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【求助/交流】急！！！琼脂糖凝胶电泳的问题，跑不出条带了！！
这几天的胶总是跑不出理想的图。琼脂糖是新买的，染液用的是SYBR GREEN，也是新买的，缓冲液用的是0.5X的TAE。恒压100V，胶是1%。我跑的是PCR产物，marker的条带越来越少，现在连marker都跑不出来，求助一下大家，看看是哪里出问题了？
首先，不知道你们实验室为啥习惯用0.5 TAE，TAE一般都用1 TAE，因为其本身缓冲能力就比TBE弱，跑几次之后TAE缓冲能力都没有了，DNA跑不动。
第二，可以检查一下电极丝是不是接触不良了。 是不是缓冲液的问题。我一般用0.5倍TBE。或者换一种染液试试 染料换个试试吧~~~
我们用的是1*的~~~:D :rol:也有可能marker 不行了~~~
我们以前的marker1 点1就可以了~~~
最近买的都得点5或者6 才可以~~~ 0.5×的没问题，我这学期也都用这种缓冲液，染料的问题？？？ 是不是染料的问题，我们知道DNA分子量越大越容易结合染料，所以染料就多，而当分子量小的话，结合的就少，楼主是不是可以增加染料的浓度或染色时间试试呢？仅是个人观点。 核酸染料有问题！ 怎么才能检测染料是不是失效了呢?SDS-PAGE电泳常见问题_百度文库
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SDS-PAGE电泳常见问题
S​D​S​-​P​A​G​E​电​泳​常​见​问​题
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SDS-PAGE电泳问题总结
蛋白质条带为什么走到下面逐渐变宽发散？回答:多数情况是因为小分子在胶里的运动不规律，这种情况常发生在高浓度胶或凝固不?????一致的胶里，你可以加大阴极的缓冲液浓度，可能会有点改善胶凝的快慢不在于TEMED多少，在于APS的量，APS提供自由基，TEMED帮助自由基作用，是催化剂，对凝固速度影响不是太大，可以试试加大APS的量丙烯酰胺在凝胶中的百分比????????????????分离胶的分辨范围?????????15??％?????????????????????????????15～45 kDa?????????12.5％?????????????????????????????15～60 kDa?????????10??％?????????????????????????????18～75 kDa??????????7.5％?????????????????????????????30～120kDa??????????5??％?????????????????????????????60～212kDa来源于《蛋白质技术手册》汪家政每种浓度的变性胶的分离范围不是指能跑出哪个范围分子量的蛋白质，而是指在这个区间内，蛋白质迁移率基本和分子量成正比，也就是线性关系，为了数据的可靠性，大家尽量根据这个来选择自己配胶的浓度。下层也就是阳极缓冲液的作用当然是导电，用普通TRIS缓冲液做阳极缓冲液，一样跑得好，阴极就不一样了，需要提供离子强度和SDS环境，而在电泳过程中，阴极缓冲液的一些离子损失，而且与样品接触，不适合再次使用至于有些时候跑太大浓度的胶，因为药品，BUFFER配制过程的一些问题，导致会出现蛋白带无法电泳到分离胶的最下方，胶跑得难看情况比较多，一般来说，15%的胶已经能够跑出大约15KDa左右的蛋白，对于普通SDS-PAGE已经几乎到了极限，还跑不出来的MARK带，就不必去追究商品的问题了SDS-PAGE胶的凝结速度受温度影响很大，随着温度的升高，凝结速度越来越快，温度降低则反之。所以，夏天时胶凝结的比较
正在加载中，请稍后...质粒单酶切出现两条带质粒单酶切后电泳出现两条带,两条相距很近,前面一条较宽,后面一条较窄,为什么?_百度作业帮
质粒单酶切出现两条带质粒单酶切后电泳出现两条带,两条相距很近,前面一条较宽,后面一条较窄,为什么?
质粒单酶切出现两条带质粒单酶切后电泳出现两条带,两条相距很近,前面一条较宽,后面一条较窄,为什么?
可能是质粒仅有单酶切的一个位点,部分酶切了,部分没有酶切,酶切的是多数,所以产生条带较大（也就是浓度的不同）~但是完整的质粒和酶切后的质粒条带因为结构关系应该不会很近诶!可以看哈是不是电泳的时间不够~!若是存在两个以上的单酶切位点,原则上可以产生多种条带~比如有两个单酶切位点可以产生：完整的质粒,单酶切的一个位点被切,两位点被切三种情况；这样的原则上会产生四种大小不同的条带!酶切位点越多条带数应该越多才是!若是多位点的,可能会是电泳跑得不好,没有分出明显的条带!没做过质粒酶切电泳,仅是理论上分析的哈!
因为浓度不同..
因为电泳的条带的宽窄亮度都是与其DNA的质量成正比，酶切后大一点的那条带因为分子量大，质量也大（因为两条线性DNA的物质的量是一样的），所以会宽一些。请帮我分析一下这个琼脂糖凝胶电泳图！可加悬赏！右边两个条带为同一样品，为什么条带宽度不一样？如果上样量有偏差的话，不应该只是条带亮度不一样吗？假如用同一样品上样，上样_百度作业帮
请帮我分析一下这个琼脂糖凝胶电泳图！可加悬赏！右边两个条带为同一样品，为什么条带宽度不一样？如果上样量有偏差的话，不应该只是条带亮度不一样吗？假如用同一样品上样，上样
请帮我分析一下这个琼脂糖凝胶电泳图！可加悬赏！右边两个条带为同一样品，为什么条带宽度不一样？如果上样量有偏差的话，不应该只是条带亮度不一样吗？假如用同一样品上样，上样的量不一样，上样量多的条带相比于上样量少的条带会有怎样的区别？
同一样品上样，上样多的确实会比较宽一些而且亮一些~另外你的胶图为什么是紫色背景
上样量相差不多的时候会出现亮度不同，相差太大则就是宽度不一了，你想啊，太多了放不下肯定会变宽啊。}