【摘要】：目的肿瘤目前已成为嚴重威胁人类健康的一大疾病,但目前缺乏作用强,毒副作用低的药物本课题将美洲大蠊中分离的已知具有抗肿瘤活性的小分子肽CII-3和粗品美蠊精,应用于肿瘤模型MFC荷瘤小鼠,通过检测和分析其对肿瘤局部微环境及固有免疫细胞的调节作用,来评估美洲大蠊小分子肽CII-3和粗品美蠊精的免疫调节在抗肿瘤中的作用和地位,为该药物的开发及临床应用提供基础依据。方法方法通过改良MTT法观察CII-3和美蠊精对多株小鼠肿瘤细胞的体外增殖抑制作用,初步确定对CII-3和美蠊精较为敏感的小鼠肿瘤细胞株通过血清总补体活性试验观察CII-3和美蠊精对补体溶血活性作用的影响。将小鼠胃癌细胞MFC接种于6周龄BALB/c小鼠,静养10天左右,小鼠右侧腋下出现明显的肿瘤块,提示造模成功将其随机分为模型对照组、CTX组、CⅡ-3高/低剂量组、美蠊精组及正常对照组,共6个组,连续给药10d后处死,从小鼠眼眶静脉取血采用ELISA法测定小鼠血清中的Ig
CP/PD1(CD279)-PE/CD4-APC抗体染色检测衰竭型T细胞,做F4/80-FITC/CD206-PE/CD16/32-PE抗体染色检测肿瘤局蔀微环境中TAM、M1细胞和M2细胞,采用流式细胞术分析,探讨CII-3和美蠊精的抗肿瘤作用机制。结果结果1.体外研究结果显示:细胞毒性研究中,CII-3和美蠊精对小鼠胃癌细胞MFC的半数抑制浓度(IC50)均较小促补体活性研究中,CII-3和美蠊精促进50%溶血浓度(CH50)分别为44.8
mg/ml,均对经典途径激活的补体,具有促进其活性作用,其中CII-3活性较强。2.抗肿瘤作用初步研究结果显示:较正常对照组相比,各组均出现脾肿大,模型对照组肿大最为明显CII-3和美蠊精组与正常对照组及CTX组相比,脾指数升高较为明显,差异具有统计学意义。模型组对照组的肿瘤块较其他各组都大,CII-3低剂量组与美蠊精组的肿瘤块相对较小,且颜色较浅CII-3和媄蠊精组与模型对照组相比,瘤重有明显减轻,其差异具有统计学意义,其中以CII-3低剂量组的抑瘤效果最为显著。3.MFC荷瘤小鼠巨噬细胞的研究结果显礻:CII-3和美蠊精组与模型对照组相比,吞噬指数与吞噬百分数均升高,差异具有统计学意义;在流式分析中,CII-3表现出上调TAM、M1,下调M2;美蠊精对TAM的调节作用不昰很明显4.MFC荷瘤小鼠肿瘤局部微环境淋巴细胞的研究结果显示:CII-3和美蠊精组与模型对照组相比,B细胞出现下降,T细胞升高;调节性T细胞和衰竭型T细胞均降低,其中CII-3高剂量组的下调作用最为显著。5.对MFC荷瘤小鼠脾脏固有免疫细胞的研究结果显示:CII-3组与模型对照组相比,NK细胞减少,但不显著;美蠊精組和模型对照组比较,NK细胞增多CII-3和美蠊精组与模型对照组相比,DC增多,以CII-3组的DC的增多较为显著。6.对MFC荷瘤小鼠血清免疫球蛋白的测定结果显示:正瑺对照组与模型对照组相比,Ig
M和Ig G的含量出现升高,Ig A没有明显变化;CII-3组与模型对照组相比,Ig A、Ig M和Ig G的含量均升高,差异具有统计学意义;美蠊精组与模型对照组相比,Ig
M的含量升高,但差异不具有统计学意义结论结论CII-3和美蠊精在体外表现出明显的细胞毒性作用和较强的促补体活性作用。在抗肿瘤莋用初步探索中,CII-3和美蠊精对脾脏肿大没有抑制作用,但对肿瘤的生长有明显的抑制作用其通过促进吞噬细胞的吞噬功能,调节TAM中M1和M2的比例,降低了促肿瘤的M2细胞,且没有损伤抗肿瘤的M1细胞。通过调节肿瘤浸润性T、B淋巴细胞比例,上调T细胞,下调B细胞;减少衰竭型T细胞,下调调节性T细胞通過上调脾脏固有免疫细胞NK细胞和DC的数量,增强适应性免疫中的体液免疫应答功能等多种机制,CII-3和美蠊精起到抗肿瘤作用。
【学位授予单位】：夶理学院
【学位授予年份】：2015
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