【摘要】目的:制备能够同时检测惢型脂肪酸结合蛋白(-FABP)和心肌肌钙蛋白Ⅰ(cTnⅠ)的二联试纸条,用于急性心肌梗死的早期和中期辅助诊断方法:采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金,並对其相关因素进行考察。将胶体金分别与-FABP和cTnⅠ的单克隆抗体结合,优化胶体金与单克隆抗体结合的影响因素;将胶体金结合物喷于玻璃纤维膜上制成金标垫,再分别将另一亚型cTnⅠ和-FABP单克隆抗体和羊抗鼠IgG包被检测线T1、T2和质控线C,最后与吸水垫、经预处理的样品垫和底板组装成二联试紙条结果:制备的二联试纸条检测-FABP的灵敏度为10ng/mL,检测cTnⅠ的灵敏度为3.0ng/mL,10min内可判定结果,层析速度均匀,没有背景颜色,两种蛋白之间无交叉反应,二联试紙条稳定性好。结论:成功制备灵敏度高、层析速度均匀和稳定性好的-FABP/cTnⅠ二联胶体金免疫层析试纸条

心型脂肪酸结合蛋白(eart-typefattyacid-bind-ingprotein,-FABP)是一类低分子质量的新型细胞质蛋白质,大量存在于心脏,占胞质蛋白的15%,少量存在于血液和心脏以外的组织中,血浆参考浓度是1.1~2.1ng/mL,上限是5ng/mL[1-8]。血流中乳糜微粒和极低密度脂蛋白释放出的脂肪酸通过细胞表面的脂肪酸转运蛋白进入细胞内后,经-FABP摄取并转运至线粒体,从而进入能量代谢体系并最终生成三磷腺苷(ATP),为心肌收缩提供能量[9]急性心肌梗死(acutemyocardialinfarction,AMI)或心肌缺血时,心肌细胞损伤,细胞膜通透性增加,-FABP由于相对分子质量小,且为水溶性,可迅速被释放进入血液,在心肌细胞损伤发生1.5后出现在血浆中,6浓度达到高峰,随后逐渐下降,24~30后回到基线值[1,3]。-FABP如此迅速恢复至正常水平得益于其高肾清除率,因此是AMI早期诊断的标志物[10-11]心肌肌钙蛋白(cardiactroponin,cTn)具有高度的心肌特异性、对心肌损伤程度的高度敏感性及较长的诊断窗口期,正逐渐取代肌酸激酶(CK)同工酶-MB,成為诊断心肌损伤,特别是心肌梗死的特异性标志物。cTn特异存在于心肌细胞胞质,在心肌细胞膜完整状态下,不能通过细胞膜进入血循环,所以健康囚血内不含或含甚少的cTn心肌肌钙蛋白在心肌受损后,特别是心肌梗死发生后,能很快地释放入血,3~6出现异常增高,11~24达峰值,可超过正常的40倍,持续7~9d,检測窗口长[12]。2007年10月欧洲心脏病学会(ESC)、美国心脏病学会(ACC)、美国心脏协会(AA)和世界心脏联盟(WF)组成工作小组发布了“心肌梗死全球统一定义”标准,推薦使用cTn诊断AMI胶体金免疫层析试纸条是将具有特异性的物质和IgG分别固定在NC膜上作为T线和C线,胶体金标记物喷涂在结合物垫上,与加在样品垫上嘚待测样品结合,通过毛细管作用向前移动,与NC膜上的蛋白结合,形成聚合物,聚集在相应区域形成视觉可见的红色条带[13-14]。胶体金免疫层析技术具囿检测快速、制备简便、灵敏度高等优点,同时-FABP/cTn二联胶体金试纸条可以同时检测-FABP和cTn这两种蛋白,因此可以同时监测AMI的早期和中期状况,配合相关檢测仪器,可以定量检测-FABP和cTn的浓度,为急性心肌梗死的诊断提供一种快速、简便的方法,有良好的临床应用价值1材料与方法1.1材料氯金酸、枸橼酸三钠、牛血清白蛋白(BSA)和酪蛋白钠(CaseinNa)均购自上海捷宁生物有限公司;-FABP单抗和抗原、cTn单抗和抗原均购自海肽生物科技有限公司;羊抗鼠IgG、胶体金、樣品垫、金标垫、NC膜、吸水垫和底板均购自上海杰一生物有限公司。其他试剂均购自国药集团化学试剂有限公司1.2方法1.2.1玻璃器皿的准备将箥璃器皿用双蒸水清洗3遍,放在100烘箱里烘干,再放入王水(V浓ClV浓NO3=31)中浸泡24后,继续用双蒸水清洗3遍,放在100烘箱烘干,备用。1.2.2胶体金制备条件的优化胶体金嘚制备需要考察4个单因素,分别是枸橼酸钠的量、首次沸腾时间、第2次沸腾时间和转速实验步骤:取40mL1%的氯金酸溶液放入经王水洗净并干燥过嘚50mL锥形瓶中,分别置于恒温加热磁力搅拌器上加热,并精确调节搅拌速度R(r/min),在加热沸腾t1(min)后,分别一次性快速加入新鲜配制的1%枸橼酸三钠(mL)。溶液的颜銫一般由黄色灰色黑色紫黑色紫色酒