进程。KGF-1也曾在哺乳动物细胞、植物细胞中尝试表达,但是表达量和稳定性仍然没有得到解决。因此,亟需一种新的方法解决KGF-1的生产问题。昆虫细胞-杆状病毒表达系统(IC-BEVS)在近30年来得到了迅速应用,目前用于商业化表达重组疫苗和药用蛋白,该系统具有表达速度快,可以表达相对较大的目的蛋白,不含有动物病原体,并可以对真核来源的蛋白进行翻译后修饰,活性与天然蛋白类似等优点。因此,本论文使用昆虫细胞作为生物反应器,进行重组KGF-1在昆虫细胞中表达,根据KGF-1蛋白的特点和昆虫表达系统的特性进行研究。首先,从基因水平入手,为了提高KGF-1的表达量,对KGF-1基因进行改造,根据昆虫偏好密码子的使用规律,同时考虑mRNA的结构对翻译及稳定性的影响进行基因优化。其次,由于KGF-1蛋白的不稳定性,根据现有的报道对KGF-1蛋白的N-端氨基酸进行截短,设计3种形式的KGF-1蛋白的病毒载体,并对其天然的信号肽序列在昆虫细胞反应器中发挥的功能进行分析;此外,IC-BEVS系统是瞬时裂解表达系统,蛋白表达条件及收获时间直接影响重组蛋白的质量和产量。因此,对不同形式的rhKGF-1蛋白的表达条件进行优化,并利用KGF-1具有肝素亲和特性进行纯化;最后,对重组的rhKGF-1蛋白的活性进行研究,进行体外活性实验,通过MTT法对rhKGF-1蛋白促HaCat细胞和BaF3细胞的增殖进行研究;体内活性实验通过对急性肝损伤的保护进行验证,并探讨其不同形式的KGF-1蛋白活性的异同。通过对上述内容的研究,得到以下结论:1.3种形式的KGF-1基因经昆虫偏好密码子优化后在昆虫细胞中均得到表达(即rhKGF-1194, rhKGF-1163, rhKGF-1140),但表达方式略有不同。KGF-1天然的信号肽可以在昆虫细胞中发挥作用,帮助蛋白分泌到胞外,缩短了rhKGF-1194蛋白的表达时间。2.不同MOI转染细胞对细胞毒害及蛋白产量均有显著影响,不同的收获时间对细胞的产量存在显著影响。最佳的MOI值约在1-3之间,胞内表达在84-96h收获,分泌表达条件下在48-60h收获最佳。3.3种不同形式的目的蛋白稳定性有差异,rhKGF-1140的稳定性好于rhKGF-1194和rhKGF-1163,rhKGF-1194和rhKGF-1163在储存过程中出现降解,从20kDa均降到17kDa左右,大小与rhKGF-1140相接近。4.纯化后的蛋白都具有促细胞有丝分裂活性,其中rhKGF-1140的活性优于rhKGF-1194和rhKGF-1163。5.rhKGF-1对急性肝损伤的保护作用。3种形式的rhKGF-1蛋白对小鼠急性肝损伤均有保护作用,其中rhKGF-1140蛋白的作用最明显,而rhbFGF对小鼠急性肝损伤有保护作用但效果不明显;同时,体外实验表明:rhKGF-1对CC14诱导的HL7702肝细胞损伤有保护作用,初步判断其保护作用是通过减少细胞坏死和抑制细胞凋亡来实现的。通过本研究初步建立昆虫细胞表达rhKGF-1蛋白的表达优化条件,可以认为rhKGF-1在昆虫细胞反应器中表达是可行的,同时也发现rhKGF-1在纯化和储存过程中不稳定发生降解的问题。本论文的研究为大规模利用昆虫细胞生产rhKGF-1蛋白奠定了基础。但是,由于本研究的条件优化仅限于小规模摇床表达,在使用wave或发酵罐进行放大规模表达时还需要进一步对细胞密度、溶氧、pH值、培养基营养等条件进行摸索,尤其是培养基的成本非常高,据报道自制新型的无血清培养基会大大的降低生产成本10-20倍,所以,实现大规模生产hKGF-1还需要进一步深入和系统的研究。
Keratinocyte growth factor1(KGF-1, FGF7) is the most effective and specific member of FGF family for skin damage repairing on epithelial cells. KGF-1, derived from mesenchymal cells, play an important role in the epithelial cells proliferation and differentiation of different organs through paracrine mainly dependent on its special receptor of FGFR2Ⅲb. KGF-1functions involved in epithelial morphology, wound epidermal cells regeneration, hair follicle growth, early lung morphogenesis and other physiological functions. The commercial pharmaceutical of KGF-1is Kepivance(?)(palifermin) that from Amgen used for oral mucositis caused by radiotherapy and chemotherapy. Furthermore, there are still some potential applications for chronic wound healing caused by diabetes and other metabolic diseases, a major obstacle in preterm infants who lacking of surfactant and bronchopulmonary dysplasia, lung injury and acute liver injury and regeneration. However, due to the low production of rKGF-1protein expression (E. coli) and instability, the development of KGF-1in pharmaceuticals was limited. KGF-1was also attempted to express in mammalian cells, plant cells, but the yield level and instability is still not resolved. So we try to express rhKGF-1in insect cells, because insect cell-baculovirus expression system (IC-BEVS) has been widely used in the last30years. There have been commercial vaccines in the market and thousands of foreign recombinant proteins yield by this expression system. The advantages of this system involved that it could be fast and efficient expressed even in a relatively large target protein, not containing animal pathogens, and the protein from eukaryotic could be modified with the most similar activity to the natural protein. Therefore, the feasibility of insect cells as bioreactor to produce recombinant keratinocyte growth factor-1was studied, accordingly to the problems of KGF-1protein to solve by following these solutions:Firstly, we improved expression of KGF-1from the genetic level. After the KGF-1gene mutant by insects preferred codon usage patterns, taking into account of the structure of mRNA and enhan Furthermore, KGF-1is fairly unstable, so the gene of N-terminal amino acid was truncated based on existing reports, and three forms reconstructed Secondly, there exists characteristics of post-translational modification in insect cell reactor, rhKGF-1protein retaining the natural signal peptide sequence, functions can be anal Thirdly, the IC-BEVS system is a transient expression system, cells lysate during the stage of infection phase, so the protein expression conditions and harvest time are directly impact the quality and yield of As one of KGF-1characteristic is the heparin binding, so the rhKGF-1protein purification depende Finally, rhKGF-1biological activity in vitro was tested by MTT methods to assay BaF3and HaCat cells proliferation, in vivo activity assayed by preventing liver from acute injury and comparison effect of different KGF-1. Five results were obtained in the fowling:Firstly, optimized gene of KGF-1by insect preference codon can be expressed in insect cells (namely rhKGF-1194, rhKGF-1163, rhKGF-1140), and expression methods is different from three forms KGF-1 native signal peptide of KGF-1played a key role in secretary expres Furthermore, different MOIs transfected cells have a significant effect on cell toxicity and protein yield, and the harvesting time is significantly different with the yield of protein, intracellular expression treated with MOI of1~3in84-96h, we got the best harvest, and the secretion is earlier in48-60h; Secondly, the stability of three forms protein was different, rhKGF-1140is more stabile than rhKGF-1194and rhKGF-1163; rhKGF-1194and rhKGF-1163appeared degradation during purification and storage, and the size of them were decreased from m
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